功能基因组学方法对强直性脊柱炎 (AS) 的遗传易感性 (GENOSPA)

这是一项匹配病例对照研究，旨在确定强直性脊柱炎 (AS) 的遗传易感因素。

从 154 个家庭中选出的患者和家庭对照已被纳入全基因组连锁筛查，包括使用微阵列 Affymetrix® 250,000 单核苷酸多态性 (SNP) 进行基因分型的 440 名患者和 904 名个体。 对于每个基因座，保留预定义区域中 LOD 分数为 0;15 的家庭。 在这些家庭中，将选择同性别的患者和健康对照，如果可能，兄弟姐妹和可比年龄（相隔<10岁）。

将通过邮件和/或电话联系患者和对照以获得他们参与本研究。 将向他们发送一份更新的 AS 事件调查问卷，特别是检查家庭对照自纳入基因研究以来是否未发展为 AS。

患者和家属将在第一年控制招募和获得他们的树突状细胞 (DC)。

签署知情同意书后，每名纳入受试者抽取60ml全血。 从血液样本（白细胞）中获得的细胞将在实验室中培养 7 天，并用于提取将用于进行研究的 RNA。 其中一些细胞及其 RNA 将被冷冻，如果需要可以解冻供以后使用。

通过梯度离心 (Ficoll) 从全血中分离单核细胞。 在用与铁磁珠（Dynabeads）和磁体系统 Dynal 偶联的抗 CD14 抗体标记后选择 CD14 + 单核细胞，然后在 GM-CSF（粒细胞巨噬细胞集落刺激因子）和 IL-4（白细胞介素 4）存在的情况下进行分化) 6 天进入未成熟的 DC（树突细胞），根据在实验室验证并在常规中使用的协议。 然后通过添加脂多糖大肠杆菌 (Sigma) 诱导 DC 成熟 18 小时。 DC 沉淀将保留在 RNAlater® 中用于提取 RNA。

成熟 DCs 的转录组学研究将在招募结束时进行，并将运行两个月，包括一个月的实验和 1 个月的分析。 这项研究将使用全基因组外显子中心表达的微阵列进行。 分析将针对每个感兴趣的位点单独进行，并将影响每个区域中定位的基因的表达。 与已经获得的一般人群中的一组 15 名对照相比，患者和家庭对照的转录水平将被标准化。 对于每个基因座，将识别在患者组和家庭对照之间具有统计学差异表达且差异表达≥1的基因。 然后将通过定量实时 PCR（聚合酶链反应）验证这些基因的表达水平。

由于其转录物的差异表达而确定的位置和功能候选基因将被完全重新测序以搜索可能导致其表达水平变化的多态性。

研究人员希望在每个区域研究一到三个基因。 重新测序将主要在这些基因表达水平不同的患者和家庭对照中进行。 在这两个群体之间不同分布的多态性将保留用于研究的其余部分。

这些候选基因的重新测序将分布在 4 个月的时间内。