군발두통에서 특정 마이크로RNA의 역할 (5*1000)

배경군발두통(CH)은 국제두통질환 분류 제3판에 따라 삼차자율신경두통(TAC)에 포함되는 일차 두통입니다. CH는 다면적이고 불완전하게 이해되는 병태생리학을 특징으로 합니다. 시상하부, 삼차-혈관 복합체, 삼차-자율 반사가 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있습니다.

점점 더 많은 실험적 증거가 편두통을 포함한 만성 통증 및 원발성 두통에 특정 마이크로RNA(miRNA)가 관여한다는 사실을 강조하고 있습니다. miRNA는 길이가 약 22개 뉴클레오티드인 작은 내인성 비암호화 RNA입니다. miRNA는 메신저 RNA(mRNA) 분해를 촉진하거나 mRNA 번역을 억제함으로써 유전자 발현의 전사 후 조절인자로 작동합니다. 개별 miRNA가 수백 개의 서로 다른 mRNA를 표적으로 삼을 수 있고, 반대로 각 mRNA가 여러 miRNA에 의해 조절될 수 있기 때문에 miRNA에 의해 수행되는 조절 과정은 복잡하고 명확합니다. 모든 단백질 코딩 유전자의 60% 이상이 miRNA에 의해 조절되며 결과적으로 분화, 발달 및 신호 전달과 관련된 다양한 세포 과정의 다발성 조절을 결정하는 것으로 추정됩니다. miRNA는 통증의 생성과 유지에 관여하며, 특정 miRNA가 편두통에 역할을 할 수 있다는 여러 증거가 있습니다.

최근 연구에서 우리는 만성 편두통(CM) 환자의 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에서 두 개의 miRNA인 miR-382-5p와 miR-34a-5p의 유전자 발현이 상향 조절되는 것을 관찰했습니다. 이러한 miRNA는 간헐적 편두통이 있는 개인과 건강한 대상(HC)에 비해 염증 조절 및 γ-아미노부티르산(GABA)의 방출에 관여합니다. 이러한 발견은 이들 miRNA의 유전자 발현과 편두통 표현형 및 그 심각도 사이의 상관관계를 강조합니다.

최근 연구에서는 CH에서 특정 신경펩티드의 적극적인 역할을 제안합니다. 덴마크 그룹은 질병의 활성 단계에서 연구할 때 CGRP, PACAP 또는 VIP의 정맥 투여가 참가자의 최소 50%에서 급성 CH 발작을 유발할 수 있음을 실제로 입증했습니다.

현재로서는 CH에 miRNA가 포함될 가능성에 관한 데이터가 없습니다. 이 연구의 목적은 군발성 두통에서 miRNA의 역할에 대한 자세한 탐구를 제공하여 이 원발성 두통 질환의 병태생리학을 이해하는 데 도움이 되는 것입니다. 또한, 얻은 결과는 miRNA 작용제(Agomir) 및 길항제(Antagomir)와 같이 CH 분야에서 사용할 수 있는 새로운 세대의 분자 개발을 위한 길을 열어줄 수 있습니다.

목표 현재 프로젝트의 주요 목적은 활성 단계(eCH- 행위), 완화 단계의 일시적 CH(eCH-rem), 만성 CH(cCH) 및 건강한 대조군 대상(HC).

행동 양식

모든 피험자는 시간이 지남에 따라 단일 평가를 수행하며 그 동안 다음을 수행합니다.

• 연구 절차에 대한 설명 및 사전 동의서 서명
• 검진 방문
• 임상 및 인구통계학적 데이터 수집(두통일지 개정을 기반으로 함)
• 공복 정맥혈 샘플링
• 설문지 관리

모든 피험자는 밤 금식 후 아침에 평가됩니다. cCH 또는 eCH-act의 영향을 받은 피험자의 경우 샘플링은 eCH 환자의 경우 최소 3시간 동안, eCH 환자의 경우 최소 8시간 동안 CH 공격이 없는 것으로 정의되는 임계 간 단계에서 수행될 것으로 예상됩니다. cCH. 혈액 샘플링 후 환자는 센터에 머물면서 일련의 설문지를 작성하게 됩니다. 이를 통해 조사관은 CH 공격 직전에 혈액 샘플링이 수행되는 것을 제외하기 위해 최소 2시간 동안 환자를 모니터링할 수 있습니다.

eCH 환자의 경우 "활성" 및 "완화" 단계는 다음과 같이 정의됩니다.

• 활성 단계: CH 공격이 최소 7일 동안 존재하는 단계입니다.
• 완화기: 약물치료 없이 최소 15일 연속으로 군발두통발작이 없는 상태를 말합니다.

miR-382-5p, miR-34a-5p 및 miRNA-155 유전자 발현은 실시간 역전사(RT-PCR)를 통해 PBMC에서 평가됩니다. 이 평가는 U6(하우스키핑 유전자로 사용되는 작은 핵 RNA의 일종)로 정규화되고 상대 정량화(RQ)로 표현됩니다. CGRP 알파, PACAP 및 VIP의 혈장 수준은 검증된 상업용 ELISA 키트를 사용하여 측정됩니다. 생화학적 분석을 위해 계획된 방법에 대한 자세한 설명은 여기(https://doi.org/10.1186/s10194-020-01189-0)에서 확인할 수 있습니다.

임상 설문지 세트에는 편두통 장애 평가(MIDAS), 두통 영향 테스트(HIT-6), 군발성 두통 영향 설문지(CHIQ)가 포함됩니다.

표본 크기 계산 및 사전 계획된 통계 분석 계산을 위해 다음 매개변수가 고려되었습니다: 효과 크기: 0.5; 알파 오류: 0.05; 베타 오류: 0.05(검정력: 95%); 그룹 수: 4.

샘플 크기 계산은 프리웨어 플랫폼 G*Power(ver. 3.1.9.7) 4개 그룹에 Bonferroni 보정을 적용한 ANOVA 테스트입니다. 권장되는 최소 표본 크기는 76명(그룹당 19명)입니다. 잠재적인 변동성을 설명하기 위해 그룹당 25명의 대상으로 총 100명의 대상을 등록할 계획입니다.

생화학적 변수와 임상 변수 사이의 관계를 측정하기 위해 매개변수적 또는 비모수적 상관관계가 사용됩니다. 단변량 분석 결과에 따라 다변량 분석이 수행됩니다. 통계적 유의성은 5% 수준(p<0.05)으로 설정됩니다.