Fruktoza i glukoza oraz TAS1R2 w cukrzycy typu 1 (TAS1R2)

WPROWADZANIE:

Fruktoza jest transportowana przez żyłę wrotną do wątroby, gdzie jest szybko wychwytywana przez hepatocyty i fosforylowana do fruktozo-1-fosforanu niezależnie od działania insuliny przez enzym fruktokinazę. Tak więc w normalnych warunkach fruktoza jest przekształcana głównie w glukozę, glikogen i mleczan, a także w niewielkim stopniu w trójglicerydy. Jednak hipertriglicerydemia wystąpiła podczas wysokiego spożycia fruktozy.

Duże ilości fruktozy, w przeciwieństwie do glukozy, mogą powodować zwiększenie poziomu mleczanów, pirogronianów i kwasu moczowego u osób zdrowych i pacjentów z niewyrównaną cukrzycą. Jednak kwas moczowy ma również właściwości prooksydacyjne. Być może kwas moczowy neutralizuje uszkodzenia oksydacyjne.

Słodycz jest bardzo atrakcyjna dla pacjentów z cukrzycą, prawdopodobnie ze względu na warianty genetyczne. Receptor smaku słodkiego jest heterodimerem złożonym z 2 podjednostek białkowych, T1R2 (receptor smaku, typ 1, element 2) i receptor smaku, typ 1, element 3, zlokalizowany na ludzkim chromosomie 1. T1R2 jest składnikiem specyficznym dla percepcji smaku słodkiego, ponieważ receptor smaku, typ 1, członek 3 jest również zaangażowany w wykrywanie umami, gdy dimeryzuje z receptorem smaku, typ 1, członek 1.

W tej chwili żadne badanie nie oceniało wariantów TAS1R u osób z cukrzycą typu 1.

PROJEKT EKSPERYMENTALNY:

Jest to randomizowane, dwukierunkowe, krzyżowe badanie z pojedynczą ślepą próbą przeprowadzone w Centrum Badawczym (Szpital Uniwersytecki Clementino Fraga Filho) z udziałem 30 osób dorosłych z cukrzycą typu 1.

Wszyscy ochotnicy zostaną poinstruowani, aby wypełnili zwykły rejestr diety, zarejestrowali poziom glukozy we krwi włośniczkowej i powstrzymali się od intensywnej aktywności fizycznej, alkoholu, pokarmów o wysokiej zawartości tłuszczu i nadmiaru kofeiny przez 24 dni przed każdym dniem badania.

Dzień przed każdym dniem badania zadzwonimy do ochotnika, aby zapytać o możliwe zdarzenia, które mogą mieć wpływ na wyniki biochemiczne (takie jak: infekcje, grypa, gorączka). Jeśli jakieś wykryjemy, test zostanie przełożony.

Podstawowe dawki insuliny zostaną zachowane i nie będzie dozwolone przyjmowanie insuliny w bolusie rano w dniu badania. Dzień badania zostanie przeprowadzony, jeśli docelowy poziom glukozy we krwi będzie wynosił od 70 do 200 mg/dL rano.

Wszyscy ochotnicy zostaną poddani dwukierunkowej ocenie krzyżowej w pojedynczej ślepej, randomizowanej formie, z dwoma badaniami z udziałem tego samego pacjenta, w odstępie 1 tygodnia. Badanie podzielono na dwa dni (kolejność była losowa): jeden dzień z roztworem zawierającym glukozę i drugi z roztworem zawierającym glukozę.

Osoby badane przyjmowane były do ​​Ośrodka Badawczego (Laboratorium Żywienia) około godziny 7 w dniu badania w celu oznaczenia glikemii we krwi włośniczkowej, pobrania krwi tętniczej żylnej, oceny odczuwania apetytu. Po tych pomiarach szybko wypiją roztwór testowy.

Oceny smakowitości roztworu zostaną ocenione natychmiast po. Odczucia apetytu i zostaną przetestowane przy użyciu wyników VAS bezpośrednio przed i 70, 130 i 180 minut po roztworze.

Druga próbka tętniczej krwi żylnej zostanie pobrana 185 minut po rozpuszczeniu i zbadana zostanie glukoza we krwi włośniczkowej przed i 30, 90, 120 i 180 minut po rozpuszczeniu.

Wykluczyliśmy ochotników, którzy nie ukończyli obu testów.

ROZTWÓR TESTOWY Roztwór będzie zawierał 75 g glukozy lub taką samą ilość fruktozy rozcieńczonej w 200 ml wody. Ilości te zostały obliczone na podstawie zwykłego doustnego testu obciążenia glukozą. Ponadto obecnie żadne badania nie wskazują na zdolność fruktozy u pacjentów z cukrzycą typu 1, jednak sugeruje się, że zdolność wchłaniania fruktozy u zdrowych osób dorosłych waha się od 30 g do 40 g.

ZWYKŁA OCENA DIETY Zwyczajowe spożycie zostanie ocenione na podstawie 3-dniowych zapisów diety, a 24-godzinne przypomnienia zostaną przeprowadzone w badaniu dziennym. Wszystkie zapisy żywieniowe zostaną przeanalizowane przy użyciu lokalnego oprogramowania żywieniowego.

OCENA ANTROPOMETRYCZNA BMI zostanie obliczone jako masa ciała w kilogramach podzielona przez wzrost w metrach do kwadratu.

Obwód talii zostanie określony jako średnia z dwóch pomiarów obliczonych z dokładnością do 0,1 cm w połowie odległości między dolnym brzegiem żebra a grzebieniem biodrowym po normalnym wydechu.

