Mobilizacja mezenchymalnych komórek macierzystych podczas przeszczepu wątroby

Mezenchymalne komórki macierzyste (MSC) są znanym modulatorem odporności o znaczącym działaniu immunosupresyjnym. MSC okazały się obiecującą granicą w badaniach klinicznych na ludziach. Wykazano, że MSC są nieimmunogenne, co czyni je zdolnymi do przeszczepu przez barierę allogeniczną. Te cechy sprawiają, że MSC są idealnymi kandydatami do badań, jeśli biorą udział w zmniejszaniu odrzucania przeszczepu, w tym przypadku przeszczepu wątroby. Jeśli tak, informacja byłaby bardzo istotna, ponieważ doprowadziłaby do znacznego ograniczenia stosowania leków immunosupresyjnych wraz z wymianą komórek MSC. Będzie to służyć dwóm celom: zmniejszeniu problemów klinicznych związanych z farmakologiczną immunosupresją (omówione w następnym akapicie); dodatkowa pomoc w ochronie przeszczepionej wątroby przez MSC.

Stosowanie leków immunosupresyjnych jest szczególnie istotne przy przeszczepianiu narządów, w tym u pacjentów po przeszczepieniu wątroby. Jednak ich stosowaniu towarzyszą liczne wady, takie jak reaktywacja wirusowego zapalenia wątroby, infekcje oportunistyczne i inne powikłania. Jeśli MSC można wykorzystać do zmniejszenia stosowania środków immunosupresyjnych u pacjentów po przeszczepie wątroby, może to prowadzić do znacznego zmniejszenia zachorowalności i śmiertelności w wyniku przeszczepu wątroby.

Makrofagi wątrobowe, tj. komórki Kupffera, mają znaną funkcję rekrutacji monocytów do wątroby. Wykazano, że mają działanie prozapalne poprzez przyciąganie monocytów do wątroby. Oddziałują również z komórkami gwiaździstymi wątroby (HSC), które pełnią funkcje profibrogenne. Wykazano jednak, że mają one również działanie przeciwzapalne, co sugeruje rolę w regresji zwłóknienia. Makrofagi wątrobowe są interesującym nowym celem interwencji terapeutycznych, a wpływ steroidów na komórki kupffera, jak również ich interakcje z MSC nie zostały w pełni zbadane.

Pacjent zostanie podłączony do standardowych monitorów Amerykańskiego Towarzystwa Anestezjologicznego (ASA), w tym pulsoksymetrii, elektrokardiogramu, nieinwazyjnego monitorowania ciśnienia krwi, temperatury i kapnometrii. Pacjenci zostaną poddani znieczuleniu ogólnemu z intubacją dotchawiczą i kontrolowaną wentylacją. Jak to jest w zwyczaju przy wszystkich operacjach wątroby, zostanie wprowadzona linia tętnicza w celu monitorowania ciśnienia krwi i ponownego pobrania krwi. Jeśli jest to wskazane, zostanie wprowadzony cewnik do tętnicy płucnej.

Znieczulenie będzie podtrzymywane przy użyciu środka wziewnego. Paraliż zostanie zapewniony przy użyciu niedepolaryzującego środka blokującego przewodnictwo nerwowo-mięśniowe, wybranego przez anestezjologa.

Zgodnie ze standardową praktyką co godzinę pobierane będą próbki krwi z linii tętniczej w celu analizy protime (PT)/międzynarodowego współczynnika znormalizowanego (INR)/morfologii krwi/elektrolitów. Krwinki czerwone, świeżo mrożone osocze i płytki krwi będą przetaczane w razie potrzeby.

Zgodnie ze zwyczajem biorcy przeszczepu wątroby otrzymają zwyczajową dawkę metyloprednizolonu w celu zahamowania odporności w fazie anhepatycznej.

Śródoperacyjnie od pacjentów poddawanych przeszczepowi zostaną pobrane trzy próbki krwi z linii tętniczej do celów badawczych. Każda próbka będzie zawierać 3 cm3 krwi.

Punkty czasowe pobierania próbek krwi są następujące:

• Bezpośrednio po umieszczeniu linii tętniczej jako linia podstawowa
• W fazie anhepatycznej przed wstrzyknięciem steroidu
• Dwie godziny po podaniu sterydów Po operacji członek zespołu badawczego pobierze dwie dodatkowe 3 ml próbki krwi. Pierwsza zostanie pobrana w 1. dniu po operacji przed podaniem leków immunosupresyjnych, a druga w piątym dniu po operacji. Tak więc od pacjentów po przeszczepie wątroby do badania zostanie pobrane łącznie 15 mililitrów (ml) krwi w ciągu 5 dni.

Podawanie leków immunosupresyjnych i/lub dawkowanie nie zostanie zmienione jako element badania naukowego.

Próbka tkanki narządu dawcy wątroby zostanie również pobrana do hodowli MCS (zwolnienie ze świadomej zgody).

Pacjenci z grupy kontrolnej zostaną poddani resekcji wątroby. Nie otrzymają dawki metyloprednizolonu. Śródoperacyjnie próbki krwi będą pobierane w następujących punktach czasowych:

• bezpośrednio po założeniu linii tętniczej
• dwie godziny po resekcji wątroby. Po operacji zostaną pobrane dwie dodatkowe próbki krwi o objętości 3 ml. Pierwsza zostanie podjęta w pierwszym dniu po operacji, a druga w piątym dniu po operacji lub w dniu wypisu, w zależności od tego, co nastąpi wcześniej. Próbki te zostaną pobrane przez członka zespołu badawczego. Łącznie 12 ml krwi w ciągu 5 dni zostanie pobrane od pacjentów po resekcji wątroby do celów badawczych.

Wszystkie próbki krwi zostaną natychmiast dostarczone do laboratorium dr Rameswhar, znajdującego się w MSB, E579. Względna częstość obecności MSC we krwi obu grup zostanie oceniona za pomocą cytometrii przepływowej. Dane zostaną przedstawione jako odsetek komórek jednojądrzastych MSC/106. Przeprowadzone zostaną analizy statystyczne w celu ustalenia, czy istnieją różnice między dwiema grupami badanych.

Oprócz powyższych badań z wątrobą dawcy, będziemy również leczyć komórki wątroby glikokortykosteroidami, a następnie badać wątrobę pod kątem zmian w akwaporynie. Powodem tej modyfikacji jest ustalenie, czy akwaporyna zwiększa zdolność do gromadzenia wody. To dodatkowe badanie nie zmieni próbek, ponieważ wystarczy niewielka (<1 mg) tkanka.