Гистологический анализ лимфатических сосудов, используемых для супермикрохирургических лимфовенозных анастомозов при лимфедеме (s-LVA)

Задний план:

Лимфедема – хроническое патологическое состояние, вызывающее значительные функциональные нарушения у больного и оказывающее большое влияние на качество его жизни. Он может быть первичным или вторичным. Вторичная лимфедема, которая является наиболее распространенной, обычно возникает в результате хирургического вмешательства и лучевой терапии рака, особенно груди, матки и предстательной железы, но также может возникнуть после травмы. Первичная лимфедема может быть врожденной или начаться в период полового созревания или, реже, после 35 лет, в этом случае часто после триггерного события, такого как травма или инфекция.

Специфического лечения этого крайне инвалидизирующего заболевания не существует, и пациенты должны на протяжении всей жизни пытаться уменьшить отек и ограничить его прогрессирование с помощью эластичного компрессионного белья и ручного лимфодренажа. За прошедшие годы было предложено несколько хирургических подходов, в том числе совсем недавно супермикрохирургический лимфатическо-венозный анастомоз (sLVA), позволяющий дренировать лимфу в венозный поток дистальнее обструкции. sLVA — малоинвазивная процедура, проводимая под местной анестезией с выпиской на следующий день после операции. Это требует точной визуализации лимфатических сосудов, которые все еще функционируют. Лимфатические сосуды визуализируются с помощью лимфографии с использованием флуоресцентного красителя индоцианина зеленого. В отдельных случаях также может быть полезен магнитный резонанс. Небольшие образцы сосуда, выбранного для выполнения LVA, можно легко взять во время операции, зафиксировать формалином и залить парафином для гистологических и иммуногистохимических исследований без дополнительного дискомфорта или осложнений для пациента.

Знания о гистопатологических аспектах лимфедемы чрезвычайно ограничены, поэтому это исследование следует рассматривать как исследовательское, возможно, предназначенное для создания большего количества гипотез, чем для их решения. Лучшее понимание физиопатологических механизмов лимфедемы может привести к более эффективному хирургическому подходу и, в отдельных случаях, даже предотвратить ее развитие со значительными преимуществами с точки зрения качества жизни пациента, а также с точки зрения снижения затрат национальной системы здравоохранения. прямые расходы, возникающие в связи с необходимостью прохождения непрерывной физиотерапии, и косвенные расходы, связанные с инвалидностью, тяжелыми интеркуррентными инфекциями, требующими госпитализации, и потерей рабочих дней).

Основной целью исследования является оценка гистопатологических особенностей лимфатических сосудов, анастомозирующих с венами. Первичная цель будет разделена на две фазы: 1. на вторичную лимфедему; 2. на первичную лимфедему.

Вторичной целью исследования является сопоставление гистопатологических параметров с другими клиническими данными: типом лимфедемы (первичная или вторичная), возрастом пациента, годами от начала заболевания, анатомической локализацией анастомоза, морфологическими характеристиками сосуда как оценивается до операции с помощью лимфографии или магнитно-резонансной томографии.

Полученные знания будут полезны для индивидуального подхода к профилактике и лечению лимфедемы. В частности, поможет:

1. Выберите пациентов, которые могут получить больше пользы от sLVA, и у них отдайте приоритет вмешательству.
2. Выберите лимфатические сосуды, которые с большей вероятностью дадут эффективный анастомоз с венами.
3. На основании сравнения морфологических особенностей лимфатических сосудов различных отделов конечности, пораженных лимфедемой, выбрать анатомические участки, в которых наиболее вероятно достижение эффективного анастомоза.