Skład ciała zostanie zmierzony za pomocą tetrapolarnej impedancji bioelektrycznej (model biodynamiczny 450).

OCENA BIOCHEMICZNA Wszystkie próbki tętniczej krwi żylnej zostaną pobrane przez przeszkolonych pracowników służby zdrowia przy użyciu materiałów jednorazowego użytku w Centrum Badawczym (Laboratorium Żywienia) i przeanalizowane w Laboratorium Analizy Klinicznej (znajdującym się na Uniwersytecie Federalnym).

Hemoglobina glikozylowana, cholesterol całkowity, HDL, kreatynina, aminotransferaza asparaginianowa, aminotransferaza alaninowa i kreatynina zostaną ocenione w celu scharakteryzowania badanej populacji. Glukoza, trójglicerydy, kwas moczowy, kwas pirogronowy, mleczan i aldehyd malonowy zostaną zmierzone przed i 180 min po spożyciu roztworu

Hemoglobina glikozylowana zostanie oznaczona metodą wysokosprawnej chromatografii cieczowej. Glukoza, cholesterol całkowity, HDL i triglicerydy będą mierzone enzymatyczną metodą kolorymetryczną. Cholesterol LDL zostanie obliczony za pomocą równania Friedewalda. Kreatynina zostanie oznaczona metodą kinetycznej kolorymetrii w celu obliczenia klirensu kreatyniny przy użyciu skali Cockcrofta-Gaulta. Kwas pirogronowy, aminotransferaza asparaginianowa i aminotransferaza alaninowa zostaną oznaczone metodą kinetyczną w ultrafiolecie. Kwas moczowy i mleczan oceniane metodą kinetyki enzymatycznej. Aldehyd malonowy zostanie wykryty za pomocą testu immunoenzymatycznego.

GENOTYPOWANIE Kwas dezoksyrybonukleinowy (DNA) zostanie wyizolowany z krwi pełnej za pomocą zestawu DNA Multi-Sample Kit (Applied Biosystems®), a próbki były przechowywane w temperaturze -20 stopni Celsjusza do testów amplifikacji w Laboratorium Badawczym (Laboratorium Biologii Molekularnej, Uniwersytet Federalny).

Polimorfizm Ile191Val (rs35874116) w genie TAS1R2 zostanie wykryty przy użyciu testu dyskryminacji alleli TaqMan (numer ABI C_55646_20; Applied Biosystems, Foster City, CA) z reakcją łańcuchową polimerazy w czasie rzeczywistym na ABI 7000 Sequence Detection System (Applied Biosystems) . Warunki reakcji łańcuchowej polimerazy to 95 stopni Celsjusza przez 10 min i 40 cykli 95 stopni Celsjusza przez 15 si 60 stopni Celsjusza przez 1 min. Genotypowanie zostanie zweryfikowane przy użyciu osób stanowiących kontrolę pozytywną na każdej 30-dołkowej płytce, jak również poprzez ponowne zbadanie ≥ 5% próbek, które były w 100% zgodne.

OCENA APETYTU I SMAKOWOŚCI Wizualne skale analogowe zostaną wykorzystane do oceny głodu, sytości, sytości, przewidywanego spożycia pokarmu i smakowitości badanego roztworu, a odczucia apetytu zostaną ocenione pod względem smakowitości, smaku, posmaku, zapachu i atrakcyjności wizualnej roztworów.

Obie oceny składają się z wizualnej skali analogowej, która jest wstępnie zmierzoną 100-milimetrową skalą, której można użyć do wizualnego przedstawienia intensywności objawów. Każda skala jest zakotwiczona na końcach przez przeciwstawne deskryptory uczuć. Ochotnicy zostaną poproszeni o opisanie swoich odczuć poprzez umieszczenie pionowego znaku wzdłuż linii, która najlepiej oddaje intensywność danego uczucia wobec rozwiązania. Mierzona jest odległość tego znaku od odpowiedniej kotwicy, a następnie przeliczana na ocenę w zakresie od 0 (brak lub najlepsza możliwa) do 10 (najgorsza możliwa).

LECZENIE W CUKRZYCY TYPU 1 Badacze włączyli tylko ochotników w schemacie baza-bolus za pomocą insulinowej pompy infuzyjnej lub analogów insuliny (baza: detemir lub glargine; bolus: lispro, glulizyna lub aspart), aby uniknąć wahań glukozy podczas eksperymentu.

Wszyscy ochotnicy zostaną poinstruowani, aby nie modyfikować podstawowych dawek insuliny i nie przyjmować porannej insuliny w bolusie. Badani zostaną przyjęci do Centrum Badawczego około godziny 7 i zostaną zbadani poziom glukozy we krwi włośniczkowej, a jeśli docelowy poziom glukozy we krwi będzie się mieścił między 70 a 200 mg/dL, zostanie przeprowadzony eksperyment.

Przed iw trakcie eksperymentu będziemy badać poziom glukozy we krwi włośniczkowej 5-krotnie za pomocą Accu-Check® Active firmy Roche i zostanie anulowany przy stężeniu glukozy ≥350 mg/dL. W takim przypadku przyjmiemy korektę dawki insuliny w bolusie.

STATYSTYCZNE Analizy statystyczne będą wykonywane przy użyciu programów statystycznych i poziomu istotności 5%.

Zmienne ilościowe zostaną opisane jako średnia i odchylenie standardowe. Test Manna-Whitneya zostanie użyty do porównania międzygrupowego, a test Wilcoxona do porównania efektów rozwiązania w każdej grupie. Wykorzystany zostanie również współczynnik korelacji i regresja Spearmana.