Фруктоза и глюкоза и TAS1R2 при диабете 1 типа (TAS1R2)

ВСТУПЛЕНИЕ:

Фруктоза транспортируется через воротную вену в печень, где быстро поглощается гепатоцитами и фосфорилируется до фруктозо-1-фосфата независимо от действия инсулина ферментом фруктокиназой. Таким образом, в нормальных условиях фруктоза превращается в основном в глюкозу, гликоген и лактат, а в незначительной степени также в триглицериды. Однако гипертриглицеридемия возникает при высоком потреблении фруктозы.

Большое количество фруктозы, в отличие от глюкозы, может привести к повышению уровня лактата, пирувата и мочевой кислоты у здоровых людей и пациентов с неконтролируемым диабетом. Однако мочевая кислота также обладает прооксидантными свойствами. Возможно, мочевая кислота нейтрализует окислительное повреждение.

Сладость очень привлекательна для больных диабетом, возможно, из-за генетических вариантов. Рецептор сладкого вкуса представляет собой гетеродимер из 2 белковых субъединиц, T1R2 (вкусовой рецептор, тип 1, элемент 2) и вкусовой рецептор, тип 1, член 3, расположенных на хромосоме 1 человека. T1R2 является компонентом, специфичным для восприятия сладкого вкуса, поскольку вкусовой рецептор типа 1, член 3, также участвует в обнаружении умами, когда он димеризуется со вкусовым рецептором, тип 1, член 1.

На данный момент ни одно исследование не оценивало варианты TAS1R у людей с диабетом 1 типа.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ДИЗАЙН:

Это рандомизированное простое слепое двустороннее перекрестное исследование, проведенное в Исследовательском центре (Университетская больница Клементино Фрага Филью) с участием 30 взрослых с диабетом 1 типа.

Все добровольцы будут проинструктированы вести обычный дневник питания, регистрировать уровень глюкозы в капиллярной крови и воздерживаться от активной физической активности, употребления алкоголя, продуктов с высоким содержанием жиров и чрезмерного употребления кофеина в течение 24 дней перед каждым днем ​​исследования.

За день до каждого дня исследования мы будем звонить добровольцам, чтобы узнать о возможных событиях, которые могут повлиять на результаты биохимических исследований (например, инфекции, грипп, лихорадка). Если мы их обнаружим, тест будет перенесен.

Дозы базального инсулина будут сохранены, и болюсный инсулин не будет разрешен утром в день исследования. День исследования будет проведен, если целевой уровень глюкозы в крови утром находится между 70 и 200 мг/дл.

Все добровольцы будут оцениваться путем двустороннего перекрестного исследования одним слепым рандомизированным методом с двумя исследованиями на одном и том же субъекте с интервалом в 1 неделю. Исследование было разделено на два дня (порядок которых был случайным): один день с раствором, содержащим глюкозу, и другой с раствором, содержащим глюкозу.

Испытуемые поступали в исследовательский центр (лабораторию питания) ориентировочно в 7 часов дня исследования для определения уровня глюкозы в капиллярной крови, забора образца артериально-венозной крови, оценки аппетита. После этих измерений они быстро выпивают тестовый раствор.

Оценки вкусовых качеств раствора будут оцениваться сразу после этого. Аппетитные ощущения и будут проверены с использованием показателей ВАШ непосредственно до и через 70, 130 и 180 минут после приема раствора.

Второй образец артериальной венозной крови будет взят через 185 минут после растворения и испытан на содержание глюкозы в капиллярной крови до и через 30, 90, 120 и 180 минут после растворения.

Мы исключили добровольцев, не завершивших оба теста.

ИСПЫТАТЕЛЬНЫЙ РАСТВОР будет содержать 75 г глюкозы или такое же количество фруктозы, разведенной в 200 мл воды. Эти количества были рассчитаны с учетом обычного перорального теста на толерантность к глюкозе. Кроме того, на данный момент нет исследований, указывающих на всасывающую способность фруктозы у пациентов с диабетом 1 типа, однако было высказано предположение, что всасывающая способность фруктозы у здоровых взрослых колеблется от 30 г до 40 г.

ОБЫЧНАЯ ОЦЕНКА ПИТАНИЯ Обычное потребление пищи будет оцениваться по 3-дневным записям диеты, а 24-часовые воспоминания будут выполняться в дневном исследовании. Все диетические записи будут проанализированы с использованием местного программного обеспечения для питания.

АНТРОПОМЕТРИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ИМТ рассчитывается как масса тела в килограммах, деленная на квадрат роста в метрах.

Окружность талии будет определяться как среднее двух измерений, рассчитанных с точностью до 0,1 см посередине между нижним краем ребра и гребнем подвздошной кости после нормального выдоха.

Состав тела будет измеряться тетраполярным биоэлектрическим импедансом (биодинамическая модель 450).

БИОХИМИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА Все образцы артериальной венозной крови будут собираться обученными медицинскими работниками с помощью одноразовых материалов в Исследовательском центре (Лаборатория питания) и анализироваться в Лаборатории клинического анализа (расположенной в Федеральном университете).

Гликозилированный гемоглобин, общий холестерин, ЛПВП, креатинин, аспартатаминотрансфераза, аланинаминотрансфераза и креатинин будут оцениваться для характеристики исследуемой популяции. Глюкоза, триглицериды, мочевая кислота, пировиноградная кислота, лактат и малоновый альдегид будут измеряться до и через 180 минут после приема раствора.

Гликозилированный гемоглобин будет определяться высокоэффективной жидкостной хроматографией. Глюкоза, общий холестерин, ЛПВП и триглицериды будут измеряться ферментативным колориметрическим методом. Холестерин ЛПНП будет рассчитываться по уравнению Фридевальда. Креатинин будет оцениваться кинетическим колориметрическим методом для расчета клиренса креатинина с использованием шкалы Кокрофта-Голта. Пировиноградную кислоту, аспартатаминотрансферазу и аланинаминотрансферазу определят ультрафиолетовым кинетическим методом. Мочевую кислоту и лактат оценивают ферментативно-кинетическим методом. Малональдегид выявляют с помощью иммуноферментного анализа.

ГЕНОТИПИРОВАНИЕ Дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) будет выделена из цельной крови с использованием набора ДНК для нескольких образцов (Applied Biosystems®), и образцы будут храниться при -20 градусах Цельсия до анализа амплификации в исследовательской лаборатории (Лаборатория молекулярной биологии, Федеральный университет).

Полиморфизм Ile191Val (rs35874116) в гене TAS1R2 будет обнаружен с использованием анализа аллельной дискриминации TaqMan (номер ABI C_55646_20; Applied Biosystems, Фостер-Сити, Калифорния) с полимеразной цепной реакцией в реальном времени на системе обнаружения последовательностей ABI 7000 (Applied Biosystems). . Условия полимеразной цепной реакции: 95°С в течение 10 мин и 40 циклов 95°С в течение 15 с и 60°С в течение 1 мин. Генотипирование будет проверено с использованием субъектов положительного контроля в каждом 30-луночном планшете, а также путем повторного анализа ≥ 5% образцов, которые были на 100% конкордантными.

ОЦЕНКА АППЕТИТА И ВКУСНЫХ ВКУСОВ Для оценки голода, сытости, сытости, предполагаемого потребления пищи и вкусовых качеств тестируемого раствора будут использоваться визуальные аналоговые шкалы, а аппетитовые ощущения будут оцениваться вкусовыми качествами, вкусом, послевкусием, запахом и визуальной привлекательностью растворов.

Оба рейтинга состоят из визуальной аналоговой шкалы, представляющей собой предварительно измеренную 100-миллиметровую шкалу, которую можно использовать для визуального представления интенсивности симптомов. Каждая шкала закреплена на концах противоположными дескрипторами чувств. Добровольцев попросят описать свои чувства, поставив вертикальную отметку вдоль линии, которая лучше всего отражает интенсивность данного чувства по поводу решения. Расстояние от этой метки до соответствующего якоря измеряется, а затем переводится в балл в диапазоне от 0 (отсутствие или наилучшее возможное) до 10 (наихудшее из возможных).

ВЕДЕНИЕ ДИАБЕТА ТИПА 1 Исследователи включали только добровольцев, получавших базально-болюсный режим с инсулиновой инфузионной помпой или аналогами инсулина (базальный: детемир или гларгин; болюсный: лизпро, глулизин или аспарт), чтобы избежать колебаний уровня глюкозы во время эксперимента.

Всех добровольцев проинструктируют не изменять дозы базального инсулина и не принимать утренний болюсный инсулин. Субъекты будут допущены в Исследовательский центр примерно в 7 часов и будут проверены на уровень глюкозы в капиллярной крови, и если целевой уровень глюкозы в крови составляет от 70 до 200 мг/дл, будет проведен эксперимент.

До и во время эксперимента мы будем измерять уровень глюкозы в капиллярной крови 5 раз, используя Accu-Check® Active, Roche, и будем отменять его при уровне глюкозы ≥350 мг/дл. В этом случае мы примем дозу инсулина для коррекции болюса.

СТАТИСТИЧЕСКИЕ АНАЛИЗЫ Статистические анализы будут выполняться с помощью статистического программного обеспечения и уровня значимости 5%.

Количественные переменные будут описаны как среднее значение и стандартное отклонение. Критерий Манна-Уитни будет использоваться для сравнения между группами, а критерий Уилкоксона — для сравнения эффектов раствора в каждой группе. Также будут использоваться коэффициент корреляции Спирмена и регрессия.