Indução da reação acrossômica antes da ICSI (RA-ICSI)

Introdução A microinjeção intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) produz 70% dos ovócitos e zigotos fertilizados que, em sua maioria, se desenvolvem normalmente. Para realizar a ICSI, um espermatozóide é retirado de uma suspensão de espermatozoides após a migração do gradiente. Em seguida, é imobilizado quebrando seu flagelo com uma micropipeta e introduzido no citoplasma do oócito.

A taxa de reação acrossômica espontânea em humanos é inferior a 20%. Dois estudos sobre a percentagem de espermatozoides acrossomais reagidos e imobilizados mostraram que 95% deles têm uma desestabilização da membrana, mas apenas 17,8% deles fizeram uma AR completa. Em outras palavras, quando microinjetamos 10 espermatozóides, apenas 2 deles se livraram completamente de seu material acrossômico. Todos os outros são introduzidos no oócito com material acrossomal. Mas esse material normalmente não entra no oócito, pois a reação acrossômica é um pré-requisito para a passagem da zona pelúcida que envolve o óvulo.

A importância de usar um espermatozoide que reagiu com acrossoma para o sucesso da ICSI já foi destacada em várias espécies animais. Foi demonstrado que a indução da reação acrossômica em camundongos leva a taxas de fertilização mais altas (de 30% a cerca de 60%). É semelhante, no coelho e nos cavalos. Kimura et ai. também relataram que oócitos de camundongos injetados com esperma de coelho e hamster com acrossoma intacto exibiram ativação nuclear e cessação do desenvolvimento embrionário sem atingir o estágio de duas células. Essa "citotoxicidade" dos mesmos espermatozóides desaparece quando eles são liberados de seus acrossomas antes da injeção. Em outro estudo, o efeito prejudicial na sobrevivência do oócito da presença do acrossoma durante a injeção de cabeças de esperma foi demonstrado no hamster dourado. Todos os oócitos microinjetados com espermatozóides acrossomais intactos morreram, enquanto apenas aqueles injetados com espermatozoides acrossomais não apenas sobreviveram, mas também se desenvolveram até o estágio de dois pró-núcleos em 79% dos casos e ajudaram a obter nascidos vivos (19%).

A equipe de Yanagimachi relatou um estudo sobre o efeito potencialmente perigoso da incorporação do acrossoma espermático de diferentes espécies em oócitos de camundongos. Segundo esses autores, os componentes nocivos provavelmente seriam as enzimas como tripsina-like acrosina e hialuronidase, uma vez que sua injeção mimetizou os efeitos da ICSI com espermatozoides com acrossoma intacto. No mesmo estudo, foi confirmado que os efeitos tóxicos estavam correlacionados com o tamanho do acrossoma e, portanto, com o conteúdo de enzimas protease.

Os efeitos tóxicos do acrossoma e seu conteúdo foram descritos explicitamente por Morozumi e Yanagimachi. Induz a deformação do oócito com aspecto irregular, edema ou citólise com aspecto de citoplasma pseudovacuolizado. Além disso, foi estabelecido que o dano causado por enzimas exógenas ou acrossomais estava correlacionado com a ruptura do citoesqueleto do oócito através de um acúmulo aberrante de microtúbulos no córtex do oócito.

Além das alterações morfológicas e ultraestruturais do oócito, a incorporação do acrossoma pode resultar na falta de ativação nuclear do oócito. Kasai et ai. relataram que a conclusão da meiose do oócito ocorre mais rapidamente se o espermatozoide for liberado do acrossoma. Da mesma forma, foi observado em suínos um aumento na taxa de fertilização após ICSI com esperma com reação acrossômica. O estudo de Morozumi et al. também demonstraram que a indução da reação acrossômica de espermatozóides de várias espécies antes da ICSI resultou em uma aceleração da ativação oocitária, que se manifestou em espermatozóides humanos. Isso foi evidenciado pelas diferenças significativas entre os perfis de oscilações de cálcio após ICSI com espermatozoides com acrossoma intacto ou com acrossoma reagido. Ondas de cálcio registradas em oócitos injetados com espermatozoides com reação acrossômica foram caracterizadas por início e amplitude precoces e frequência mais alta. Em contraste, a resposta do cálcio foi anormalmente retardada em oócitos injetados com espermatozoides com acrossoma intacto.

Assim, as oscilações de cálcio alteradas, os sinais "chave" de ativação do oócito durante a ICSI, são a causa do desenvolvimento anormal do embrião pré-implantação até o estágio de blastocisto. De fato, a proporção de nascimentos de camundongos vivos e saudáveis ​​aumenta de 40% para 71%, quando espermatozoides intactos ou com reação acrossômica são microinjetados, respectivamente.

Esses mesmos estudos também mostraram duas coisas:

• A introdução de material acrossomal é mais prejudicial quando a quantidade é grande em relação ao volume oocitário. Há, portanto, interesse em reduzir sistematicamente a quantidade de material introduzido no citoplasma do oócito para melhorar o desenvolvimento embrionário.
• A segunda coisa é que a indução da reação acrossômica antes da ICSI melhora muito o desenvolvimento embrionário e, portanto, o número de bebês nascidos da transferência de embriões.

Embora a ICSI em humanos dê resultados muito satisfatórios, a taxa de bebês obtidos por embrião é menor do que após a transferência de embriões de fertilização in vitro. Assim, existe a possibilidade de melhorar os resultados da ICSI pela indução da reação acrossômica antes da microinjeção.

Depois de vários estudos, usamos a incubação de espermatozóides com o fluido folicular (FF) do parceiro para induzir a reação acrossômica dos espermatozóides (Karim Rahal, 2011 Dissertação de Mestrado 2). FF é de fato um potente indutor do AR. Não há problema de rastreabilidade, pois o FF da paciente é usado apenas para o esperma do marido. Esta técnica pode ser aplicada ao sêmen mais pobre. Por fim, a técnica é utilizada em uma rotina muito fácil, pois o líquido folicular é sempre recuperado durante a captação dos ovócitos e assim fica disponível.