使用 iFP 技术分离和表征癌症干细胞

近年来，人们对癌症干细胞 (CSC) 及其在癌症生物学和治疗中的意义越来越感兴趣。

CSC 是指肿瘤细胞的一个子集，它具有自我更新和生成构成肿瘤的不同细胞的能力。

这些细胞被称为癌症干细胞，以反映它们的“干细胞样”特性以及持续启动和维持肿瘤发生的能力。

CSC 与正常组织干细胞共享重要特性，包括自我更新（通过对称和不对称分裂）和分化能力，尽管是异常的。 然而，多谱系分化并不是 CSC 的强制性特征。 此外，这些细胞被认为对包括化学疗法和放射疗法在内的常规癌症疗法具有抗性，这可以解释主要由这种细胞亚型治疗后肿瘤细胞的快速再增殖，因此目前正在彻底研究靶向 CSC 的新治疗方法。

发现和识别 CSC 的主要困难之一是它们很难分离、生长和富集。

几种体外测定已用于鉴定干细胞，包括球体测定、连续菌落形成单位 (CFU) 测定（再接种测定）和标记保留测定。

还进行了旨在确定定义 CSC 的遗传特征的研究。 然而，这些方法中的每一种都有潜在的缺陷，使结果的解释复杂化。

因此，需要其他方法来轻松收获和丰富 CSC。 目前，绝大多数细胞培养在对细胞呈惰性的二维平面硬塑料板和烧瓶中。 然而，CSC 在 3-D 无血清条件下生长，这使得它们的生长缓慢且复杂。

通常，蛋白质，如纤连蛋白或胶原蛋白，已被用作涂层，使塑料更加“细胞友好”。 然而，收益率仍然很低；成本高，占地面积大（占地面积大）。 此外，附着在塑料上的细胞必须经过胰蛋白酶处理才能转移或植入，从而影响暴露于消化酶的细胞的存活。

纤维蛋白原是一种急性期蛋白，在人体血液中含量为2-4g/l，在使用糖皮质激素、炎症或外伤等治疗后，纤维蛋白原浓度升高，纤维蛋白原对培养的成纤维细胞和其他细胞产生粘附作用。 特别是纤维蛋白原及其各种裂解片段（D.E、FPA）被证明对巨噬细胞、人成纤维细胞和内皮细胞具有趋化作用。

纤维蛋白基质是常用的手术止血和组织密封纤维蛋白（原）——一种可能的候选物，可以从中制造用于细胞培养的 3-D 基质，它是血液凝固系统的主要组成部分。 天然纤维蛋白原可溶于水性缓冲液，通常不能用于细胞培养应用，除非用作塑料涂层。 然而，当与微量凝血酶混合时，它会转化为不溶性纤维蛋白凝块，吸引细胞并为组织修复提供临时基质。

实验方案：

1. 从已建立的人类癌症细胞系中生成和富集 CSC（体外）使用方法中描述的标准技术。 这些细胞将在含血清的培养基中以单层细胞的形式培养和生长，或在补充有生长因子的无血清培养基中以球体形式培养和生长。(18-7-19) 我们将评估细胞形成球体的能力，并使用表面标记检测和测量 ALDH 活性来表征它们的干细胞特性。

2. 在 iFP 物质上培养 CSC：

   iFP 可能对癌细胞表现出高附着反应，保护细胞表面标记，并产生最佳生长速率。 此外，IFP 上的细胞可以在没有胰蛋白酶消化的情况下转移，这可以减少从塑料板收获过程中的细胞损伤，从而提高存活率。

   如方法中所述，细胞将在涂有 iFP 物质的培养皿中培养。 培养 2 周后，将收集细胞，使用我们上述相同的方法（例如表面标记和 ALDH 活性）鉴定 CSC 的癌症干细胞特性。

3. 从新鲜肿瘤标本中分离和富集 CSC 此目的旨在通过研究、收获和培养从新鲜肿瘤中获得的 CSC 并随后将其用于体外治疗测试，从而促进 iFP 在癌症研究中的应用。 这种方法可以优化可能针对此类细胞的疗法。

根据内部审查和伦理委员会的规定，肿瘤标本将从同意的患者那里获得。

肿瘤样本将从肿瘤切除期间的组织学诊断评估中从病理科收集（当样本仍然新鲜时）。 因此，实验室将在手术后 30 分钟内收到样本。

肿瘤将制备成单细胞悬浮液，然后使用常规标准方法或 iFP 进行培养。 随后，将收集细胞并使用我们用于细胞系的相同方法评估 CSC 特征。 将在 iFP 和传统方法之间进行 CSC 百分比产量的比较。