Национальное шведское исследование по оценке Dd-cfDNA в качестве диагностического биомаркера для мониторинга отторжения при трансплантации сердца (SweD-HTx)

Введение:

Трансплантация сердца (ТС) и терапия с использованием устройства вспомогательного кровообращения левого желудочка (УВК ЛЖ) являются основными вариантами лечения терминальной сердечной недостаточности. Хотя ТС улучшает выживаемость, она сопряжена как с краткосрочными, так и с долгосрочными рисками, включая иммуноопосредованное повреждение и побочные эффекты от иммуносупрессантов. Отторжение сердечного аллотрансплантата затрагивает 15-20% реципиентов и часто требует усиления иммуносупрессии. Раннее выявление имеет решающее значение, и серийные эндомиокардиальные биопсии (ЭМБ) остаются стандартным методом наблюдения.

В последнее время появились биомаркеры, такие как донорская бесклеточная ДНК (дд-бкДНК), для обнаружения воспаления и клеточного повреждения. Дд-бкДНК отражает апоптоз и некроз в трансплантированном органе и может быть измерена как доля от общей бесклеточной ДНК с помощью ПЦР-анализов. Это чувствительный маркер раннего антител-опосредованного отторжения (АМО) и острого клеточного отторжения (ОКО), часто повышающийся до появления гистопатологических изменений. В США анализы на дд-бкДНК распространены после трансплантации, но в Европе их использование ограничено стоимостью и доступностью.

В Швеции ежегодно выполняется 60-70 трансплантаций сердца, при этом национальные протоколы регулируют посттрансплантационное наблюдение. В первый год проводятся частые ЭМБ. Существует потребность в неинвазивном мониторинге для снижения дискомфорта пациентов и улучшения диагностики. Данное исследование направлено на создание национального протокола тестирования дд-бкДНК с использованием секвенирования нового поколения и на углубление понимания отторжения и иммунной активации.

Материалы и методы:

Дизайн исследования:

Исследование SweD-HTx представляет собой многоцентровую наблюдательную когорту, включающую взрослых реципиентов ТС из Университетской больницы Сконе (Лунд), Университетской больницы Сальгренска (Гётеборг) и Университетской больницы Каролинского института (Стокгольм). Трансплантации выполняются в Сконе или Сальгренске, а наблюдение ведется во всех трех центрах. Критерии включения: взрослые пациенты (≥18 лет), перенесшие ортотопическую ТС. Критерии исключения: беременность, мультиорганная трансплантация или предшествующая трансплантация солидного органа/гемопоэтических стволовых клеток.

Образцы крови собираются в соответствии со стандартными протоколами и отправляются в иммунологические лаборатории. Некоторые образцы криоконсервируются. Клинические и демографические данные собираются из электронных записей.

Исследуемая популяция:

Пациенты включаются в исследование после одобрения на ТС, с целью набрать 120 участников по всей стране; набор ожидается завершить в течение 2 лет (первый пациент: февраль 2025 г.). Требуется письменное информированное согласие.

Визиты исследования и сбор образцов:

Кровь для анализа дд-бкДНК и DSA собирается проспективно в установленные интервалы, согласованные с плановыми ЭМБ: недели 1-4, месяцы 2, 2.5, 3, 4, 5, 6, 8-9, 10-12, 16, 20 и 24 после трансплантации, с вариациями в зависимости от протокола центра. Образцы обрабатываются, и плазма хранится при -80 °C. Анализ DSA выполняется при каждом визите. Пациенты наблюдаются в течение пяти лет с ежегодным сбором данных.

Первичной конечной точкой является корреляция между уровнями дд-бкДНК и подтвержденного биопсией отторжения (по критериям ISHLT). Будут проанализированы лонгитюдные изменения дд-бкДНК и DSA, а также их взаимосвязь.

Планируемые подисследования:

1. Частота дисфункции трансплантата (GDF) и CAV в течение пяти лет, исследуемая в связи с DSA и дд-бкДНК.
2. Взаимосвязь между дд-бкДНК и циркулирующими биомаркерами повреждения трансплантата или воспаления.

Анализ дд-бкДНК: Количественное определение дд-бкДНК выполняется с помощью анализа секвенирования нового поколения (NGS). Доля дд-бкДНК (%) рассчитывается как: (донорская бкДНК / общая бкДНК) × 100. Все анализы выполняются по валидированным протоколам и инструкциям производителя.

Гистопатологическая оценка:

ЭМБ оцениваются локально сердечно-сосудистыми патологами в соответствии с рекомендациями ISHLT (2005 г. для ОКО, 2013 г. для АМО). Отторжение определяется как pAMR1(H+), pAMR1(I+), pAMR2, pAMR3, ОКО степени 2R или 3R, или их комбинации. Отсутствие отторжения: pAMR0, ОКО степени 0 или 1R. Результаты документируются в электронных записях.

Анализ донор-специфичных антител:

DSA анализируются в каждом центре с использованием платформы Luminex xMAP, результаты представляются как средняя интенсивность флуоресценции (MFI). Будут изучены взаимосвязи между DSA, дд-бкДНК и результатами биопсии.

Этические аспекты:

Исследование одобрено этическим комитетом (Регистрационные номера: 2024-03357-01, 2025-04085-02) и следует Хельсинкской декларации, этическим рекомендациям ISHLT, Надлежащей клинической практике и соответствующим нормативным актам. От всех участников получено письменное информированное согласие.

Управление данными и статистический анализ:

Данные хранятся в защищенной паролем базе данных с закодированными идентификаторами. Описательная статистика суммирует исходные характеристики. Взаимосвязи между дд-бкДНК, DSA и результатами биопсии будут проанализированы с помощью непараметрических тестов и многомерных регрессионных моделей. Анализы выполняются с использованием R.

Управление исследованием:

SweD-HTx — это инициативное исследование. DEVYSER поставляет наборы для тестирования ДНК, а само тестирование выполняется в местных иммунологических лабораториях с использованием NGS и стандартизированных контролей. Исследователи и независимый руководящий комитет контролируют исследование. DEVYSER не участвует в сборе данных, анализе, интерпретации или принятии решений о публикации. Исследование получило финансирование от Региона Стокгольм (гранты ALF).

Результаты:

По состоянию на 1 января 2026 г. включены 72 участника из всех центров, собрано 436 образцов. Данные включают демографию, лабораторные результаты и схемы иммуносупрессии в каждой точке взятия проб. Уровни DSA и дд-бкДНК будут коррелированы и проанализированы лонгитюдно, запланированы подисследования по визуализации и долгосрочному наблюдению.