Funções supressivas de células T regulatórias na enxaqueca (SIIM-reg)

A enxaqueca é uma grande e importante preocupação com a saúde pública que afeta 14% da população em todo o mundo. É 2 a 3 vezes mais prevalente em mulheres do que homens e é a segunda principal causa de incapacidade (1,2). Muitos pacientes permanecem sem resposta aos tratamentos atualmente disponíveis (3). Como evidenciado em diferentes estudos, incluindo os nossos, vários distúrbios auto-imunes e inflamatórios, como a esclerose múltipla, estão associados a uma maior prevalência de enxaqueca e um maior risco de cronificação de enxaqueca (pelo menos 15 dias de dor de cabeça por mês) em comparação com a população em geral (4,5). Esses achados sugerem que a inflamação pode desempenhar um papel importante na cronificação da enxaqueca (6). A citocina e as desregulações celulares imunes foram evidenciadas na doença (7), mas o papel da inflamação na fisiopatologia da enxaqueca permanece incerto. Entre os linfócitos T, as células T (Treg) reguladoras desempenham um papel importante na manutenção da homeostase imunológica. Eles regulam as células do efetor pró-inflamatório (TEFF) e a liberação pró-inflamatória de citocinas (IL-6, IL-17, IFN-γ) através de diferentes mecanismos supressores, como a hidrólise de superfosmo e o cdosfato nociceptivo e o nociceptivo e o nociceptivo e o adenocice-adelosfato (ATP) em cdosfato anti-inflamatório e antinocomoptivo, o adenocice-adenino, o antinocomoplice, o adenocicetivo, o cdosfato (ATP) em cdosfato e antinociceptivo, adenocticeptivo, adenociceptivo (ATP), adenocticeptivo, adenociceptivo, adenociceptivo (ATP), adenocticeptivo, adenociceptivo, adenociceptivo (ATP) em cdosfato anti-inflamatório e antinocicemos, CD73, presente em 40% e 6-10% das células Treg, respectivamente (8,9). A ADO então suprime as células TEFF ligando -se ao seu receptor A2A (10). O ATP está envolvido na transdução de sinais de dor na enxaqueca e sua hidrólise insuficiente pode levar à cronificação da dor (11). Foi evidenciado que os Tregs suprimem naturalmente a produção de IFN-γ pelas células TEFF. Seus subconjuntos CD39 positivos (CD39+) também suprimem a produção de IL-17 por células TEFF, enquanto os Tregs CD39-negativos (CD39-) parecem aumentar a secreção de IL-17 (12). Estudos recentes mostraram proporções alteradas de Treg na enxaqueca em comparação com os controles (13,14) e as desregulações de subpopulação de Treg, como os níveis de células Treg diminuídos (8). Isso sugere ainda que as funções supressivas de Treg podem ser alteradas na enxaqueca, mas nenhum ensaio funcional foi levado a confirmar isso.

Neste estudo, nosso objetivo é determinar se as células Treg desempenham um papel na fisiopatologia da enxaqueca, respondendo às seguintes 3 perguntas separadas: Pergunta 1) As funções supressoras de Treg diminuem em pacientes com enxaqueca? Pergunta 2) As células CD39+Treg são funcionalmente deficientes em pacientes com enxaqueca? Pergunta 3) A atividade hidrolítica da enzima CD39 é reduzida em pacientes com enxaqueca?

Através da cocultura de Treg/Teff, avaliaremos a capacidade das células totais de Treg e CD39+Treg de inibir a proliferação de Teff e a secreção de citocinas pró-inflamatórias e medir a atividade hidrolítica da enzima Treg CD39 no ATP em pacientes com enxaqueca crônica versus controles saudáveis. O uso de células imunológicas humanas (linfócitos Treg e Teff) em nossos experimentos nos permitirá entender melhor a fisiopatologia da enxaqueca, com uma aplicação direta aos seres humanos, além de evitar testes e sofrimentos em animais. Através de seu cenário livre de animais, seguindo o princípio dos '3Rs', desejamos promover pesquisas sem animais e a redução do uso de animais para produção de reagentes usando anticorpos recombinantes para citometria de fluxo e suplementos de meio sintético para a cultura de células. Este estudo levará a uma melhor compreensão do papel das células de inflamação e Treg na fisiopatologia da enxaqueca e fornecerá novas perspectivas para o desenvolvimento de tratamentos personalizados de acordo com o perfil da dor imunológica dos pacientes com enxaqueca.

Nosso objetivo é mostrar que as funções supressivas de Treg são alteradas na enxaqueca e que a via ADO é deficiente. Através da cocultura de Treg/Teff, mediremos a capacidade dos Tregs de inibir a proliferação de Teff e a secreção de citocinas e avaliar a atividade hidrolítica relacionada ao CD39 dos Tregs. Isso nos permitirá estudar funções supressivas de células Treg em células TEFF em pacientes do sexo feminino com enxaqueca crônica e participantes saudáveis de controle feminino.