Wpływ terapii obniżającej stężenie kwasu moczowego na jakość nasienia mężczyzn z dną moczanową: prospektywne badanie kohortowe (INITIAL)

1. Leki badawcze. W tym badaniu zostaną ocenione trzy rodzaje leków obniżających stężenie kwasu moczowego: allopurynol, febuksostat i benzbromaron.
2. Projekt badania i obliczenie wielkości próby. Badanie to zostało zaprojektowane jako jednoośrodkowe prospektywne badanie kohortowe. Jako grupę kontrolną wybrano dobranych pod względem wieku dawców nasienia z banku nasienia ludzkiego Trzeciego Szpitala Uniwersytetu Pekińskiego. Po dokładnym przeszukaniu odpowiedniej literatury nie ma doniesień o podobnych badaniach, więc nie jest możliwe dokładne oszacowanie liczebności próby. Dlatego w tym badaniu zaplanowano włączenie 20 pacjentów z dną moczanową, którzy stosowali odpowiednio allopurynol, febuksostat i benzbromaron w celu zmniejszenia stężenia kwasu moczowego. Jako kontrolę wybrano 60 normalnych męskich dawców. Planuje się rekrutację co miesiąc 5 pacjentów z dną moczanową i 5 mężczyzn z grupy kontrolnej. Dlatego całe badanie musi trwać co najmniej 12 miesięcy od rozpoczęcia
3. Proces badawczy. Proces tego badania nie wpływa na rutynową diagnostykę i procedury leczenia pacjentów z dną moczanową. Nasz zespół badawczy tworzą lekarze specjalizujący się w reumatologii i andrologii. Dlatego możemy przeprowadzić rutynową diagnostykę kliniczną i leczenie zgodnie ze specyficznymi warunkami pacjentów z dną moczanową.

1) Okres przesiewowy. Zajmie to około 2 tygodni, w tym następujące formularze:

1. Pacjenci z dną moczanową mają ostry atak. Zgodnie z wytycznymi dotyczącymi diagnostyki i leczenia dny moczanowej, w pierwszej kolejności należy zastosować u nich leczenie przeciwzapalne i przeciwbólowe. Cyklooksygenaza (COX) nieselektywne niesteroidowe leki przeciwzapalne (NLPZ) lub kolchicyna mogą być wybrane do kontrolowania ostrych objawów. Następnie wykonaliśmy badanie nasienia po całkowitym ustąpieniu obrzęku i bólu stawów. Jeśli pacjent spełnia nasze kryteria przyjęcia, zgodnie z praktyką kliniczną należy rozpocząć leczenie hipotensyjne. I ten czas traktujemy jako tydzień 0. NLPZ lub kolchicynę można stosować profilaktycznie przez co najmniej 2 tygodnie w połączeniu z leczeniem obniżającym moczan w przypadku zaostrzenia dny moczanowej.

2. Pacjenci z dną moczanową w remisji. U takich pacjentów przeprowadzamy bezpośrednio badanie nasienia. Jeśli wyniki spełniają nasze kryteria przyjęcia, zgodnie z praktyką kliniczną należy rozpocząć leczenie hipotensyjne. Ten czas również traktujemy jako tydzień 0. A zapobiegawcze stosowanie NLPZ lub kolchicyny jest takie samo jak powyżej.

   2) Etap kontynuacji. Cykl obserwacji obliczono po rozpoczęciu leczenia obniżającego moczan. Podczas badań przesiewowych oraz wizyt w 2, 4, 8 i 12 tygodniu wykryjemy rutynę we krwi, rutynę w moczu, czynność wątroby i nerek oraz poziom kwasu moczowego w surowicy. Pacjenci otrzymają powtórną analizę nasienia odpowiednio w 4. i 12. tygodniu. Jednocześnie zbieramy wszystkie odpowiednie dane na formularzu opisu przypadku.

   4, wycofanie pacjenta. Pacjenci mogą zrezygnować z badania w dowolnym momencie. Naukowcy mogą również przekonać pacjentów do wycofania się z różnych powodów, w tym wyjściowych badań przesiewowych pod kątem jakości nasienia poniżej standardów Światowej Organizacji Zdrowia (WHO), zdarzeń niepożądanych, obaw dotyczących bezpieczeństwa lub nieprzestrzegania przez pacjentów schematu badania.

   5、Wyeliminowane przypadki. Z jakiegoś powodu te, które nie zostały zakończone zgodnie z planem i których zapisy obserwacji są niekompletne, są eliminowanymi przypadkami. Te, które zostały przerwane z powodu poważnych działań niepożądanych, powinny być traktowane jako przypadki działań niepożądanych i nie powinny być uwzględniane w statystykach analizy porównawczej nasienia.

   6, schemat leczenia. Wyjściowe badanie przesiewowe: jeśli pacjent spełnia kryteria selekcji i nie jest w okresie napadu dny moczanowej, możemy rozważyć bezpośrednie rozpoczęcie leczenia lekami obniżającymi stężenie kwasu moczowego. Wybór leków obniżających stężenie kwasu moczowego powinien opierać się na tabu pacjenta dotyczącym używania narkotyków w celu dokonania rzeczywistego wyboru. Jeśli pacjent jest w fazie ataku ostrego zapalenia stawów, należy opanować ostre objawy i rozważyć zastosowanie nieselektywnych NLPZ COX, a dopiero po całkowitym ustąpieniu objawów stawowych rozpocząć leczenie kwasem moczowym.

Terapia obniżająca stężenie kwasu moczowego: rozpoczęcie leczenia obniżającego stężenie kwasu moczowego musi być połączone z nieselektywnymi NLPZ COX lub kolchicyną, aby zapobiec dnie moczanowej.

