Supresyjne funkcje regulacyjnych komórek T w migrenie (SIIM-reg)

Migrena jest poważnym i globalnym problemem zdrowia publicznego, który dotyka 14% populacji na całym świecie. Jest to 2 do 3 razy bardziej powszechne u kobiet niż mężczyzn i jest drugą wiodącą przyczyną niepełnosprawności (1,2). Wielu pacjentów nie reaguje na obecnie dostępne leczenie (3). Jak potwierdzono w różnych badaniach, w tym własnych, kilka zaburzeń autoimmunologicznych i zapalnych, takich jak stwardnienie rozsiane, są związane z większym występowaniem migreny i wyższym ryzykiem chronifikacji migreny (co najmniej 15 dni bólu głowy w miesiącu) w porównaniu z populacją ogólną (4,5). Odkrycia te sugerują, że zapalenie może odgrywać ważną rolę w chronifikacji migreny (6). Rozregulowanie cytokin i komórek odpornościowych wykazano w chorobie (7), ale rola stanu zapalnego w patofizjologii migreny pozostaje niejasna. Wśród limfocytów T regulacyjne komórki T (Treg) odgrywają ważną rolę w utrzymywaniu homeostazy immunologicznej. Regulują one prozapalne komórki efektorowe T (Teff) i prozapalne uwalnianie cytokin (IL-6, IL-17, IFN-γ) poprzez różne mechanizmy supresyjne, takie jak adenosyna prozapalna i nocceptywna trihosfan adenozyny (ATP) w enzymesie adenozyny (ATP) i ATP) i ATP) i ATP) i ATP) Trej enzymsynowy (ATP). CD73, obecny odpowiednio na 40% i 6-10% komórek Treg (8,9). ADO następnie tłumi komórki Teff, wiążąc się z ich receptorem ADO A2A (10). ATP bierze udział w transdukcji sygnałów bólu w migrenie, a jej niewystarczająca hydroliza może prowadzić do chronifikacji bólu (11). Umożliwiono, że Tregs naturalnie tłumią produkcję IFN-γ przez komórki Teff. Ich podgrupy CD39-dodatnie (CD39+) tłumią również produkcję IL-17 przez komórki Teff, podczas gdy Treg-ujemne CD39 (CD39-) wydają się zwiększać wydzielanie IL-17 (12). Ostatnie badania wykazały zmienione proporcje Treg w migrenie w porównaniu z kontrolami (13,14) i dyskową subpopulacji Treg, takich jak obniżone poziomy komórek Treg CD39+(8). Sugeruje to ponadto, że funkcje tłumiące Treg mogą zostać zmienione w migrenie, ale nie doprowadzono żadnych testów funkcjonalnych w celu potwierdzenia tego.

W tym badaniu staramy się ustalić, czy komórki Treg odgrywają rolę w patofizjologii migreny, odpowiadając na następujące 3 oddzielne pytania: Pytanie 1) Czy funkcje supresyjne Treg zmniejszają się u pacjentów z migreną? Pytanie 2) Czy komórki Treg CD39+są funkcjonalne u pacjentów z migreną? Pytanie 3) Czy aktywność hydrolityczna enzymu CD39 jest zmniejszona u pacjentów z migreną?

Dzięki kokulturze Treg/Teff ocenimy zdolność komórek Treg i CD39+Treg do hamowania proliferacji teff i prozapalnego wydzielania cytokin i zmierzenia aktywności hydrolitycznej enzymu Treg CD39 na ATP u pacjentów z przewlekłą migreną w porównaniu z zdrowymi kontrolami. Zastosowanie ludzkich komórek odpornościowych (limfocyty Treg i Teff) w naszych eksperymentach pozwoli nam lepiej zrozumieć patofizjologię migreny, z bezpośrednim zastosowaniem dla ludzi, a także unikanie badań i cierpienia na zwierzętach. Poprzez ustawienie wolne od zwierząt, zgodnie z zasadą „3RS”, chcemy promować badania bez zwierząt i zmniejszenie stosowania zwierząt do produkcji odczynnika za pomocą rekombinowanych przeciwciał do cytometrii przepływowej i suplementów pożywki syntetycznej do hodowli komórkowej. Badanie to doprowadzi do lepszego zrozumienia roli zapalnego i komórek Treg w patofizjologii migreny i zapewni nowe perspektywy rozwoju spersonalizowanych metod leczenia zgodnie z profilem bólu immunologicznego pacjentów z migreną.

Naszym celem jest pokazanie, że funkcje tłumiące Treg są zmieniane w migrenie i że ścieżka Ado jest niedobór. Poprzez kokulturę Treg/Teff będziemy mierzyć zdolność Treg do hamowania proliferacji teff i wydzielania cytokin oraz oceny aktywności hydrolitycznej związanej z CD39 Treg. Pozwoli nam to zbadać funkcje tłumiące komórki Treg na komórkach Teff u samic z przewlekłą migreną i zdrowymi uczestnikami kontroli samicy.