План эксперимента Это одноцентровое некоммерческое лабораторное исследование, которое будет проводиться на человеческом биологическом материале. Пациенты будут набираться с последовательной выборкой участников из всех тех, кто соответствует критериям приемлемости и готов дать информированное согласие. Образцы лимфатических сосудов, которые должны быть анастомозированы с венами, будут взяты во время sLVA, это может быть сделано без каких-либо неудобств для пациента, поскольку лимфатические сосуды часто бывают слишком длинными, и для выполнения анастомоза необходимо удалить сегмент. Обычно во время операции по техническим причинам удаляют 1-3 лимфатических сосуда/пациента. Эти образцы вместо уничтожения будут доставлены в лабораторию профессора Элизабетты Вебер, где они будут зафиксированы формалином и залиты парафином. Гистологические и иммуногистохимические исследования будут выполнены на полученных срезах, окрашенных соответствующими маркерами и/или красителями для лимфатического эндотелия (D2-40 и VEGFR-3) и гладкомышечных клеток. Для определения относительных пропорций гладкомышечных клеток и коллагеновых волокон в лимфатической стенке будут использованы соответствующие красители. Будет проведен морфометрический анализ данных, и данные будут связаны с полученными клиническими результатами.

Все данные будут подвергнуты статистической оценке. Поскольку нет предыдущего опыта, позволяющего оценить изменчивость параметров в исследовании, невозможно рискнуть провести формальный анализ статистической мощности исследования. Однако выборки из 25 пациентов должно быть достаточно, чтобы дать первую оценку изменчивости параметров и предоставить информацию для будущих исследований эффективности, основанных на модельных тестах проверки гипотез (Tukey, 1977). Поскольку выборка включает два различных типа лимфедемы, первичную и вторичную, требуется минимум 25 пациентов, чтобы иметь достаточное количество пациентов для каждой из этих двух групп. Выявить случаи вторичной лимфедемы не составит труда, так как она очень распространена (особенно в промышленно развитых странах, как следствие хирургического вмешательства и лучевой терапии для лечения рака), в то время как случаи первичной лимфедемы обнаружить будет труднее, так как этот тип Лимфедема встречается редко и часто не диагностируется или диагностируется неправильно. Если бы индивидуальная вариабельность была значительной, необходимо было бы увеличить число пациентов. Наконец, следует отметить, что, учитывая небольшой размер образцов (максимум 0,4 мм в диаметре, 2-5 мм в длину), не все гистологические препараты будут успешными. Поэтому исследователи считают целесообразным установить максимальное количество образцов в 200.

В статистическом анализе будут использоваться, а также описательные методы, методы сравнения и корреляции параметрические (t Стьюдента, линейная корреляция) или непараметрические (логистический анализ, хи-квадрат, ранговая корреляция Спирмена), в соответствии с особенности распределения данных, которые будут найдены. Корреляция между временем от начала лимфедемы и первичными и вторичными исходами будет исследована с помощью модели пропорциональных рисков Кокса. Различия в показателях результатов между недавними (

Цель исследования:

Цель состоит в том, чтобы лучше понять патогенетические аспекты и патофизиологию лимфедемы (о которой известно очень мало) и оценить структуру лимфатических сосудов в зависимости от стадии лимфедемы, чтобы оптимизировать выбор лимфатических сосудов, более подходящих для создания функционирующих анастомозов. . Полученные данные будут коррелировать с клиническим исходом, который будет оцениваться по следующим объективным параметрам: уменьшение окружности конечности, измеренное в нескольких точках (кисть, запястье, -5 см от локтя, локоть и +5 см от локтя; для голени : стопа, голеностоп, -10 см от колена, колено, до +10 см от колена); уменьшение/отсутствие эпизодов лимфангита; снижение класса компрессии эластичного компрессионного белья. Субъективные параметры также будут оцениваться как показатели качества жизни пациента: уменьшение дискомфорта, снижение чувства тяжести, способность легче носить одежду, улучшение социальной жизни.

Исследование будет проводиться в соответствии с этическими принципами Хельсинкской декларации в ее последней редакции. Участие в исследовании будет зависеть от получения свободного и информированного согласия.