para variantes de diabetes de tecido adiposo (fATDIVA) (fATDIVA)

Hipótese:

Indivíduos portadores de diferentes variações genéticas têm diferentes habilidades para armazenar gordura sob a pele.

Objetivo: Melhorar a compreensão da "disfunção do tecido adiposo" usando a genética humana e demonstrar que a absorção de lipídios nas células adiposas está comprometida em indivíduos com alelos de 'lipodistrofia poligenética'.

Objetivos.

• Identifique indivíduos com variantes de risco genético de interesse e controles pareados por sexo, idade e IMC.
• Realize avaliações fisiológicas detalhadas, incluindo um Teste Oral de Tolerância aos Triglicerídeos (OTTT) (amostras de sangue antes e depois de uma bebida gordurosa), medidas detalhadas do tamanho do corpo e uma biópsia de gordura opcional.

• Usando as amostras coletadas, teste se os indivíduos carregam ou não uma alta carga genética de alelos de "lipodistrofia poligênica":

  1. têm células de gordura subcutânea maiores.
  2. têm níveis de lipídios circulantes mais altos 4 horas após um desafio com refeição gordurosa.
  3. têm um perfil de expressão gênica normalmente associado à obesidade, apesar de terem o mesmo IMC que os controles pareados. Este perfil inclui uma regulação negativa de genes envolvidos no tráfego de ácidos graxos e uma regulação positiva de genes envolvidos na inflamação.
  4. têm maior resistência à insulina medida pelo HOMAIR (calculado a partir da insulina e glicose em jejum).

Fundo:

O diabetes é a doença metabólica crônica mais comum e é uma importante fonte de morbidade e mortalidade. É um dos maiores desafios de saúde enfrentados pelo NHS do Reino Unido, com mais de 2,6 milhões de adultos diagnosticados no Reino Unido, com a grande maioria (90%) com Diabetes tipo 2 (T2D). Prevê-se que os números continuem a aumentar, em parte devido aos níveis crescentes de obesidade na população.

O DM2 é caracterizado por altos níveis de glicose no sangue no contexto de aumento da resistência à insulina e redução da função das células beta, e isso pode se desenvolver ao longo de vários anos sem que os indivíduos tenham conhecimento do problema.

Grupos de pesquisa em Exeter estão liderando esforços para identificar os fatores genéticos que influenciam por que algumas pessoas desenvolvem DM2 apesar da relativa magreza, enquanto muitas pessoas obesas não contraem a doença. Os pesquisadores identificaram muitos desses fatores, mas agora desejam estudá-los com mais detalhes para entender o papel da insulina.

Introdução:

Disfunção do tecido adiposo Trabalhando com colaboradores como parte de estudos genéticos em andamento, os pesquisadores identificaram várias variações genéticas (alterações de DNA) associadas à resistência à insulina e acreditam que algumas dessas variantes genéticas operam principalmente por meio da "disfunção" do tecido adiposo. A disfunção do tecido adiposo é um conceito relativamente novo e resultou de estudos fisiológicos detalhados que revelaram que indivíduos obesos têm células adiposas maiores, mais tecido adiposo inflamado (muitas vezes infiltrado com macrófagos), fluxo sanguíneo de tecido adiposo mais pobre pré/pós refeição e expressão diferencial de genes envolvidos nesses processos (Alkhouli 2013). A falência dos adipócitos, resultando em uma capacidade limitada de captação de ácidos graxos livres (AGL), predispõe à deposição ectópica de gordura que é uma deposição de lipídeos em locais como fígado, músculo com mais tecido omental semelhante a indivíduos com lipodistrofia.

Os pesquisadores estão tentando entender como as variações genéticas causam diferenças na capacidade das pessoas de armazenar gordura e desejam testar a hipótese de que indivíduos portadores de diferentes variações genéticas têm habilidades diferentes de armazenar gordura sob a pele como tecido adiposo subcutâneo. Isso pode levar a uma melhor compreensão do armazenamento de gordura subcutânea. É muito improvável que o número crescente de pessoas com sobrepeso ou obesidade à medida que envelhecem seja substancialmente revertido, portanto, as descobertas do estudo podem ser importantes para identificar como reduzir o risco de doenças causadas pela obesidade.

Métodos:

Design de estudo:

Este é um estudo de coorte prospectivo "recrutar por genótipo" que ocorrerá durante um período de 2 anos (2015 a 2017).

Participantes do estudo:

Todos os participantes serão identificados a partir de coortes de pesquisa existentes gerenciadas pelo NIHR Exeter Clinical Research Facility (Exeter CRF) e o recrutamento será facilitado dentro do Exeter CRF.

Sob a aprovação ética abrangente 09/H0106/75, aproximadamente 7.500 amostras de DNA anônimas foram genotipadas para variantes genéticas relacionadas à produção de insulina. Essas variantes ocorrem em >1% da população e não têm consequências diretas para a saúde individual.

