Mobilisation des cellules souches mésenchymateuses pendant la transplantation hépatique

Les cellules souches mésenchymateuses (CSM) sont un modulateur immunitaire connu avec des effets immunosuppresseurs importants. Les CSM sont apparues comme une frontière prometteuse dans les essais cliniques humains. Les CSM se sont avérées non immunogènes, ce qui les rend capables de transplantation à travers la barrière allogénique. Ces qualités font des CSM un candidat idéal pour étudier si elles sont impliquées dans la réduction du rejet du greffon, en l'occurrence, la greffe du foie. Si tel est le cas, les informations seraient très importantes car elles conduiraient à une réduction significative de l'utilisation des immunosuppresseurs avec le remplacement des CSM. Cela servira un double objectif : réduire les problèmes cliniques associés à l'immunosuppression pharmacologique (discutés dans le paragraphe suivant) ; une aide supplémentaire dans la protection du foie greffé par les CSM.

L'utilisation d'immunosuppresseurs en particulier est vitale dans la transplantation d'organes, y compris chez les patients transplantés hépatiques. Cependant, leur utilisation s'accompagne de nombreux inconvénients tels que la réactivation d'hépatites virales, d'infections opportunistes et d'autres complications. Si les CSM peuvent être utilisées pour réduire l'utilisation d'agents immunosuppresseurs chez les patients transplantés hépatiques, cela peut entraîner une diminution significative de la morbidité et de la mortalité à la suite de la transplantation hépatique.

Les macrophages hépatiques, c'est-à-dire les cellules de Kupffer, ont une fonction connue de recrutement de monocytes dans le foie. Il a été démontré qu'ils ont un effet pro-inflammatoire en attirant les monocytes dans le foie. Ils interagissent également avec les cellules étoilées hépatiques (CSH) qui ont des fonctions pro-fibrogéniques. Cependant, il a été démontré qu'ils ont également des effets anti-inflammatoires, impliquant un rôle dans la régression de la fibrose. Les macrophages hépatiques sont une nouvelle cible intéressante pour une intervention thérapeutique et l'effet des stéroïdes sur les cellules de Kupffer ainsi que leur interaction avec les MSC n'ont pas été pleinement explorés.

Le patient sera attaché aux moniteurs standard de l'American Society of Anesthesiologists (ASA), y compris l'oxymétrie de pouls, l'électrocardiogramme, la température de surveillance non invasive de la pression artérielle et la capnométrie. Les patients seront placés sous anesthésie générale avec intubation endotrachéale et ventilation contrôlée. Comme il est d'usage pour toutes les chirurgies du foie, une ligne artérielle sera insérée pour la surveillance de la pression artérielle et pour les prélèvements sanguins répétés. Si indiqué, un cathéter artériel pulmonaire sera inséré.

L'anesthésie sera maintenue à l'aide d'un agent volatil. La paralysie sera fournie à l'aide d'un agent de blocage neuromusculaire non dépolarisant au choix de l'anesthésiste.

Comme c'est la pratique standard, des échantillons de sang toutes les heures seront prélevés de la ligne artérielle pour analyser le Protime (PT)/le rapport international normalisé (INR)/la numération globulaire complète/les électrolytes. Les globules rouges, le plasma frais congelé et les plaquettes seront transfusés si nécessaire.

Comme d'habitude, les receveurs de greffe de foie recevront la dose habituelle de méthylprednisolone pour la suppression immunitaire dans la phase anhépatique.

En peropératoire, les patients subissant une greffe auront trois échantillons de sang prélevés à partir de la ligne artérielle à des fins d'étude. Chaque échantillon contiendra 3 cc de sang.

Les points de temps pour les échantillons de sang sont les suivants :

• Immédiatement après le placement de la ligne artérielle comme ligne de base
• Au stade anhépatique avant l'injection de stéroïdes
• Deux heures après l'administration de stéroïdes En post-opératoire, deux échantillons sanguins supplémentaires de 3 ml seront prélevés par un membre de l'équipe d'étude. Le premier sera le jour postopératoire 1 avant l'administration de médicaments immunosuppresseurs et le deuxième échantillon le cinquième jour postopératoire. Ainsi, pour les patients transplantés hépatiques, un total de 15 millilitres (mL) de sang sur une période de 5 jours sera prélevé pour l'étude.

L'administration de médicaments immunosuppresseurs et/ou la posologie ne seront pas modifiées dans le cadre de l'étude de recherche.

Un échantillon de tissu de l'organe du donneur de foie sera également prélevé pour culture MCS (consentement éclairé exempté).

Les patients du groupe témoin subiront une résection hépatique. Ils ne recevront pas la dose de méthylprednisolone. Des échantillons de sang peropératoires seront prélevés à ces moments :

• immédiatement après la pose de la ligne artérielle
• deux heures après la résection hépatique. Après l'opération, deux échantillons sanguins supplémentaires de 3 ml seront prélevés. Le premier sera pris le premier jour postopératoire et le second le cinquième jour postopératoire ou le jour de la sortie, selon la première éventualité. Ces échantillons seront recueillis par un membre de l'équipe d'étude. Un total de 12 ml de sang sur une période de 5 jours sera prélevé sur les patients ayant subi une résection hépatique à des fins d'étude.

Tous les échantillons de sang seront immédiatement livrés au laboratoire du Dr Rameswhar, situé au MSB, E579. La fréquence relative des CSM présentes dans le sang des deux groupes sera évaluée par cytométrie en flux. Les données seront présentées sous forme de pourcentage de cellules mononucléaires MSC/106. Des analyses statistiques seront effectuées pour déterminer s'il existe des différences entre les deux groupes de sujets.

En plus des études ci-dessus avec le foie du donneur, nous traiterons également les cellules hépatiques avec des glucocorticoïdes, puis examinerons le foie pour détecter les modifications de l'aquaporine. La raison de cette modification est de déterminer si l'aquaporine augmente la capacité d'accumulation d'eau. Cette étude supplémentaire ne changera pas les échantillons puisque seul un petit (<1mg) de tissu sera suffisant.