Krajowe szwedzkie badanie oceniające dd-cfDNA jako biomarker diagnostyczny do nadzoru odrzucania przeszczepu serca (SweD-HTx)

Wprowadzenie:

Transplantacja serca (HTx) i terapia za pomocą urządzenia wspomagającego lewą komorę (LVAD) są głównymi opcjami leczenia zaawansowanej niewydolności serca. Chociaż HTx poprawia przeżycie, wiąże się z krótko- i długoterminowymi ryzykami, w tym uszkodzeniem immunologicznym i działaniami niepożądanymi leków immunosupresyjnych. Odrzucenie alloprzeszczepu serca dotyczy 15-20% biorców i często wymaga zwiększenia immunosupresji. Wczesne wykrycie jest kluczowe, a seryjne biopsje endomiokardialne (EMB) pozostają standardową metodą nadzoru.

Ostatnio pojawiły się biomarkery, takie jak donoropochodne wolne DNA (dd-cfDNA), do wykrywania stanu zapalnego i uszkodzenia komórek. Dd-cfDNA odzwierciedla apoptozę i martwicę w przeszczepionym narządzie i może być mierzone jako frakcja całkowitego wolnego DNA za pomocą testów opartych na PCR. Jest to czuły marker wczesnego odrzucenia zależnego od przeciwciał (AMR) i ostrego odrzucenia komórkowego (ACR), często wzrastający przed pojawieniem się zmian histopatologicznych. W USA testy dd-cfDNA są powszechne po transplantacji, ale w Europie ich stosowanie jest ograniczone przez koszty i dostępność.

W Szwecji każdego roku wykonuje się 60-70 przeszczepów serca, a krajowe protokoły regulują opiekę po transplantacji. W pierwszym roku przeprowadza się częste EMB. Istnieje potrzeba nieinwazyjnego monitorowania, aby zmniejszyć dyskomfort pacjentów i poprawić diagnostykę. Niniejsze badanie ma na celu ustanowienie krajowego protokołu testowania dd-cfDNA przy użyciu sekwencjonowania nowej generacji oraz pogłębienie zrozumienia odrzucenia i aktywacji immunologicznej.

Materiały i metody:

Projekt badania:

Badanie SweD-HTx jest wieloośrodkową, obserwacyjną kohortą obejmującą dorosłych biorców HTx ze Szpitala Uniwersyteckiego Skåne (Lund), Szpitala Uniwersyteckiego Sahlgrenska (Göteborg) i Szpitala Uniwersyteckiego Karolinska (Sztokholm). Transplantacje są wykonywane w Skåne lub Sahlgrenska, z obserwacją we wszystkich trzech ośrodkach. Kwalifikujący się pacjenci to dorośli (≥18 lat) poddawani ortotopowej HTx. Kryteria wykluczenia: ciąża, przeszczep wielonarządowy lub wcześniejszy przeszczep litego narządu/hematopoetycznych komórek macierzystych.

Próbki krwi są pobierane zgodnie ze standardowymi protokołami i wysyłane do laboratoriów immunologicznych. Niektóre próbki są krioprezerwowane. Dane kliniczne i demograficzne są gromadzone z elektronicznych dokumentacji.

Populacja badania:

Pacjenci są rekrutowani po zakwalifikowaniu do HTx, z zamiarem włączenia 120 uczestników w skali kraju, przy czym rekrutacja ma się zakończyć w ciągu 2 lat (pierwszy pacjent: luty 2025). Wymagana jest pisemna świadoma zgoda.

Wizyty w badaniu i pobieranie próbek:

Krew na dd-cfDNA i DSA jest pobierana prospektywnie w ustalonych odstępach czasu, skoordynowanych z rutynowymi EMB: tygodnie 1-4, miesiące 2, 2,5, 3, 4, 5, 6, 8-9, 10-12, 16, 20 i 24 po transplantacji, w zależności od protokołu ośrodka. Próbki są przetwarzane, a osocze przechowywane w -80 °C. Analiza DSA jest wykonywana przy każdej wizycie. Pacjenci są monitorowani przez pięć lat z corocznym zbieraniem danych.

