Microbioma no Transtorno Obsessivo-Compulsivo (MIO)

Fundo:

O transtorno obsessivo-compulsivo (TOC) é um transtorno altamente debilitante, com prevalência ao longo da vida de aproximadamente 2%, distribuído igualmente entre homens e mulheres. O TOC geralmente começa em uma idade precoce e geralmente desenvolve um curso crônico se não for tratado. Muitos pacientes com TOC recebem tratamento após anos de atraso devido a fatores do paciente e da saúde; portanto, o TOC afeta o desempenho educacional, a capacidade de trabalho e as relações interpessoais. Além disso, representa um fardo e sofrimento consideráveis ​​para os cuidadores familiares [1] e é responsável por uma das dez condições de saúde mental mais incapacitantes em todo o mundo [2].

O papel da comunidade microbiana na saúde e na doença tem sido um assunto negligenciado na pesquisa humana até recentemente, apesar do fato de que os micróbios humanos compreendem cerca de 1-3% da nossa massa corporal [3]. Os micróbios intestinais desempenham papéis importantes no metabolismo de nutrientes, produção de vitaminas e prevenção de patógenos de colonizar nosso intestino [4]. Recentemente, a microbiota no intestino ganhou interesse crescente devido à extensa conexão entre o intestino e o cérebro [5]. A comunicação bidirecional por meio de sinalização neural, hormonal e imunológica envolvendo os sistemas nervoso central, autônomo e entérico forma o eixo microbioma-intestino-cérebro [6]. Em psiquiatria, disbioses foram relatadas em anorexia nervosa, depressão maior, autismo e outros transtornos psiquiátricos importantes [9, 10].

A associação entre o início do TOC e a infecção é conhecida há muito tempo. PANS/PANDAS são formas agudas de TOC associadas a reações autoimunes de patógenos, como infecção por estreptococos [11, 12]. A conexão entre o patógeno bacteriano e a resposta imunológica, que gera os sintomas do TOC, é mais uma evidência da importância do eixo microbioma-intestino-cérebro no TOC. Ultimamente, tem havido inúmeras hipóteses sobre a importância do microbioma intestinal e dos sintomas do TOC [13, 14].

Objetivos: Caracterizar a composição e diversidade do microbioma intestinal em indivíduos com TOC em comparação com controles saudáveis.

• Nossa hipótese é que os pacientes com TOC apresentarão evidências de disbiose intestinal (desequilíbrio) marcada por menor diversidade microbiana e diferenças taxonômicas e de conteúdo genético específicas em comparação com controles saudáveis. O resultado primário é α-diversidade, que se refere ao número de espécies (riqueza) em um local, β-diversidade, que se refere às diferenças na composição de espécies entre os participantes e abundância taxonômica de grupos bacterianos (no filo, classe, ordem , família, gênero e níveis de espécie). Essas medidas fornecem informações sobre a composição microbiana individual em cada local e a homogeneidade em um grupo de pessoas.
• Nossa hipótese é que a diversidade α e β reduzida no microbioma intestinal se correlaciona com a gravidade dos sintomas obsessivo-compulsivos medidos pela Escala Obsessiva-Compulsiva de Yale-Brown (Y-BOCS) e pelo Inventário Obsessivo-Compulsivo Revisado (OCI-R). Prevemos que uma maior gravidade dos sintomas está associada a uma menor diversidade. Uma correlação negativa significativa será uma evidência de suporte para o eixo microbioma-intestino-cérebro.
• Nossa hipótese é que haverá uma diversidade α significativamente mais rica na composição do microbioma intestinal após uma psicoterapia bem-sucedida (mudança na pontuação do Y-BOCS).

Método:

Recrutamento: Os controles saudáveis ​​serão recrutados por meio de anúncios ou incluídos em estudos anteriores com seu consentimento. Pacientes do sexo masculino e feminino entre 18 e 45 anos de idade da clínica de TOC do Hospital Huddinge com diagnóstico de TOC do DSM-5 e medo de contaminação serão convidados a participar. Serão recrutados controles de mesma idade que não tenham histórico pessoal ou familiar de TOC. Os critérios de exclusão para todos os grupos incluem histórico de cirurgia do trato gastrointestinal (exceto apendicectomia ou colecistectomia); história de doença inflamatória intestinal, síndrome do intestino irritável, doença celíaca ou qualquer outro diagnóstico que possa explicar sintomas intestinais crônicos ou recorrentes, uso de antibióticos nos últimos 3 meses; uso de probióticos nas últimas 4 semanas; gravidez. Deficiência intelectual, transtorno do espectro autista e psicose.

