Efeito inflamatório e metabólico agudo da alta ingestão de frutose

Este será um ensaio clínico cruzado, randomizado e duplo-cego de três braços realizado no Instituto Alpha de Gastroenterologia do Hospital das Clínicas (Belo Horizonte, MG, Brasil). Todos os procedimentos experimentais serão conduzidos de acordo com as diretrizes estabelecidas na Declaração de Helsinque. O protocolo de pesquisa foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Federal de Minas Gerais (CAAE: 21852314.7.0000.5149). Todos os voluntários assinarão o consentimento informado antes do início do estudo.

Amostra O tamanho da amostra de 17 indivíduos foi calculado considerando o número mínimo de participantes para detectar uma diferença de pelo menos 11 mg/dL nos níveis de triglicerídeos, 1,2 ng/mL na adiponectina e 1,9 pg/mL no TNF (estudo piloto) antes e após a ingestão de uma única refeição contendo sobrecarga de frutose, intervalo de confiança de 95% e poder estatístico de 80%.

Desenho do estudo Cada participante fará três visitas com período de washout entre 7 e 21 dias. A cada visita, o participante passará por uma intervenção diferente. Três intervenções ocorrerão em ordem aleatória: (i) refeição padronizada mais sobrecarga de sacarose; (ii) refeição padronizada mais sobrecarga de glicose; (iii) refeição padronizada mais sobrecarga de frutose. Durante o período de washout, os sujeitos serão instruídos a manter seu comportamento alimentar habitual e atividade física. Os participantes serão instruídos a evitar o consumo de cafeína e bebidas alcoólicas e realizar atividade física intensa nas 24 horas anteriores a cada visita.

No dia de cada intervenção, os participantes irão ao ambulatório pela manhã após jejum noturno. Dados antropométricos (peso, altura e circunferência da cintura) serão coletados. A composição corporal será avaliada por bioimpedância (aparelho Quantum®, RJM Systems, Michigan) e a pressão arterial e frequência cardíaca (monitor digital, modelo HEM705CP®, Omron) serão medidas após 30 minutos de repouso.

Um cateter com torneira de três vias será inserido no braço dos voluntários. Amostras de sangue (5mL) serão coletadas após jejum noturno (basal) e 30, 60, 120 e 240 minutos após a refeição padronizada contendo sacarose ou sobrecarga de glicose ou frutose. Os participantes permaneceram sentados durante todo o período de avaliação.

Os participantes da intervenção receberão uma refeição padronizada de pão, presunto e margarina mais uma bebida açucarada (200mL) com quantidades semelhantes de diferentes carboidratos (sacarose, glicose ou frutose) em cada intervenção. As refeições fornecerão 25% das necessidades energéticas, calculadas a partir do gasto energético de repouso medido por calorimetria indireta (KORR®, MetaCheck) multiplicado pelo fator de atividade mais 10% referente ao efeito térmico dos alimentos. A refeição consistirá em 15% de proteína, 30% de gordura e 55% de carboidrato (30% de carboidratos complexos e 25% de sacarose ou glicose ou frutose). As bebidas adoçadas terão sabor artificial de frutas para evitar a identificação do conteúdo pelos pesquisadores e voluntários.

A quantidade de carboidratos refinados oferecidos aos participantes (18 - 25g em uma única refeição) será considerada uma sobrecarga, pois a Organização Mundial da Saúde e o Centro Nacional de Prevenção de Doenças Crônicas e Promoção da Saúde recomendam que o consumo de açúcares adicionados não ultrapasse 10%. do total de calorias diárias. Por exemplo, em uma dieta de 2.000 calorias, não mais do que 200 calorias devem vir de açúcares adicionados (cerca de 12 colheres de chá). Além disso, vários autores que investigaram o consumo de frutose a curto e longo prazo (≥ 3 semanas) em biomarcadores metabólicos e inflamatórios ofereceram 25% do gasto energético total (GET) na forma de sacarose, glicose, frutose ou xarope de milho com alto teor de frutose por dia. Por outro lado, a quantidade desses carboidratos oferecidos no presente estudo faz parte da rotina alimentar de muitos indivíduos (por exemplo, 200mL de refrigerante comum contém 21 gramas de sacarose).

Análise sanguínea Os níveis séricos de glicose, triglicerídeos, colesterol total, alanina aminotransferase (ALT) e aspartato aminotransferase (AST) serão medidos por teste enzimático colorimétrico (Bioclin®, Belo Horizonte, MG, Brasil). Os níveis séricos de adiponectina, leptina, resistina e TNF serão medidos por Enzyme Linked ImmuneSorbent Assay (ELISA) seguindo as instruções do fabricante (R&D Systems®). Os níveis séricos de IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-17, IFN-γ e eotaxina serão obtidos pelo método Cytometric Bead Array (CBA) (BD Bioscience, San Diego, CA, EUA) em citometria de fluxo. O sangue coletado será diluído em solução de Turk. O número de glóbulos brancos totais será obtido usando uma câmara de Neubauer (objetiva × 40).

Análises estatísticas Todas as variáveis ​​quantitativas serão apresentadas como média ± erro padrão (SEM). A normalidade das variáveis ​​quantitativas será testada por meio do teste de Shapiro-Wilk. Os testes t Simples de Student e Mann-Whitney permitirão comparações entre as características iniciais dos que completaram o estudo e dos que não o fizeram, e entre os voluntários que participarão da subamostra e os que não o fizeram. Para comparar as características antropométricas e clínicas entre as avaliações iniciais e posteriores, utilizaremos o teste ANOVA para medidas repetidas 1-fator ou Kruskal-Wallis de acordo com a normalidade seguido do pós-teste de Bonferroni. Marcadores metabólicos e inflamatórios pós-prandiais serão comparados pelo modelo de Equação de Estimativas Generalizadas (GEE) para avaliar o efeito da alocação de grupo (tipo de carboidrato), tempo e ajuste para efeito de grupo de tempo (interação). As variáveis ​​serão tratadas com a função de intervalo de conexão e a matriz de correlação será a covariância de um estimador não estruturado e robusto. O pós-teste de Bonferroni identificará a presença de efeitos signifcativos. A significância será estabelecida em P < 0,05. Os dados serão analisados ​​por meio do software Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) versão 20 e GraphPad Prism versão 5.0.