特定 microRNA 在丛集性头痛中的作用 (5*1000)

背景 根据《国际头痛疾病分类》第三版，丛集性头痛 (CH) 是一种原发性头痛，包括在三叉神经自主神经性头痛 (TAC) 中。 CH 的特点是多方面且不完全了解的病理生理学。 下丘脑、三叉神经血管复合体和三叉神经自主反射被认为发挥着重要作用。

越来越多的实验证据强调了特定的 microRNA (miRNA) 与慢性疼痛和原发性头痛（包括偏头痛）有关。 miRNA 是小的内源性非编码 RNA，长度约为 22 个核苷酸。 miRNA 通过促进信使 RNA (mRNA) 降解或抑制 mRNA 翻译，充当基因表达的转录后调节因子。 miRNA 执行的调节过程是复杂且明确的，因为单个 miRNA 可能针对数百个不同的 mRNA，相反，每个 mRNA 可能受到多个 miRNA 的调节。 据估计，超过 60% 的蛋白质编码基因受到 miRNA 的调节，从而决定了涉及分化、发育和信号转导的多种细胞过程的多效性调节。 miRNA 参与疼痛的产生和维持，一些证据表明特定的 miRNA 可能在偏头痛中发挥作用。

在最近的一项研究中，我们观察到慢性偏头痛 (CM) 受试者外周血单核细胞 (PBMC) 中两种 miRNA（miR-382-5p 和 miR-34a-5p）的基因表达上调。 与阵发性偏头痛患者和健康受试者 (HC) 相比，这些 miRNA 参与炎症调节和 γ-氨基丁酸 (GABA) 的释放。 这些发现强调了这些 miRNA 的基因表达与偏头痛表型及其严重程度之间的相关性。

最近的研究表明某些神经肽在 CH 中发挥着积极作用。 丹麦研究小组确实证明，在疾病活动期进行研究时，静脉注射 CGRP、PACAP 或 VIP 可以在至少 50% 的参与者中诱发急性 CH 发作。

截至目前，尚无关于 miRNA 可能参与 CH 的数据。 本研究旨在详细探讨 miRNA 在丛集性头痛中的作用，有助于我们了解这种原发性头痛疾病的病理生理学。 此外，所获得的结果可能为开发可用于CH领域的新一代分子铺平道路，例如miRNA激动剂（Agomir）和拮抗剂（Antagomir）。

目的 我们当前项目的主要目标是研究活动期发作性 CH 受试者中与疼痛调节相关的 miRNA（miR-382-5p、miR-34a-5p 和 miR-155）的外周表达（eCH- act）、缓解期发作性 CH（eCH-rem）、慢性 CH（cCH）和健康对照受试者（HC）。

方法

所有受试者都将随着时间的推移进行一次评估，在此期间他们将经历：

• 研究程序的解释和知情同意书的签署
• 筛选访问
• 临床和人口统计数据收集（基于头痛日记的修订）
• 空腹静脉血采样
• 调查问卷的管理

所有受试者都将在早上禁食后进行评估。 对于受 cCH 或 eCH-act 影响的受试者，采样预计在危重间期进行，即 eCH 患者至少 3 小时没有 CH 发作，eCH 患者至少 8 小时没有 CH 发作。 cCH。 抽血后，患者将留在中心填写一套调查问卷。 这将使研究人员能够监测患者至少 2 小时，以排除在 CH 发作前立即进行血液采样的情况。

对于 eCH 患者，“活跃”和“缓解”阶段定义如下：

• 活跃阶段：CH 攻击已持续至少 7 天的阶段。
• 缓解期：特征是在没有药物治疗的情况下至少连续 15 天没有丛集性头痛发作。

将通过实时逆转录 (RT-PCR) 评估 PBMC 中的 miR-382-5p、miR-34a-5p 和 miRNA-155 基因表达。 该评估将使用 U6（一种用作管家基因的小核 RNA）进行标准化，并表示为相对定量 (RQ)。 将使用经过验证的商业 ELISA 试剂盒测量 CGRP α、PACAP 和 VIP 的血浆水平。 生化分析计划方法的详细描述可以在这里找到：https://doi.org/10.1186/s10194-020-01189-0。

该套临床问卷将包括：偏头痛残疾评估 (MIDAS)、头痛影响测试 (HIT-6)、丛集性头痛影响问卷 (CHIQ)。

样本量计算和预先计划的统计分析 计算时考虑以下参数： 效应量：0.5；阿尔法误差：0.05； beta误差：0.05（功效：95%）；组数：4。

使用免费软件平台 G*Power（版本 1.0）进行样本量计算。 3.1.9.7) 对 4 组应用 Bonferroni 校正的 ANOVA 检验。 建议的最小样本量为 76 名受试者（每组 19 名受试者）。 为了考虑潜在的变异性，我们计划总共招募 100 名受试者，每组 25 名受试者。

参数或非参数相关性将用于测量生化变量和临床变量之间的关系。 根据单变量分析的结果进行多变量分析。 统计显着性将设定在 5% 水平 (p<0.05)。