Rolle af specifikke mikroRNA'er i klyngehovedpine (5*1000)

Baggrund Klyngehovedpine (CH) er en primær hovedpine inkluderet i trigeminus autonome cephalalgier (TAC'er) i henhold til International Calssification of Headache Disorder, tredje udgave. CH er karakteriseret ved en mangefacetteret og ufuldstændigt forstået patofysiologi. Hypothalamus, det trigeminus-vaskulære kompleks og den trigeminus-autonome refleks menes at spille en væsentlig rolle.

Stigende eksperimentelle beviser har fremhævet involveringen af ​​specifikke mikroRNA'er (miRNA'er) i kronisk smerte og primær hovedpine, herunder migræne. miRNA'er er små endogene ikke-kodende RNA'er, der er omkring 22 nukleotider lange. miRNA'er fungerer som post-transkriptionel regulator af genekspression ved at fremme messenger RNA (mRNA) nedbrydning eller undertrykke mRNA translation. Reguleringsprocessen udført af miRNA'er er kompleks og artikuleret, da et individuelt miRNA kan målrette mod hundredvis af forskellige mRNA'er, og omvendt kan hvert mRNA reguleres af flere miRNA'er. Det er blevet anslået, at mere end 60% af alle proteinkodende gener er reguleret af miRNA'er, som konsekvent bestemmer den pleiotrope modulering af en lang række cellulære processer, der involverer differentiering, udvikling og signalering. miRNA'er er involveret i generering og vedligeholdelse af smerte, og flere beviser tyder på, at specifikke miRNA'er kan spille en rolle i migræne.

I en nylig undersøgelse observerede vi en opregulering af genekspression i to miRNA'er, miR-382-5p og miR-34a-5p, i perifere blodmononukleære celler (PBMC'er) hos personer med kronisk migræne (CM). Disse miRNA'er er involveret i inflammationsmodulation og frigivelse af γ-aminosmørsyre (GABA) sammenlignet med personer med episodisk migræne og raske forsøgspersoner (HC'er). Disse fund understreger en sammenhæng mellem genekspressionen af ​​disse miRNA'er og migrænefænotypen, såvel som dens sværhedsgrad.

Nylige undersøgelser tyder på en aktiv rolle for visse neuropeptider i CH. Den danske gruppe har faktisk påvist, at intravenøs administration af CGRP, PACAP eller VIP kan inducere akutte CH-anfald hos mindst 50 % af deltagerne, når de studeres i den aktive fase af sygdommen.

Lige nu er der ingen data vedrørende den potentielle involvering af miRNA'er i CH. Denne undersøgelse har til formål at give en detaljeret udforskning af miRNAs rolle i klyngehovedpine, hvilket bidrager til vores forståelse af patofysiologien af ​​denne primære hovedpinelidelse. Ydermere kan de opnåede resultater bane vejen for udviklingen af ​​en ny generation af molekyler, der kunne bruges inden for CH, såsom miRNA-agonister (Agomir) og antagonister (Antagomir).

Mål Det primære formål med vores nuværende projekt er at undersøge den perifere ekspression af miRNA'er impliceret i smertemodulation (miR-382-5p, miR-34a-5p og miR-155) hos forsøgspersoner med episodisk CH i den aktive fase (eCH- act), episodisk CH i remissionsfasen (eCH-rem), kronisk CH (cCH) og raske kontrolpersoner (HC).

Metoder

Alle forsøgspersoner vil udføre en enkelt evaluering over tid, hvor de vil gennemgå:

• forklaring af undersøgelsesprocedurer og underskrivelse af informeret samtykke
• screeningsbesøg
• klinisk og demografisk dataindsamling (baseret på revision af en hovedpinedagbog)
• fastende venøs blodprøvetagning
• administration af spørgeskemaer

Alle forsøgspersoner vil blive evalueret om morgenen efter natfaste. For forsøgspersoner, der er ramt af cCH eller eCH-act, forventes prøvetagning at blive udført i den interkritiske fase, som defineret ved fravær af CH-angreb i mindst 3 timer hos patienter med eCH og i mindst 8 timer hos patienter med cCH. Efter blodprøvetagning vil patienter blive på centret for at udfylde et sæt spørgeskemaer. Dette vil give investigatoren mulighed for at overvåge patienterne i mindst 2 timer for at udelukke, at en blodprøve tages umiddelbart før et CH-anfald.

For patienter med eCH vil de "aktive" og "remissions" faser blive defineret som følger:

• Aktiv fase: den fase, hvor CH-anfald har været til stede i mindst 7 dage.
• Remissionsfase: karakteriseret ved fravær af klyngehovedpineanfald i mindst 15 på hinanden følgende dage uden farmakologisk behandling.

miR-382-5p, miR-34a-5p og miRNA-155 genekspression vil blive evalueret i PBMC'er ved real-time revers transkription (RT-PCR). Denne vurdering vil blive normaliseret med U6 (en type lille nuklear RNA, der bruges som husholdningsgen) og udtrykt som relativ kvantificering (RQ). Plasmaniveauer af CGRP alfa, PACAP og VIP vil blive målt ved hjælp af validerede kommercielle ELISA-kits. En detaljeret beskrivelse af de planlagte metoder til de biokemiske analyser kan findes her: https://doi.org/10.1186/s10194-020-01189-0.

Sættet af kliniske spørgeskemaer vil omfatte: Migræne Handicap Assessment (MIDAS), Headache Impact Test (HIT-6), Cluster Headache Impact Questionnarie (CHIQ).

Prøvestørrelsesberegning og forudplanlagt statistisk analyse Følgende parametre blev taget i betragtning ved beregningen: Effektstørrelse: 0,5; alfa fejl: 0,05; beta fejl: 0,05 (effekt: 95%); antal grupper: 4.

Prøvestørrelsesberegning blev udført ved hjælp af freeware-platformen G*Power (ver. 3.1.9.7) for en ANOVA-test med Bonferroni-korrektion anvendt på de 4 grupper. Den mindste foreslåede stikprøvestørrelse er 76 forsøgspersoner (19 forsøgspersoner pr. gruppe). For at tage højde for potentiel variabilitet planlægger vi at tilmelde i alt 100 emner med 25 emner pr. gruppe.

Parametriske eller ikke-parametriske korrelationer vil blive brugt til at måle sammenhængen mellem biokemiske variable og kliniske variable. Multivariate analyser vil blive udført i henhold til resultaterne af den univariate analyse. Statistisk signifikans vil blive sat til 5 % niveauet (p<0,05).