Projeto A4sc - Um Atlas de Vias Aéreas em Nível de Célula Única (A4sc)

A crescente incidência de doenças respiratórias crónicas é um problema de saúde pública que afecta centenas de milhares de pessoas em todo o mundo, incluindo crianças. Diretamente expostos aos aerocontaminantes atmosféricos (poluição, alérgenos), os tratos respiratórios representam um ecossistema complexo que envolve diferentes células que desenvolvem interações complexas com o tecido conjuntivo circundante, mas também com o seu rico ambiente imunológico e com a microbiota. Embora seja postulado um continuum fisiopatológico entre as vias aéreas nasais e brônquicas em certas doenças, como as doenças alérgicas, identificamos amplos gradientes na expressão gênica entre amostras nasais e brônquicas. É por isso que a variabilidade celular em toda a árvore respiratória precisa ser estudada detalhadamente.

O sequenciamento de RNAs especificamente presentes em uma determinada célula e sua comparação com células vizinhas nos permite documentar contribuições celulares precisas e relações intercelulares. Nosso projeto estabelecerá protocolos para estabilizar swabs de vias aéreas por escovação e/ou biópsia, em condições que permitirão a análise de perfis de expressão gênica em nível unicelular (sequenciamento de RNA unicelular).

O desenvolvimento do protocolo de estabilização e análise de "célula única" será realizado primeiro em culturas primárias de epitélio respiratório e depois estendido a amostras respiratórias colhidas de voluntários saudáveis. Através de amostragem em vários níveis da árvore respiratória, as variações na expressão ao longo do eixo traqueobrônquico serão totalmente documentadas. Por fim, a interação entre o compartimento epitelial e o compartimento imunológico será estudada através da análise da expressão gênica em uma única célula em diferentes contextos fisiopatológicos.