Wykrywanie krążącego DNA nerek u pacjentów po przeszczepieniu nerki w obliczu epizodu odrzucenia przeszczepu (DART-RREGREF)

Przeszczepienie nerki pozostaje standardowym sposobem leczenia pacjentów ze schyłkową niewydolnością nerek. Zapewnia pacjentowi lepszą jakość życia1 i większą szansę na przeżycie, przy niższych kosztach opieki w porównaniu z dializą. Choć we Francji co roku przeprowadza się ponad 3000 przeszczepów nerek, na liście oczekujących na przeszczep widnieje ponad 20 000 kandydatów, co świadczy o poważnym niedoborze przeszczepów. Ograniczenie degradacji przeszczepu nerki pozwoliłoby uniknąć powrotów pacjentów do dializ i ograniczyć niedobór przeszczepów.

Na poziomie diagnostycznym rutynowe monitorowanie funkcjonalności przeszczepu po przeszczepieniu nerki opiera się na wykorzystaniu nieswoistych markerów, takich jak kreatynina w surowicy (pozwalająca na ocenę współczynnika filtracji kłębuszkowej, GFR) i białkomocz. Ostateczne rozpoznanie dysfunkcji alloprzeszczepu nerki nadal wymaga inwazyjnej biopsji alloprzeszczepu, która pozostaje złotym standardem w ocenie stanu przeszczepu. Anatomopatologiczna diagnostyka dysfunkcji przeszczepu nerki opiera się na klasyfikacji Banffa i pozwala na badanie nacieków immunologicznych oraz zmian komórkowych w przeszczepie w celu postawienia diagnozy: 1-występowania odrzucenia przeszczepu lub innych ataków oraz 2- przedział anatomiczny dotknięty patologią: kanalikowy, naczyniowy, śródmiąższowy lub kłębuszkowy.

Start-up CGenetix oferuje oryginalne podejście do przewidywania i charakteryzowania odrzucenia/dysfunkcji przeszczepu nerki w oparciu o ilościową ocenę sygnatur epigenetycznych obecnych w DNA wolnym od komórek dawcy. W 2018 roku Moss i in. opracowują model dekonwolucji umożliwiający identyfikację pochodzenia tkankowego krążącego DNA poprzez wykorzystanie jego właściwości epigenetycznych. Badanie potwierdziło, że wolne DNA krążące u zdrowych osób pochodzi głównie z komórek krwi i komórek śródbłonka, ale nie z komórek nerek.

W ramach tego protokołu rekrutowanych będzie 319 pacjentów po przeszczepieniu nerki z oddziałów przeszczepiania nerek w Pitié-Salpêtrière i Necker. Pacjenci zostaną włączeni do badania w momencie ich hospitalizacji w celu wykonania biopsji nerki w celu ustalenia przyczyny/wskazania (wizyta włączenia). Próbki moczu i krwi zostaną pobrane w ciągu 24 godzin przed wykonaniem biopsji nerki.

Ilości krążącego DNA pochodzenia nerkowego (całkowite biomarkery nerkowe (x2), specyficzne kanaliki (x2), specyficzne kłębuszki (x2), specyficzne naczynia włosowate okołocewkowe (x2) i określone naczynia włosowate tętnicze (x2)) zostaną określone metodą cyfrowej PCR i wyrażone w kopii/ml w próbkach krwi i moczu.

Głównym kryterium oceny badania jest pole pod krzywą ROC modeli predykcji odrzucenia typu ABMR na podstawie biopsji nerki oraz ilości krążącego DNA pochodzenia nerkowego jako współzmiennych (ogółem biomarkery nerkowe (x2), specyficzne kanaliki ( x2), specyficzne kłębuszki (x2), specyficzne naczynia włosowate okołokanałowe (x2) i specyficzne naczynia włosowate tętnicze (x2)) określone metodą cyfrowej PCR i wyrażone w kopiach/ml we krwi i moczu Ostateczny cel tego protokołu badania polega na i) prospektywnej walidacji wykonanie testu diagnostycznego zaproponowanego przez CGenetix i jego partnerów INSERM 1155 i 1151 oraz chemokin w moczu w celu nieinwazyjnego diagnozowania ostrego odrzucenia przeszczepu nerki oraz ii) zbadanie jego zdolności do diagnozowania różnych typów odrzucenia przeszczepu nerki (ABMR, TCMR, mieszane, Bez odrzucenia) Hipotezy badawcze są następujące: i) AUC ≥ 0,80 / Czułość i swoistość ≥ 80% dla każdego biomarkera rozpatrywanego indywidualnie; ii) AUC ≥ 0,85 / Czułość i swoistość ≥ 85% dla multimodalnego modelu predykcyjnego.