Aryl Hydrocarbon Receptor Interacting Protein (AIP) Mutacje genów w akromegalii (AIP)

Badania przesiewowe w kierunku mutacji genu AIP są zalecane u pacjentów z gruczolakami przysadki o początku w dzieciństwie, guzami wydzielającymi GH lub PRL, którzy zostali zdiagnozowani przed ukończeniem 30. Wiadomo również, że mutacja AIP jest zwykle związana z bardziej agresywnymi zachowaniami klinicznymi z niewyjaśnionych przyczyn.

Częstość występowania mutacji AIP w populacji tureckiej oraz rodzaje mutacji nie zostały wcześniej określone. Głównym celem niniejszego badania jest określenie częstości występowania mutacji genu AIP oraz związku z zachowaniem klinicznym i nowotworowym w podgrupie tureckich pacjentów z akromegalią. Jeśli u niektórych pacjentów zostanie wykryta mutacja genu AIP, możliwe będzie przebadanie rodziny pacjenta pod kątem obecności mutacji AIP lub przynajmniej obecności gruczolaka przysadki.

Pacjenci z akromegalią, którzy są obserwowani na wydziale endokrynologii Uniwersytetu Medycznego Erciyes, zostaną włączeni do badania. Rejestrowane będą dane kliniczne i laboratoryjne oraz określany będzie stan remisji pacjentów. Każdy ekson genu AIP, w tym punkty splicingowe, zostanie odtworzony przez PCR i będzie analizowany pod kątem obecności mutacji za pomocą analizy sekwencji. Genomowy DNA zostanie wyizolowany z próbek krwi obwodowej pacjentów z akromegalią przy użyciu minizestawu QIAamp DNA blood mini kit (QIA-GEN, Mediolan, Włochy) zgodnie z instrukcją producenta. Pięćdziesiąt nanogramów genomowego DNA zostanie zamplifikowane za pomocą starterów, jak podano. Cały gen AIP będzie badany u pacjentów z akromegalią oraz w grupie kontrolnej osób zdrowych. Każdy ekson AIP z każdej próbki DNA zostanie zamplifikowany przy użyciu PCR. Sześć eksonów AIP zostanie zamplifikowanych przy użyciu polimerazy DNA Thermo Taq w następujących warunkach: wstępna denaturacja w 96°C przez 5 min, następnie 34 cykle w 94°C przez 45 s, 60°C przez 45 s, 72°C przez 1 min, następnie końcowy etap wydłużania w 72°C przez 7 min. Aplikacje PCR będą sprawdzane na 2% żelu agarozowym. Produkty PCR zostaną oczyszczone za pomocą zestawu do oczyszczania PCR. Zmiany sekwencyjne zostaną określone przez sekwencjonowanie dwukierunkowe. Sześć eksonów AIP zostanie zsekwencjonowanych przy użyciu Beckman CEQ 8000.

Przypadki będą dalej analizowane pod kątem cech klinicznych w zależności od obecności mutacji genu AIP.

Określona zostanie częstość występowania mutacji genu AIP, kliniczne odzwierciedlenie obecności mutacji AIP, a po zakończeniu badania udzielona zostanie konsultacja genetyczna nosicielom mutacji genu AIP.