Mobilizace mezenchymálních kmenových buněk během transplantace jater

Mezenchymální kmenové buňky (MSC) jsou známým imunitním modulátorem s významnými imunosupresivními účinky. MSC se ukázaly jako slibná hranice v klinických studiích na lidech. Ukázalo se, že MSC jsou neimunogenní, což je činí schopnými transplantace přes alogenní bariéru. Tyto vlastnosti dělají z MSC ideálního kandidáta ke studiu, pokud se podílejí na snížení odmítnutí štěpu, v tomto případě transplantace jater. Pokud ano, informace by byly vysoce významné, protože by vedly k významnému snížení používání imunosupresiv s nahrazením MSC. To poslouží dvojím účelům: snížení klinických problémů spojených s farmakologickou imunosupresí (diskutované v dalším odstavci); další pomoc při ochraně transplantovaných jater MSC.

Použití imunosupresiv je zvláště důležité při transplantaci orgánů, včetně pacientů po transplantaci jater. Jejich použití je však doprovázeno řadou nevýhod, jako je reaktivace virové hepatitidy, oportunní infekce a další komplikace. Pokud lze MSC použít ke snížení používání imunosupresivních látek u pacientů po transplantaci jater, může to vést k významnému snížení morbidity a mortality v důsledku transplantace jater.

Jaterní makrofágy, tj. Kupfferovy buňky, mají známou funkci náboru monocytů do jater. Bylo prokázáno, že mají prozánětlivý účinek přitahováním monocytů do jater. Interagují také s hepatickými hvězdicovými buňkami (HSC), které mají profibrogenní funkce. Bylo však prokázáno, že mají také protizánětlivé účinky, což implikuje roli v regresi fibrózy. Jaterní makrofágy jsou zajímavým novým cílem pro terapeutickou intervenci a účinek steroidů na Kupfferovy buňky stejně jako jejich interakce s MSC nebyly plně prozkoumány.

Pacient bude připojen ke standardním monitorům Americké společnosti anesteziologů (ASA), včetně pulzní oxymetrie, elektrokardiogramu, neinvazivního monitorování krevního tlaku, teploty a kapnometrie. Pacienti budou uvedeni do celkové anestezie s endotracheální intubací a řízenou ventilací. Jak je u všech jaterních operací zvykem, bude zavedena arteriální linka pro monitorování krevního tlaku a pro opakované odběry krve. Pokud je to indikováno, zavede se katétr z plicní tepny.

Anestezie bude udržována pomocí těkavé látky. Paralýza bude zajištěna nedepolarizujícím neuromuskulárním blokátorem dle výběru anesteziologa.

Jak je standardní praxí, hodinové vzorky krve budou odebírány z arteriální linie pro analýzu Protime (PT)/mezinárodní normalizovaný poměr (INR)/kompletní krevní obraz/elektrolyty. Červené krvinky, čerstvá zmrazená plazma a krevní destičky budou podle potřeby transfuzovány.

Jak je obvyklé, příjemcům transplantovaných jater bude podána obvyklá dávka methylprednisolonu pro potlačení imunity v anhepatické fázi.

Během operace budou pacientům podstupujícím transplantaci odebrány tři vzorky krve z arteriální linie pro studijní účely. Každý vzorek bude obsahovat 3 cc krve.

Časové body pro vzorky krve jsou následující:

• Ihned po umístění arteriální linie jako základní linie
• V anhepatickém stadiu před injekcí steroidů
• Dvě hodiny po podání steroidů Člen studijního týmu po operaci odebere další dva 3 ml vzorky krve. První bude 1. pooperační den před podáním imunosupresiv a druhý pátý pooperační den. Takže u pacientů s transplantací jater bude pro studii odebráno celkem 15 mililitrů (ml) krve po dobu 5 dnů.

Podávání imunosupresivních léků a/nebo dávkování nebude jako součást výzkumné studie měněno.

Vzorek tkáně dárcovského orgánu jater bude také odebrán ke kultivaci MCS (vyjma informovaného souhlasu).

Pacienti kontrolní skupiny podstoupí resekci jater. Nedostanou dávku methylprednisolonu. Vzorky krve během operace budou odebírány v těchto časových bodech:

• bezprostředně po zavedení arteriální linie
• dvě hodiny po resekci jater. Po operaci budou odebrány další dva vzorky krve o objemu 3 ml. První se odebere první pooperační den a druhý pátý pooperační den nebo v den propuštění podle toho, co nastane dříve. Tyto vzorky odebere člen studijního týmu. Od pacientů s resekcí jater bude pro studijní účely odebráno celkem 12 ml krve po dobu 5 dnů.

Všechny vzorky krve budou okamžitě doručeny do laboratoře Dr. Rameswhara, která se nachází v MSB, E579. Relativní frekvence MSC přítomných v krvi těchto dvou skupin bude hodnocena průtokovou cytometrií. Data budou prezentována jako procento MSC/106 mononukleárních buněk. Budou provedeny statistické analýzy, aby se zjistilo, zda existují rozdíly mezi těmito dvěma skupinami subjektů.

Kromě výše uvedených studií s játry dárce ošetříme jaterní buňky také glukokortikoidy a následně vyšetříme játra na změny aquaporinu. Důvodem této úpravy je zjistit, zda aquaporin zvyšuje schopnost akumulovat vodu. Tato dodatečná studie nezmění vzorky, protože bude stačit pouze malá (<1 mg) tkáně.