Mobilisering af mesenkymale stamceller under levertransplantation

Mesenkymale stamceller (MSC'er) er en kendt immunmodulator med betydelige immunsuppressive virkninger. MSC'er er dukket op som en lovende grænse i kliniske forsøg på mennesker. MSC'er har vist sig at være ikke-immunogene, hvilket gør dem i stand til at transplantere på tværs af allogen barriere. Disse kvaliteter gør MSC'er til en ideel kandidat til at studere, hvis de er involveret i at reducere afstødningen af ​​transplantatet, i dette tilfælde levertransplantation. Hvis det er tilfældet, ville informationen være meget vigtig, da den ville føre til en betydelig reduktion i brugen af ​​immunsuppressiva med erstatning af MSC'er. Dette vil tjene to formål: reducerede kliniske problemer forbundet med farmakologisk immunsuppression (diskuteret i næste afsnit); yderligere hjælp til MSC'ernes beskyttelse af den transplanterede lever.

Især brugen af ​​immunsuppressiva er afgørende ved organtransplantation, herunder levertransplantationspatienter. Imidlertid er deres anvendelse ledsaget af adskillige ulemper, såsom reaktivering af viral hepatitis, opportunistiske infektioner og andre komplikationer. Hvis MSC'er kan bruges til at reducere brugen af ​​immunsuppressive midler hos levertransplantationspatienter, kan det føre til et signifikant fald i morbiditet og dødelighed som følge af levertransplantation.

Hepatiske makrofager, dvs. Kupffer-celler, har en kendt funktion med at rekruttere monocytter til leveren. De har vist sig at have en proinflammatorisk effekt ved at tiltrække monocytter ind i leveren. De interagerer også med hepatiske stellatceller (HSC'er), som har pro-fibrogene funktioner. Imidlertid har de også vist sig at have antiinflammatoriske virkninger, hvilket implicerer en rolle i fibrose-regression. Hepatiske makrofager er et interessant nyt mål for terapeutisk intervention, og virkningen af ​​steroider på kupffer-celler såvel som deres interaktion med MSC'er er ikke blevet fuldt ud undersøgt.

Patienten vil blive knyttet til standardmonitorer fra American Society of Anesthesiologists (ASA) inklusive pulsoximetri, elektrokardiogram, ikke-invasiv blodtryksovervågningstemperatur og kapnometri. Patienterne vil blive lagt under generel anæstesi med endotracheal intubation og kontrolleret ventilation. Som det er sædvanligt for alle leveroperationer, vil der blive indsat en arteriel linje til blodtryksovervågning og til gentagne blodprøver. Hvis indiceret, vil et lungearteriekateter blive indsat.

Anæstesi vil blive opretholdt ved hjælp af et flygtigt middel. Lammelse vil blive givet ved hjælp af et ikke-depolariserende neuromuskulært blokerende middel efter anæstesiologens valg.

Som det er standardpraksis vil der blive taget timelige blodprøver fra den arterielle linje for at analysere Protime(PT)/International Normalized Ratio (INR)/Complete Blood Count/elektrolytter. Røde blodlegemer, friskfrosset plasma og blodplader vil blive transfunderet efter behov.

Som det er sædvanligt, vil levertransplanterede modtagere få den sædvanlige dosis methylprednisolon til immunsuppression i den anhepatiske fase.

Intraoperativt vil patienter, der gennemgår transplantation, have tre blodprøver indsamlet fra arterielinjen til undersøgelsesformål. Hver prøve vil indeholde 3 cc blod.

Tidspunkterne for blodprøver er som følger:

• Umiddelbart efter arteriel linjeplacering som basislinje
• I det anhepatiske stadie før steroidinjektion
• To timer efter administration af steroider Post-operativt vil to yderligere 3 ml blodprøver blive taget af et medlem af undersøgelsesteamet. Den første vil være på postoperativ dag 1 før administration af immunsuppressive lægemidler og den anden prøve på postoperativ dag fem. For levertransplantationspatienter vil der således blive indsamlet i alt 15 milliliter (ml) blod over en periode på 5 dage til undersøgelsen.

Administrationen af ​​immunsuppressionslægemidler og/eller dosering vil ikke blive ændret som en del af forskningsstudiet.

En vævsprøve af leverdonororganet vil også blive taget til dyrkning af MCS'er (undtaget informeret samtykke).

Kontrolgruppepatienter vil gennemgå leverresektion. De vil ikke modtage dosis af methylprednisolon. Intraoperativt blodprøver vil blive indsamlet på disse tidspunkter:

• umiddelbart efter anbringelse af arteriel linje
• to timer efter leverresektion. Postoperativt vil der blive taget to yderligere 3 ml blodprøver. Den første tages på postoperativ dag et og den anden på postoperativ dag fem eller på udskrivelsesdagen, alt efter hvad der kommer først. Disse prøver vil blive indsamlet af et studieteammedlem. I alt 12 ml blod over en periode på 5 dage vil blive indsamlet fra leverresektionspatienter til undersøgelsesformål.

Alle blodprøver vil straks blive leveret til Dr. Rameswhars laboratorium, som ligger i MSB, E579. Den relative hyppighed af MSC'er til stede i blodet i de to grupper vil blive vurderet ved flowcytometri. Dataene vil blive præsenteret som procentdelen af ​​MSC'er/106 mononukleære celler. Statistiske analyser vil blive udført for at afgøre, om der er forskelle mellem de to grupper af forsøgspersoner.

Udover ovenstående studier med donorleveren vil vi også behandle leverceller med glukokortikoider og derefter undersøge leveren for ændringer i aquaporin. Årsagen til denne modifikation er at bestemme, om aquaporin øger evnen til at akkumulere vand. Denne yderligere undersøgelse vil ikke ændre prøverne, da kun en lille (<1mg) væv vil være tilstrækkelig.