瘦素输注和内皮血管舒缩反应 (LIVARM)

简介 高 BMI，尤其是脂肪质量指数与冠状动脉疾病和其他心血管疾病的风险增加有关，但其潜在机制尚不清楚。 内皮功能障碍先于动脉粥样硬化，代表肥胖与心血管事件之间的重要联系。

脂肪组织产生细胞因子和激素（脂肪因子），过量时可能通过促炎、促血栓形成、血脂异常和动脉粥样硬化作用促进心血管疾病。

瘦素是一种具有多效性的脂肪因子，循环瘦素水平与体脂量呈正相关。 高血浆瘦素水平（高瘦素血症）与动脉粥样硬化、高血压和冠状动脉疾病 (CAD) 的发展有关。 瘦素激活在血管细胞等组织中表达的特定瘦素受体，表明瘦素可能参与内皮功能障碍和动脉粥样硬化的发展。

然而，瘦素对血管舒缩功能的净影响仍不清楚，因为已有血管舒张和血管收缩的报道。 瘦素在体外诱导一氧化氮 (NO) 的释放，并通过诱导 NO 合酶的内皮表达在小鼠中引起内皮依赖性血管舒张。 此外，对人体的研究表明，输注瘦素可舒张血管。 相比之下，其他研究表明瘦素诱导的体外血管收缩和狗的血管舒张功能受损。 已经提出了导致外周血管阻力增加的不同机制，例如血管炎症、交感神经系统 (SNS) 活性增加、内皮素-1 (ET-1) 产生增加以及一氧化氮 (NO) 生物利用度降低。

高瘦素血症与纤维蛋白溶解状态改变有关，这在糖尿病、心血管疾病和肥胖症中很常见。 然而，瘦素是否直接影响内源性纤溶功能尚不清楚。

这些研究的目的是评估瘦素对人类内皮功能的作用。 为此，在药理学诱导的高瘦素血症状态下，对健康男性的血管舒缩和纤维蛋白溶解功能进行了评估。 在一项平行研究中，对已确诊 CAD 且与血浆瘦素水平相关的患者的内皮功能进行了评估。

材料与方法

受试者 在瑞典于默奥招募了 17 名未服用任何常规药物的健康不吸烟男性志愿者（三名男性参与了方案 1 和方案 2）。 从苏格兰爱丁堡皇家医院的心脏病门诊招募了 83 名确诊为 CAD 的患者，该队列的特征之前已有报道。 这些患者患有稳定型心绞痛，并且之前有至少一根主要心外膜冠状血管的 ≥ 50% 管腔狭窄的血管造影记录。 每个受试者都获得了书面知情同意书，研究是根据赫尔辛基宣言进行的。

静脉闭塞体积描记术 受试者在每次研究访视前 24 小时禁酒，至少 4 小时禁食、禁烟和含咖啡因的饮料。 所有研究均在保持在 22-25 摄氏度 (ºC) 的安静温控室内进行。 将 17-G 静脉插管插入每只手臂的肘前静脉，并用 27-G 针头（Cooper's Needle Works Ltd，英国）在非优势手臂的肱动脉中插管。 双侧前臂血流量通过静脉闭塞体积描记法使用硅橡胶汞应变计测量。 使用半自动无创血压计测量血压和心率。 为避免急性血管舒缩作用，在每项研究的早晨停止使用所有药物。

学习规划

方案 1 在 10 名健康男性志愿者中，以 80、800 和 8,000 纳克/分钟（各 6 分钟）的递增剂量经动脉内输注重组人瘦素（Sigma-Aldrich，美国密苏里州圣路易斯）。 在每次给药结束时测定心率、血压、前臂血流量、瘦素、组织纤溶酶原激活物 (tPA) 抗原和纤溶酶原激活物抑制剂 1 型 (PAI-1) 抗原浓度。

方案 2 在一项双盲随机交叉研究中，10 名健康男性志愿者在两次不同的场合接受了瘦素 (800 ng/min) 或生理盐水的动脉内输注，两次访问之间至少间隔 2 周。 在基线和一小时瘦素/盐水输注期间定期测量输注和未输注手臂的前臂血流量。 此后，在动脉内输注瘦素/生理盐水的同时输注了四种血管扩张剂；缓激肽（释放 tPA 的内皮依赖性血管扩张剂）以 100、300 和 1,000 pmol/min（瑞士 Clinalfa Ltd），乙酰胆碱（不释放 tPA 的内皮依赖性血管扩张剂）以 5、10 和 20 µg/min（Clinalfa Ltd） ，瑞士），硝普钠（内皮非依赖性血管扩张剂），2、4 和 8 µg/min（David Bull 实验室，英国）和维拉帕米（内皮非依赖性血管扩张剂），10、30、100 µg/min（Abbott UK Ltd）每个浓度 6 分钟。 血管扩张剂以随机顺序输注，每种药物之间有 15 分钟的盐水冲洗期。 维拉帕米总是在最后给药，因为它具有持久的血管舒缩作用。

在基线、缓激肽输注之前和期间、60 分钟和研究方案结束时，从输注和未输注手臂获取静脉血。

方案 3 在 CAD 患者 (n=83) 中，在动脉内输注物质 P（释放 tPA 的内皮依赖性血管扩张剂）之前和期间测量双侧前臂血流量，速度为 2、4 和 8 pmol/min（Clinalfa Ltd， Switzerland），乙酰胆碱以 5、10 和 20 µg/min（如上）和硝普钠以 2、4 和 8 µg/min（如上）在每个浓度下持续 6 分钟。 缓激肽没有给药，因为许多受试者正在接受血管紧张素转换酶抑制治疗，这显着增强了它的血管扩张和纤维蛋白溶解作用。 血管扩张剂以随机顺序给药，每种药物之间有 15 分钟的盐水冲洗期。 在动脉内输注 P 物质之前和期间获取静脉血样，以测量纤维蛋白溶解标记物。

静脉取样和测定 将空腹静脉血样抽入含有酸化缓冲柠檬酸盐或柠檬酸三钠的试管中。 立即将样品收集到冰上并以 2,000 g 离心 30 分钟。 测定前将无血小板血浆和血清储存在-80°C。 根据临床常规测定脑利钠肽 (BNP)、胆固醇和葡萄糖浓度，并使用粒子增强免疫比浊法 (Behring BN II 浊度计) 通过高灵敏度测定法测定高灵敏度 C 反应蛋白 (hsCRP)。 使用双抗体放射免疫测定法（Millipore，Billerica，Massachusetts，USA）测量血浆瘦素浓度。 在低 (2-4 ng/mL) 和高 (10-15 ng/mL) 瘦素浓度下，批内和批间变异系数均小于 5%。 使用酶联免疫吸附测定法（Coaliza®，Chromogenix Ltd）测定血浆 tPA 和 PAI-1 抗原浓度，并使用光度法（Coatest tPA，Chromogenix Ltd）测定血浆 tPA 活性。 tPA 抗原和活性的纤维蛋白溶解测定的变异系数分别为 5.9% 和 12%，PAI-1 抗原的变异系数为 6.2%。 tPA 的估计净释放（抗原和活性）如前所述在每次给予缓激肽或 P 物质后计算，作为输注前臂血浆流量和输注前臂与未输注前臂之间血浆水平差异的乘积。