Não há limite definido para ter ou não lipodistrofia poligênica, pois não é baseada em uma única variante genética. As pessoas terão entre 0 e 22 alelos de lipodistrofia poligênica e os investigadores estão procurando por aqueles com uma combinação de pelo menos 11 variantes genéticas. Eles identificaram aproximadamente 300 pessoas na coorte EXTEND que se encaixam neste critério e então recrutarão controles correspondentes daqueles na coorte EXTEND que foram identificados como tendo o menor número de alelos de risco.

Recrutamento:

Os investigadores fornecerão ao Exeter Clinical Research Facility (Exeter CRF) uma lista dos números de amostra que foram identificados como tendo os indivíduos identificados com as variantes genéticas de "lipodistrofia poligênica" de interesse, juntamente com os indivíduos de controle portadores do número médio de risco alelos. O Exeter CRF Data Manager identificará 50 indivíduos com as variantes e 50 indivíduos pareados por idade, sexo, diabetes e IMC, que serão convidados para uma visita de 5 horas ao Exeter CRF para coleta de dados e amostras. Os participantes interessados ​​serão contatados diretamente por um membro da equipe de estudo que será responsável pelo processo de recrutamento, fornecendo informações verbais e escritas específicas do projeto mais detalhadas.

Procedimento:

Todos os participantes serão solicitados a abster-se de exercícios extenuantes e de comer refeições muito gordurosas nas 48 horas anteriores à entrada na clínica, e nenhum álcool (tem alto teor de energia e afeta o fígado), mas fora isso dieta normal e depois jejuar durante a noite antes de participar de uma visita matinal no Exeter CRF. Os participantes serão solicitados a assinar um formulário de consentimento por escrito antes de qualquer coleta de dados.

Coleção de dados:

Antropometria:

• Os dados da linha de base, incluindo Ht (m), Wt (kg), cintura (cm) e circunferência do quadril (cm) serão registrados.
• Medidas detalhadas de gordura corporal serão obtidas do BOD POD.
• Medidas das dobras cutâneas (mm) das regiões bíceps, tríceps, subescapular e suprailíaca.

Histórico médico: incluindo medicamentos atuais e informações sobre estilo de vida (tabagismo/álcool).

BODPODTM:

Medidas detalhadas da composição corporal serão obtidas usando o Body Composition Tracking System. Isso compreende brevemente uma máquina BOD POD, balanças eletrônicas e um computador. Ele usa os princípios da densitometria corporal (medição de massa e volume) para calcular a porcentagem do participante e as quantidades absolutas de gordura e massa livre de gordura. Os participantes serão convidados a usar roupas mínimas (por exemplo, fato de banho) e um gorro de natação justo. Eles ficam na balança elétrica para registrar seu peso, que é então calibrado com o BOD POD. Os participantes são convidados a sentar-se dentro do BOD POD até 1 minuto de cada vez (no máximo 3 vezes). O computador analisará e gerará os resultados.

Amostras de sangue:

Teste oral de tolerância a triglicerídeos (OTTT) (aprox. 4 horas):

Uma pequena cânula (tubo de plástico fino) será inserida em uma veia seguindo a prática clínica padrão para minimizar qualquer trauma potencial de amostragem de sangue repetida.

• Amostras em jejum (em -5 e -2 minutos) serão obtidas para medições basais (incluindo medição de glicose e lipídios de rotina), plasma e soro para armazenamento e análise futura em lotes e medições pré-OTTT de glicose, insulina, lipídios padrão e armazenados plasma para potenciais futuros estudos metabolômicos ou lipidômicos.
• Após a amostragem de sangue em jejum inicial, o participante será solicitado a beber aproximadamente 150 ml de suplemento Fresubin 5cal shot durante um período de 5 minutos. O tempo de conclusão será anotado como T= 0. Outras amostras de sangue serão obtidas em T=30, 60, 120, 180 e 240 minutos após a ingestão. O conteúdo calórico e a proporção de macronutrientes em Fresubin é muito semelhante ao descrito nas publicações que realizam o OTTT (Karamanos 2001; Carstensen 2003; Mohanlal 2004).

No final deste período, a cânula será removida e será oferecido ao participante um almoço/refeições ligeiras.

Biópsias de gordura abdominal opcionais (aprox. 30 minutos e realizado durante OTTT):

Para os voluntários da pesquisa que estão dispostos a se submeter a uma pequena biópsia de gordura, uma amostra de gordura abdominal será obtida primeiro injetando algum anestésico local em uma área acessível do abdômen. Usando um bisturi, uma pequena incisão (aproximadamente 2-3 cm) será feita a uma profundidade de aproximadamente 15 mm e duas pequenas amostras de gordura do tamanho de ervilhas serão removidas. A ferida será fechada com suturas simples ou steristrips. Uma amostra de gordura será congelada rapidamente em nitrogênio líquido imediatamente após a excisão e armazenada a menos 80 graus para análises de RNA. A outra amostra será armazenada em formalina para posterior coloração imuno-histoquímica.