Frutose e glicose e TAS1R2 no diabetes tipo 1 (TAS1R2)

INTRODUÇÃO:

A frutose é transportada através da veia porta para o fígado, onde é rapidamente captada pelos hepatócitos e fosforilada em frutose-1-fosfato independente da ação da insulina pela enzima frutoquinase. Assim, em condições normais, a frutose é convertida principalmente em glicose, glicogênio e lactato e, em pequena extensão, também em triglicerídeos. No entanto, uma hipertrigliceridemia ocorreu durante altas ingestões de frutose.

Grandes quantidades de frutose, ao contrário da glicose, podem resultar em níveis aumentados de lactato, piruvato e ácido úrico em indivíduos saudáveis ​​e pacientes com diabetes não controlado. No entanto, o ácido úrico também possui propriedades pró-oxidativas. Possivelmente, o ácido úrico neutraliza o dano oxidativo.

A doçura é muito atraente para pacientes com diabetes, possivelmente devido a variantes genéticas. O receptor de sabor doce é um heterodímero de 2 subunidades proteicas, T1R2 (receptor de sabor, tipo 1, membro 2) e receptor de sabor, tipo 1, membro 3, localizado no cromossomo 1 humano. O T1R2 é o componente específico para a percepção do sabor doce porque o receptor gustativo, tipo 1, membro 3, também está envolvido na detecção de umami quando dimeriza com o receptor gustativo, tipo 1, membro 1.

Até o momento, nenhum estudo avaliou variantes do TAS1R em indivíduos com diabetes tipo 1.

DESIGN EXPERIMENTAL:

Trata-se de um estudo randomizado, simples-cego, bidirecional, cruzado, realizado no Centro de Pesquisas (Hospital Universitário Clementino Fraga Filho) com 30 adultos com diabetes tipo 1.

Todos os voluntários serão instruídos a preencher o registro alimentar habitual, registrar sua glicemia capilar e abster-se de atividade física vigorosa, álcool, alimentos ricos em gordura e excesso de cafeína por 24 dias antes de cada dia de estudo.

Um dia antes de cada dia de estudo, ligaremos para o voluntário para perguntar sobre possíveis eventos que possam influenciar os resultados bioquímicos (como: infecções, gripe, febre). Se detectarmos algum, o teste será remarcado.

As doses basais de insulina serão retidas e nenhuma insulina em bolus será permitida na manhã do dia do estudo. O dia do estudo será realizado se o nível alvo de glicose no sangue estiver entre 70 e 200 mg/dL pela manhã.

Todos os voluntários serão avaliados de forma cruzada bidirecional de forma aleatória simples e cega, com os dois estudos no mesmo assunto, com 1 semana de intervalo. O estudo foi dividido em dois dias (cuja ordem foi randomizada): um dia com solução contendo glicose e outro com solução contendo glicose.

Os sujeitos foram admitidos no Centro de Pesquisa (Laboratório Nutricional) aproximadamente às 7 horas do dia do estudo para testar a glicemia capilar, coletar amostra de sangue venoso arterial, avaliar as sensações de apetite. Após essas medições, eles beberão rapidamente a solução de teste.

As classificações de palatabilidade da solução serão avaliadas imediatamente após. Sensações de apetite e serão testadas usando escores VAS imediatamente antes e 70, 130 e 180 minutos após a solução.

A segunda amostra de sangue venoso arterial será coletada 185 minutos após a solução e teste de glicemia capilar antes e 30, 90, 120 e 180 minutos após a solução.

Excluímos os voluntários que não concluíram os dois testes.

SOLUÇÃO TESTE A solução conterá 75g de glicose ou a mesma quantidade de frutose diluída em 200 mL de água. Essas quantidades foram calculadas considerando o teste oral usual de tolerância à glicose. Além disso, até o momento, nenhum estudo indica a capacidade de absorção da frutose em pacientes com diabetes tipo 1, no entanto, foi sugerido que a capacidade de absorção da frutose em adultos saudáveis ​​varia de 30g a 40g.

AVALIAÇÃO DIETÉTICA USUAL A ingestão dietética usual será avaliada a partir de registros de dieta de 3 dias, e recordatórios de 24 horas serão realizados no estudo do dia. Todos os registros dietéticos serão analisados ​​usando um software nutricional local.

AVALIAÇÃO ANTROPOMÉTRICA O IMC será calculado como peso corporal em quilogramas dividido pelo quadrado da altura em metros.

A circunferência da cintura será determinada como a média de duas medições calculadas para o 0,1 cm mais próximo entre a margem inferior da costela e a crista ilial após uma expiração normal.