• Allopurinol, dawka początkowa 125mg raz dziennie. Jeśli po 2 tygodniach stężenie kwasu moczowego w surowicy wynosi nie mniej niż 360 µm/l, dawkę można zwiększyć do 250 mg raz dziennie, przy czym najwyższa dawka nie przekracza 500 mg dziennie.

  • Febuksostat, dawka początkowa 20mg raz dziennie. Jeśli po 2 tygodniach stężenie kwasu moczowego w surowicy jest nie mniejsze niż 360 µm/L, dawkę można zwiększyć do 40 mg raz dziennie, przy czym najwyższa dawka nie przekracza 80 mg dziennie.

    • Benzbromaron, dawka początkowa 25mg raz dziennie. Jeśli po 2 tygodniach stężenie kwasu moczowego w surowicy jest nie mniejsze niż 360 µm/l, dawkę można zwiększyć do 50 mg raz na dobę, przy czym najwyższa dawka nie przekracza 100 mg na dobę.

      7, ocena. Do oceny męskiej płodności wykorzystamy trzy metody: podstawową analizę nasienia, analizę integralności DNA plemników oraz pomiar uszkodzeń plemników poprzez stres oksydacyjny.

      1. Podstawową analizę nasienia i fragmentację DNA plemników przeprowadzono w Centrum Medycyny Rozrodu Trzeciego Szpitala Uniwersyteckiego w Pekinie, stosując standardowe procedury laboratoryjne, zgodnie z wytycznymi WHO (wydanie piąte z 2010 r.). Jest to mikroskopowa ocena świeżego nasienia, która ocenia stężenie plemników, żywotność, ruchliwość i morfologię. Zamrożone próbki nasienia zostały ocenione pod kątem uszkodzeń spowodowanych stresem oksydacyjnym przez centralne laboratorium kliniczne specjalizujące się w medycynie molekularnej.

      2. Badanie nasienia pod kątem fragmentacji DNA i uszkodzeń oksydacyjnych:

         Test fragmentacji DNA plemników wykorzystano do oceny integralności DNA plemników w oparciu o raport literaturowy (Cytometry 1985; 6(3): 238-53), w którym DNA plemników barwi się oranżem akrydynowym i analizuje za pomocą cytometrii przepływowej. Następnie wykonuje się dwa pomiary : %DFI (wskaźnik fragmentacji DNA), który wskazuje poziom pęknięć DNA plemników i %HDS (wysoka zdolność barwienia DNA), który koreluje z poziomem niedojrzałych plemników i komórek somatycznych, takich jak krwinki białe. Uszkodzenie plemników spowodowane stresem oksydacyjnym (OS) mierzono za pomocą testu Oxidative Stress AddductsTM (ReproSource, Inc. Woburn, MA), który mierzy za pomocą pektrofotometrii poziomy cząsteczek (adduktów) kowalencyjnie utworzonych w reakcji aldehydów lipidowych obecnych w błonach plemników w warunkach OS ze strukturami komórkowymi, takimi jak DNA, w oparciu o metodę opisaną wcześniej przez Gomez i in. (Gut 1987; 28(8): 1008-12).

      3. Próbki surowicy do analizy kwasu moczowego w surowicy pobierano w czasie badania przesiewowego, w 2., 4., 8. i 12. tygodniu lub przedwcześnie.

         8、Pobieranie próbek, konserwacja i niszczenie

      a. Próbki nasienia pobrano przez masturbację po zalecanym okresie 2-3 dni bez wytrysku w sali pobierania nasienia Trzeciego Szpitala Uniwersytetu Pekińskiego po podpisaniu świadomej zgody zgodnie ze schematem badania. Po upłynnieniu nasienia (od 30 minut do 1 godziny) podwielokrotność użyto do analizy nasienia, a drugą podwielokrotność surowego nasienia zamrożono w ciągu 2 godzin od pobrania w temperaturze -80°C.

      b. Próbki nasienia są równomiernie konserwowane aż do zniszczenia po zakończeniu tej próby. Oczekuje się, że czas testowania wyniesie 2-3 lata.

      c. Pod koniec próby próbki nasienia zostały równomiernie zniszczone. Zamrożone nasienie ponownie ogrzano do temperatury pokojowej i całkowicie nasączono 0,5% środkiem dezynfekującym podchlorynem sodu. Ostatecznie roztwór dezynfekcyjny zawierający nasienie potraktowano jako odpad medyczny.

      9, kontrola jakości.

      a. Prowadzić działania reklamowe i edukacyjne wśród badanych w celu zmniejszenia wskaźnika utraty obserwacji; b. Zastosowano system analizy jakości nasienia do wykrywania wskaźników jakości nasienia, takich jak gęstość plemników, ruchliwość, wskaźnik ruchliwości do przodu i tak dalej. Kontrolę jakości próbek wzorcowych przeprowadzono na każde 10 przebadanych próbek.

      10, analiza statystyczna. Do analizy statystycznej wykorzystamy oprogramowanie SPSS 20.0. Wszystkie testy statystyczne są testami dwustronnymi, wartość P mniejsza lub równa 0,05 zostanie uznana za istotną statystycznie. Porównując różnicę efektu leczniczego między parametrami przed i po leczeniu dny moczanowej, zastosowano sparowany test t, jeśli dane pomiarowe były zgodne z rozkładem normalnym. Do porównania między różnymi grupami interwencyjnymi zastosowano niezależny test t-próby. Test nieparametryczny stosuje się, gdy dane pomiarowe nie są zgodne z rozkładem normalnym. Do porównania danych zliczania między grupami zastosowano test chi-kwadrat.