Mobilização de Células Tronco Mesenquimais Durante o Transplante Hepático

As células-tronco mesenquimais (MSCs) são um modulador imunológico conhecido com efeitos imunossupressores significativos. MSCs surgiram como uma fronteira promissora em ensaios clínicos em humanos. Demonstrou-se que as MSCs não são imunogênicas, tornando-as capazes de transplante através da barreira alogênica. Essas qualidades tornam as MSCs um candidato ideal para estudar se estiverem envolvidas na redução da rejeição do enxerto, neste caso, o transplante de fígado. Se sim, a informação seria altamente significativa, pois levaria à redução significativa do uso de imunossupressores com a substituição das MSCs. Isso servirá a dois propósitos: redução dos problemas clínicos associados à imunossupressão farmacológica (discutido no próximo parágrafo); auxílio adicional na proteção do fígado transplantado pelas MSCs.

O uso de imunossupressores, em particular, é vital no transplante de órgãos, incluindo pacientes com transplante de fígado. No entanto, seu uso é acompanhado de inúmeros inconvenientes, como reativação de hepatites virais, infecções oportunistas e outras complicações. Se as MSCs puderem ser usadas para diminuir o uso de agentes imunossupressores em pacientes com transplante de fígado, isso pode levar a uma diminuição significativa na morbidade e mortalidade como consequência do transplante de fígado.

Os macrófagos hepáticos, ou seja, as células de Kupffer, têm uma função conhecida de recrutar monócitos para o fígado. Eles demonstraram ter um efeito pró-inflamatório ao atrair monócitos para o fígado. Eles também interagem com as células estreladas hepáticas (HSCs) que possuem funções pró-fibrogênicas. No entanto, também demonstraram ter efeitos anti-inflamatórios, implicando um papel na regressão da fibrose. Os macrófagos hepáticos são um novo alvo interessante para a intervenção terapêutica e o efeito dos esteroides nas células de kupffer, bem como sua interação com as MSCs, não foram totalmente explorados.

O paciente será conectado a monitores padrão da American Society of Anesthesiologists (ASA), incluindo oximetria de pulso, eletrocardiograma, temperatura de monitoramento de pressão arterial não invasiva e capnometria. Os pacientes serão colocados sob anestesia geral com intubação endotraqueal e ventilação controlada. Como é habitual em todas as cirurgias hepáticas, uma linha arterial será inserida para monitoramento da pressão arterial e para amostras de sangue repetidas. Se indicado, um cateter de artéria pulmonar será inserido.

A anestesia será mantida com um agente volátil. A paralisia será fornecida usando um agente bloqueador neuromuscular não despolarizante de escolha do anestesiologista.

Como é prática padrão, amostras de sangue de hora em hora serão coletadas da linha arterial para analisar Protime(PT)/International Normalized Ratio (INR)/Complete Blood Count/eletrólitos. Glóbulos vermelhos, plasma fresco congelado e plaquetas serão transfundidos conforme necessário.

Como é habitual, os receptores de transplante de fígado receberão a dose habitual de metilprednisolona para supressão imunológica na fase anepática.

No intraoperatório, os pacientes submetidos a transplante terão três amostras de sangue coletadas da linha arterial para fins de estudo. Cada amostra conterá 3 cc de sangue.

Os pontos de tempo para amostras de sangue são os seguintes:

• Imediatamente após a colocação da linha arterial como linha de base
• No estágio anepático antes da injeção de esteroides
• Duas horas após a administração de esteroides No pós-operatório, duas amostras adicionais de sangue de 3 mL serão coletadas por um membro da equipe do estudo. A primeira será no 1º dia de pós-operatório antes da administração de drogas imunossupressoras e a segunda amostra no quinto dia de pós-operatório. Assim, para pacientes com transplante de fígado, um total de 15 mililitros (mL) de sangue durante um período de 5 dias será coletado para o estudo.

A administração de drogas imunossupressoras e/ou a dosagem não serão alteradas como um componente do estudo de pesquisa.

Uma amostra de tecido do órgão do doador de fígado também será coletada para cultura de MCSs (consentimento informado isento).

Os pacientes do grupo controle serão submetidos à ressecção hepática. Eles não receberão a dose de metilprednisolona. Amostras de sangue intra-operatórias serão coletadas nestes pontos de tempo:

• imediatamente após a colocação da linha arterial
• duas horas após a ressecção hepática. No pós-operatório, serão coletadas duas amostras adicionais de sangue de 3 mL. A primeira será tomada no primeiro dia de pós-operatório e a segunda no quinto dia de pós-operatório ou no dia da alta, o que ocorrer primeiro. Essas amostras serão coletadas por um membro da equipe de estudo. Um total de 12 mL de sangue durante um período de 5 dias será coletado dos pacientes de ressecção hepática para fins de estudo.

Todas as amostras de sangue serão imediatamente entregues ao laboratório do Dr. Rameswhar, localizado em MSB, E579. A frequência relativa de MSCs presentes no sangue dos dois grupos será avaliada por citometria de fluxo. Os dados serão apresentados como a porcentagem de MSCs/106 células mononucleares. Análises estatísticas serão realizadas para determinar se existem diferenças entre os dois grupos de sujeitos.

Além dos estudos acima com o fígado doador, também trataremos as células hepáticas com glicocorticóides e, em seguida, examinaremos o fígado quanto a alterações na aquaporina. A razão para esta modificação é determinar se a aquaporina aumenta a capacidade de acumular água. Este estudo adicional não alterará as amostras, pois apenas um pequeno (<1 mg) de tecido será suficiente.