A composição corporal será medida por impedância bioelétrica tetrapolar (Biodynamic Model 450).

AVALIAÇÃO BIOQUÍMICA Todas as amostras de sangue venoso arterial serão coletadas por profissionais de saúde treinados com materiais descartáveis ​​no Centro de Pesquisas (Laboratório Nutricional) e analisadas no Laboratório de Análises Clínicas (localizado na Universidade Federal).

Hemoglobina glicosilada, colesterol total, HDL, creatinina, aspartato aminotransferase, alanina aminotransferase e creatinina serão avaliados para caracterizar a população do estudo. Glicose, triglicerídeos, ácido úrico, ácido pirúvico, lactato e malonaldeído serão medidos antes e 180 min após a ingestão da solução

A hemoglobina glicosilada será realizada por cromatografia líquida de alta eficiência. Glicose, colesterol total, HDL e triglicerídeos serão dosados ​​pelo método colorimétrico enzimático. O colesterol LDL será calculado pela equação de Friedewald. A creatinina será avaliada pelo método colorimétrico cinético para calcular o clearance de creatinina usando o Cockcroft-Gault. Ácido pirúvico, aspartato aminotransferase e alanina aminotransferase serão determinados pelo método cinético ultravioleta. Ácido úrico e lactato avaliados pelo método cinético enzimático. O malonaldeído será detectado por ensaio imunossorvente ligado a enzima.

GENOTIPAGEM O ácido desoxirribonucléico (DNA) será isolado do sangue total utilizando o DNA Multi-Sample Kit (Applied Biosystems®) e as amostras serão armazenadas a -20 graus Celsius até ensaios de amplificação em Laboratório de Pesquisa (Laboratório de Biologia Molecular da Universidade Federal).

O polimorfismo Ile191Val (rs35874116) no gene TAS1R2 será detectado usando um ensaio de discriminação alélica TaqMan (número ABI C_55646_20; Applied Biosystems, Foster City, CA) com reação em cadeia da polimerase em tempo real em um sistema de detecção de sequência ABI 7000 (Applied Biosystems) . As condições da reação em cadeia da polimerase são 95 graus Celsius por 10 minutos e 40 ciclos de 95 graus Celsius por 15 segundos e 60 graus Celsius por 1 minuto. A genotipagem será verificada usando indivíduos de controle positivo em cada placa de 30 poços, bem como reprocessando ≥ 5% das amostras, que foram 100% concordantes.

AVALIAÇÃO DE APETITE E PALATABILIDADE Escalas visuais analógicas serão utilizadas para avaliar fome, saciedade, saciedade, consumo alimentar prospectivo e palatabilidade da solução teste, e as sensações de apetite serão avaliadas palatabilidade, sabor, sabor residual, cheiro e apelo visual das soluções.

Ambas as classificações consistem em uma escala visual analógica, uma escala pré-medida de 100 mm que pode ser usada para representar visualmente a intensidade dos sintomas. Cada escala é ancorada em suas extremidades por descritores de sentimentos opostos. Os voluntários serão solicitados a descrever seus sentimentos colocando uma marca vertical ao longo da linha que melhor representa a intensidade de um determinado sentimento sobre a solução. A distância dessa marca da âncora apropriada é medida e depois traduzida em uma pontuação, variando de 0 (nenhuma ou a melhor possível) a 10 (pior possível).

MANEJO DO DIABETES TIPO 1 Os pesquisadores incluíram apenas voluntários em um regime basal-bolus com bomba de infusão de insulina ou análogos de insulina (basal: detemir ou glargina; bolus: lispro, glulisina ou aspart) para evitar oscilações de glicose durante o experimento.

Todos os voluntários serão instruídos a não modificar as doses basais de insulina e não tomar a insulina em bolus matinal. Os sujeitos serão admitidos no Centro de Pesquisa por volta das 7h e serão testados sua glicemia capilar, e se o nível alvo de glicemia estiver entre 70 e 200 mg/dL o experimento será realizado.

Antes e durante o experimento, testaremos a glicemia capilar 5 vezes com Accu-Check® Active, da Roche, e anularemos em glicose ≥350 mg/dL. Neste caso, faremos uma dosagem de insulina de correção em bolus.

ESTATÍSTICA As análises estatísticas serão realizadas com software estatístico e nível de significância de 5%.

As variáveis ​​quantitativas serão descritas como média e desvio padrão. O teste de Mann-Whitney será utilizado para comparação entre os grupos e o teste de Wilcoxon para comparar os efeitos da solução em cada grupo. Também serão utilizados o coeficiente de correlação de Spearman e a regressão.