Funzioni soppressive delle cellule T regolatorie nell'emicrania (SIIM-reg)

L'emicrania è una preoccupazione per la salute pubblica importante e globale che colpisce il 14% della popolazione in tutto il mondo. È 2-3 volte più diffuso nelle donne rispetto agli uomini ed è la seconda principale causa di disabilità (1,2). Molti pazienti non rispondono ai trattamenti attualmente disponibili (3). Come evidenziato in diversi studi, tra cui i nostri, diversi disturbi auto-immune e infiammatori, come la sclerosi multipla, sono associati a una maggiore prevalenza di emicrania e un rischio maggiore di conificazione dell'emicrania (almeno 15 giorni di mal di testa al mese) rispetto alla popolazione generale (4,5). Questi risultati suggeriscono che l'infiammazione può svolgere un ruolo importante nella cronificazione dell'emicrania (6). Le disregolazioni di citochine e cellule immunitarie sono state evidenziate nella malattia (7) ma il ruolo dell'infiammazione nella patofisiologia dell'emicrania rimane poco chiaro. Tra i linfociti T, le cellule T regolatorie (Treg) svolgono un ruolo importante nel mantenimento dell'omeostasi immunitaria. Regolano le cellule T (TEFF) dell'effettore pro-infiammatorio e il rilascio di citochine proinfiammatori (IL-6, IL-17, IFN-γ) attraverso diversi meccanismi soppressivi come l'idrolisi del CD39 di adenosina pro-infiammatoria e nocicettica (Adorosina nocicettiva, da adenosina trifosina (ADenosina nocicettiva, da adenosina trifosina (ADenosina nocicettiva, da adenosina trifosina (ADenosina nociva. presente il 40% e il 6-10% delle cellule Treg, rispettivamente (8,9). ADO quindi sopprime le cellule TEFF legandosi al loro recettore ADO A2A (10). L'ATP è coinvolto nella trasduzione di segnali di dolore nell'emicrania e la sua insufficiente idrolisi può portare alla cronificazione del dolore (11). È stato evidenziato che Treg sopprime naturalmente la produzione di IFN-γ da parte delle cellule TEFF. I loro sottoinsiemi CD39-positivi (CD39+) sopprimono anche la produzione di IL-17 da parte delle cellule TEFF, mentre le Treg CD39 negative (CD39-) sembrano aumentare la secrezione di IL-17 (12). Studi recenti hanno mostrato alterate proporzioni Treg nell'emicrania rispetto ai controlli (13,14) e alle disregolazioni di sottopopolazione Treg, come una riduzione dei livelli di cellule CD39+Treg (8). Ciò suggerisce inoltre che le funzioni soppressive di Treg possono essere modificate nell'emicrania, ma nessun test funzionale è stato portato a confermarlo.

In questo studio, miriamo a determinare se le cellule Treg svolgono un ruolo nell'emicrania patofisiologia, rispondendo alle seguenti 3 domande separate: Domanda 1) Le funzioni soppressive di Treg sono diminuite nei pazienti con emicrania? Domanda 2) Le cellule CD39+Treg sono funzionalmente carenti nei pazienti con emicrania? Domanda 3) L'attività idrolitica dell'enzima CD39 è ridotta nei pazienti con emicrania?

Attraverso la cocultura Treg/Teff valuteremo la capacità delle cellule totali Treg e CD39+Treg di inibire la proliferazione di Teff e la secrezione pro-infiammatoria delle citochine e misurare l'attività idrolitica dell'enzima CD39 dell'enzima Treg su ATP nei pazienti con emicrania cronica rispetto ai controlli sani. L'uso di cellule immunitarie umane (linfociti Treg e Teff) nei nostri esperimenti ci consentirà di comprendere meglio la patofisiologia dell'emicrania, con un'applicazione diretta ai soggetti umani, nonché di evitare test e sofferenze sugli animali. Attraverso il suo ambiente senza animali, seguendo il principio di "3RS", desideriamo promuovere la ricerca senza animali e la riduzione dell'uso degli animali per la produzione di reagenti utilizzando anticorpi ricombinanti per la citometria a flusso e integratori di terreno sintetico per la coltura cellulare. Questo studio porterà a una migliore comprensione del ruolo dell'infiammazione e delle cellule Treg nella fisiopatologia dell'emicrania e fornirà nuove prospettive per lo sviluppo di trattamenti personalizzati in base al profilo del dolore immunitario dei pazienti con emicrania.

Miriamo a dimostrare che le funzioni soppressive di Treg sono alterate nell'emicrania e che il percorso ADO è carente. Attraverso Treg/Teff Coculture misureremo la capacità di Tregs di inibire la proliferazione di Teff e la secrezione di citochine e valutare l'attività idrolitica correlata al CD39 delle Treg. Questo ci consentirà di studiare le cellule Treg funzioni soppressive sulle cellule TEFF in pazienti con emicrania cronica e partecipanti al controllo femminile sano.