Głównym wynikiem jest korelacja między poziomami dd-cfDNA a potwierdzonym biopsją odrzuceniem (zgodnie z kryteriami ISHLT). Analizowane będą zmiany długoterminowe w dd-cfDNA i DSA oraz ich związek.

Planowane podbadania:

1. Występowanie dysfunkcji przeszczepu (GDF) i CAV w ciągu pięciu lat, badane w odniesieniu do DSA i dd-cfDNA.
2. Związek między dd-cfDNA a krążącymi biomarkerami uszkodzenia przeszczepu lub stanu zapalnego.

Analiza dd-cfDNA: Ilościowe oznaczenie dd-cfDNA wykonuje się za pomocą testu sekwencjonowania nowej generacji (NGS). Frakcja dd-cfDNA (%) jest obliczana jako: (donoropochodne cfDNA / całkowite cfDNA) × 100. Wszystkie analizy są przeprowadzane zgodnie z walidowanymi protokołami i instrukcjami producenta.

Ocena histopatologiczna:

EMB są oceniane lokalnie przez patologów sercowo-naczyniowych zgodnie z wytycznymi ISHLT (2005 dla ACR, 2013 dla AMR). Odrzucenie definiuje się jako pAMR1(H+), pAMR1(I+), pAMR2, pAMR3, ACR stopień 2R lub 3R lub ich kombinacje. Brak odrzucenia: pAMR0, ACR stopnie 0 lub 1R. Wyniki są dokumentowane w elektronicznych dokumentacjach.

Analiza przeciwciał swoistych dla dawcy:

DSA są analizowane w każdym ośrodku przy użyciu platformy Luminex xMAP, raportowane jako średnia intensywność fluorescencji (MFI). Zostaną zbadane zależności między DSA, dd-cfDNA a wynikami biopsji.

Zagadnienia etyczne:

Badanie ma zatwierdzenie komisji etycznej (Referencje: 2024-03357-01, 2025-04085-02) i jest prowadzone zgodnie z Deklaracją Helsińską, wytycznymi etycznymi ISHLT, Dobrą Praktyką Kliniczną i odpowiednimi przepisami. Od wszystkich uczestników uzyskano pisemną świadomą zgodę.

Zarządzanie danymi i analiza statystyczna:

Dane są przechowywane w bezpiecznej, chronionej hasłem bazie danych z zakodowanymi identyfikatorami. Statystyki opisowe podsumowują charakterystykę wyjściową. Zależności między dd-cfDNA, DSA a biopsjami będą analizowane za pomocą testów nieparametrycznych i wieloczynnikowych modeli regresji. Analizy są wykonywane przy użyciu R.

Zarządzanie badaniem:

SweD-HTx jest badaniem inicjowanym przez badaczy. DEVYSER dostarcza zestawy testów DNA, a testy są wykonywane w lokalnych laboratoriach immunologicznych przy użyciu NGS i standaryzowanych kontroli. Badacze i niezależny komitet sterujący nadzorują badanie. DEVYSER nie uczestniczy w zbieraniu, analizie, interpretacji ani decyzjach dotyczących publikacji danych. Badanie otrzymało finansowanie z Regionu Sztokholm (granty ALF).

Wyniki:

Od 1 stycznia 2026 r. włączono 72 uczestników ze wszystkich ośrodków, zebrano 436 próbek. Dane obejmują demografię, wyniki laboratoryjne i schematy immunosupresyjne w każdym punkcie czasowym pobierania próbek. Poziomy DSA i dd-cfDNA będą korelowane i analizowane długoterminowo, z planowanymi podbadaniami dotyczącymi obrazowania i długoterminowej obserwacji.