Movilización de células madre mesenquimales durante el trasplante de hígado

Las células madre mesenquimales (MSC) son un modulador inmunológico conocido con efectos inmunosupresores significativos. Las MSC se han convertido en una frontera prometedora en los ensayos clínicos en humanos. Se ha demostrado que las MSC no son inmunogénicas, lo que las hace capaces de trasplantarse a través de una barrera alogénica. Estas cualidades hacen de las MSC un candidato ideal para estudiar si están involucradas en la reducción del rechazo del injerto, en este caso, el trasplante de hígado. De ser así, la información sería muy significativa ya que conduciría a una reducción significativa en el uso de inmunosupresores con el reemplazo de las MSC. Esto tendrá un doble propósito: reducir los problemas clínicos asociados con la inmunosupresión farmacológica (discutido en el siguiente párrafo); ayuda adicional en la protección del hígado trasplantado por las MSC.

El uso de inmunosupresores en particular es vital en el trasplante de órganos, incluidos los pacientes con trasplante de hígado. Sin embargo, su uso se acompaña de numerosos inconvenientes como reactivación de hepatitis virales, infecciones oportunistas y otras complicaciones. Si las MSC se pueden utilizar para disminuir el uso de agentes inmunosupresores en pacientes con trasplante hepático, se puede producir una disminución significativa de la morbilidad y la mortalidad como consecuencia del trasplante hepático.

Los macrófagos hepáticos, es decir, las células de Kupffer, tienen una función conocida de reclutar monocitos en el hígado. Se ha demostrado que tienen un efecto proinflamatorio al atraer monocitos al hígado. También interactúan con las células estrelladas hepáticas (HSC) que tienen funciones profibrogénicas. Sin embargo, también se ha demostrado que tienen efectos antiinflamatorios, lo que implica un papel en la regresión de la fibrosis. Los macrófagos hepáticos son un nuevo objetivo interesante para la intervención terapéutica y el efecto de los esteroides en las células de Kupffer, así como su interacción con las MSC, no se han explorado completamente.

El paciente estará conectado a monitores estándar de la Sociedad Estadounidense de Anestesiólogos (ASA), que incluyen oximetría de pulso, electrocardiograma, temperatura de monitoreo de presión arterial no invasiva y capnometría. Los pacientes serán colocados bajo anestesia general con intubación endotraqueal y ventilación controlada. Como es habitual en todas las cirugías de hígado, se insertará una línea arterial para controlar la presión arterial y para repetir las muestras de sangre. Si está indicado, se insertará un catéter en la arteria pulmonar.

La anestesia se mantendrá con un agente volátil. La parálisis se proporcionará utilizando un agente bloqueador neuromuscular no despolarizante elegido por el anestesiólogo.

Como es práctica estándar, se tomarán muestras de sangre cada hora de la línea arterial para analizar Protime (PT)/International Normalized Ratio (INR)/Conteo sanguíneo completo/electrolitos. Se transfundirán glóbulos rojos, plasma fresco congelado y plaquetas según sea necesario.

Como es habitual, a los receptores de trasplantes de hígado se les administrará la dosis habitual de metilprednisolona para la supresión inmunitaria en la fase anhepática.

Intraoperatoriamente, a los pacientes que se someten a un trasplante se les tomarán tres muestras de sangre de la línea arterial para fines de estudio. Cada muestra contendrá 3cc de sangre.

Los puntos de tiempo para las muestras de sangre son los siguientes:

• Inmediatamente después de la colocación de la vía arterial como referencia
• En la etapa anhepática previa a la inyección de esteroides
• Dos horas después de la administración de esteroides Después de la operación, un miembro del equipo del estudio tomará dos muestras de sangre adicionales de 3 ml. La primera será el día 1 postoperatorio previo a la administración de fármacos inmunosupresores y la segunda muestra el día cinco postoperatorio. Por lo tanto, para los pacientes con trasplante de hígado, se recolectará un total de 15 mililitros (mL) de sangre durante un período de 5 días para el estudio.

La administración de medicamentos inmunosupresores y/o la dosis no se modificará como componente del estudio de investigación.

También se tomará una muestra de tejido del órgano del donante de hígado para cultivo de MCS (consentimiento informado exento).

Los pacientes del grupo de control se someterán a una resección hepática. No recibirán la dosis de metilprednisolona. Las muestras de sangre intraoperatorias se recolectarán en estos momentos:

• inmediatamente después de la colocación de la línea arterial
• dos horas después de la resección hepática. Después de la operación, se tomarán dos muestras de sangre adicionales de 3 ml. La primera se tomará el día uno del postoperatorio y la segunda el día cinco del postoperatorio o el día del alta, lo que ocurra primero. Estas muestras serán recolectadas por un miembro del equipo de estudio. Se recolectará un total de 12 ml de sangre durante un período de 5 días de los pacientes con resección hepática para fines de estudio.

Todas las muestras de sangre se enviarán de inmediato al laboratorio del Dr. Rameswhar, ubicado en MSB, E579. La frecuencia relativa de MSC presentes en la sangre de los dos grupos se evaluará mediante citometría de flujo. Los datos se presentarán como el porcentaje de MSC/106 células mononucleares. Se realizarán análisis estadísticos para determinar si existen diferencias entre los dos grupos de sujetos.

Además de los estudios anteriores con el hígado del donante, también trataremos las células hepáticas con glucocorticoides y luego examinaremos el hígado en busca de cambios en la acuaporina. El motivo de esta modificación es determinar si la acuaporina aumenta la capacidad de acumular agua. Este estudio adicional no cambiará las muestras ya que solo una pequeña cantidad (<1 mg) de tejido será suficiente.