Avaliação: Todos os participantes encontrarão um psiquiatra experiente para avaliações diagnósticas, incluindo M.I.N.I. entrevista. Os participantes serão solicitados a preencher formulários de autoavaliação na Internet e responder a perguntas sobre seus hábitos alimentares nos últimos três meses. Peso e altura para cálculo do índice de massa corporal (IMC) serão medidos. Todos os formulários de avaliação, informações de entrevistas e exames médicos serão documentados em seu prontuário. Mais informações (por exemplo antibióticos e terapias anteriores) serão coletados de seus prontuários com o consentimento dos participantes.

Os investigadores escolheram a bateria de questionário a seguir para capturar todas as variáveis ​​de resultado relevantes (sintomas de TOC), nutrição e características e frequência das fezes.

• Escala Obsessiva Compulsiva de Yale-Brown (Y-BOCS): Uma entrevista clínica semiestruturada comumente usada para avaliar a gravidade dos sintomas do TOC.
• Inventário Obsessivo-Compulsivo Revisado (OCI-R -): Um questionário de autorrelato de 18 itens que estima as dimensões dos sintomas do TOC. O OCI-R produz uma pontuação total e 5 subescalas: verificação, acumulação, neutralização, obsessão, ordem e lavagem.
• EDE-Q para capturar o comportamento alimentar.
• Questionário Meal Q: Um questionário de frequência alimentar baseado na web, normatizado na Suécia, validará a ingestão de energia e macronutrientes, o que afeta a composição microbiana.
• Bristol Stool Scale: Uma escala de diagnóstico médico projetada para classificar a forma das fezes humanas em sete categorias.

Além disso, os investigadores coletarão informações demográficas de todos os pacientes: idade, sexo, idade de início, situação ocupacional, saúde somática e comorbidades psiquiátricas.

Procedimento de amostragem de fezes: Os pacientes e controles receberão instruções claras para a coleta de amostras de fezes em casa. Os pacientes coletarão uma amostra de fezes no início do tratamento e outra no final do tratamento. Os controles coletarão uma amostra em apenas um ponto no tempo. Os participantes coletarão fezes em casa usando kits OMNIgene que serão enviados ao biobanco KI.

Terapia de Exposição e Prevenção de Respostas (ERP): uma psicoterapia baseada em evidências administrada por psicólogos experientes, individualmente, em grupos, face a face ou através da internet. É necessário um mínimo de cinco sessões de exposição e prevenção de respostas para que seja considerado um tratamento ERP.

Armazenamento de amostras no biobanco: Todas as amostras serão armazenadas no biobanco Karolinska Institutets (KI). O pedido de armazenamento de amostras em biobancos é estabelecido de acordo com regras e regulamentos.

Sequenciamento metagenômico: Os investigadores usarão métodos de sequenciamento metagenômico shotgun. O sequenciamento shotgun de todo o genoma pode fornecer informações funcionais sobre quais genes estão presentes no microbioma intestinal dos pacientes. Este método também pode fornecer uma resolução taxonômica mais detalhada que o sequenciamento de 16S rRNA.

Sequenciamento metagenômico shotgun: será preparado e sequenciado. Para utilizar eficientemente as lâminas de fluxo, cerca de dez amostras serão multiplexadas, com índices duplos, por faixa da lâmina de fluxo. Antes da análise de bioinformática a jusante, os dados brutos da sequência serão filtrados por qualidade e aparados para remover bases com pontuações de qualidade Phred inferiores a 20. Os dados gerados serão processados ​​pelo conceito de espécie metagenômica. As sequências são agrupadas em espécies metagenômicas (MGS) com base em sua similaridade de sequência.

Determinação do tamanho da amostra: dois estudos anteriores com número menor ou semelhante de participantes mostraram que este estudo terá poder adequado. Além disso, este é um estudo piloto baseado em uma nova tecnologia de sequenciamento.

Cronograma: A aplicação ética foi aprovada e todas as amostras foram coletadas.