Specifikus mikroRNS-ek szerepe a cluster fejfájásban (5*1000)

Háttér A cluster fejfájás (CH) egy elsődleges fejfájás, amely a trigeminális autonóm cefalalgiákban (TAC) szerepel a fejfájás zavarainak nemzetközi kalcifikációja, harmadik kiadása szerint. A CH-t sokrétű és nem teljesen ismert patofiziológia jellemzi. Úgy gondolják, hogy a hipotalamusz, a trigeminus-vascularis komplexum és a trigeminus-autonóm reflex jelentős szerepet játszik.

Az egyre növekvő kísérleti bizonyítékok rávilágítottak a specifikus mikroRNS-ek (miRNS-ek) szerepére a krónikus fájdalomban és az elsődleges fejfájásban, beleértve a migrént is. A miRNS-ek kisméretű, endogén, nem kódoló RNS-ek, amelyek körülbelül 22 nukleotid hosszúak. A miRNS-ek a génexpresszió poszt-transzkripciós szabályozójaként működnek azáltal, hogy elősegítik a hírvivő RNS (mRNS) lebomlását vagy elnyomják az mRNS transzlációt. A miRNS-ek által végrehajtott szabályozási folyamat összetett és tagolt, mivel egy egyedi miRNS több száz különböző mRNS-t célozhat meg, és fordítva, minden mRNS-t több miRNS is szabályozhat. Becslések szerint az összes fehérjét kódoló gén több mint 60%-át miRNS-ek szabályozzák, amelyek következésképpen meghatározzák számos sejtfolyamat pleiotróp modulációját, beleértve a differenciálódást, fejlődést és jelátvitelt. A miRNS-ek részt vesznek a fájdalom kialakulásában és fenntartásában, és számos bizonyíték arra utal, hogy a specifikus miRNS-ek szerepet játszhatnak a migrénben.

Egy közelmúltbeli tanulmányban a génexpresszió fokozódását figyeltük meg két miRNS-ben, a miR-382-5p-ben és a miR-34a-5p-ben a perifériás vér mononukleáris sejtjeiben (PBMC) krónikus migrénben (CM) szenvedő betegeknél. Ezek a miRNS-ek részt vesznek a gyulladás modulációjában és a γ-amino-vajsav (GABA) felszabadulásában, összehasonlítva az epizodikus migrénes egyénekkel és az egészséges alanyokkal (HC-k). Ezek az eredmények alátámasztják az összefüggést ezen miRNS-ek génexpressziója és a migrén fenotípusa, valamint annak súlyossága között.

A legújabb vizsgálatok azt sugallják, hogy bizonyos neuropeptidek aktív szerepet játszanak a CH-ban. A dán csoport valóban bebizonyította, hogy a CGRP, PACAP vagy VIP intravénás beadása akut CH-rohamot válthat ki a résztvevők legalább 50%-ánál, ha a betegség aktív fázisában vizsgálták.

Jelenleg nincs adat a miRNS-ek potenciális szerepéről a CH-ban. Ennek a tanulmánynak az a célja, hogy részletesen feltárja a miRNS-ek szerepét a cluster fejfájásban, hozzájárulva az elsődleges fejfájás patofiziológiájának megértéséhez. A kapott eredmények továbbá utat nyithatnak a CH területén használható új generációs molekulák, például miRNS agonisták (Agomir) és antagonisták (Antagomir) kifejlesztéséhez.

Célkitűzések Jelen projektünk elsődleges célja a fájdalommodulációban szerepet játszó miRNS-ek (miR-382-5p, miR-34a-5p és miR-155) perifériás expressziójának vizsgálata olyan alanyokon, akiknél epizódos CH az aktív fázisban (eCH-). aktus), epizodikus CH a remissziós fázisban (eCH-rem), krónikus CH (cCH) és egészséges kontroll alanyok (HC).

Mód

Minden alany egyetlen értékelést végez az idő múlásával, amely során a következőkön esnek át:

• a vizsgálati eljárások magyarázata és a beleegyező nyilatkozat aláírása
• szűrőlátogatás
• klinikai és demográfiai adatgyűjtés (fejfájásnapló átdolgozása alapján)
• éhomi vénás vérvétel
• kérdőívek adminisztrációja

Minden alany értékelése reggel, éjszakai koplalás után történik. A cCH vagy eCH-act által érintett alanyok esetében a mintavételt az interkritikus fázisban kell elvégezni, amelyet a CH-rohamok hiánya határozza meg eCH-ban szenvedő betegeknél legalább 3 órán keresztül, és legalább 8 órán keresztül cCH. A vérvétel után a betegek a Központban maradnak, hogy kitöltsenek egy kérdőívet. Ez lehetővé teszi a vizsgáló számára, hogy legalább 2 órán keresztül megfigyelje a betegeket, kizárva annak lehetőségét, hogy közvetlenül a CH-roham előtt vérmintát vegyenek.

Az eCH-ban szenvedő betegek esetében az "aktív" és a "remissziós" fázist a következőképpen határozzák meg:

• Aktív fázis: az a fázis, amelyben a CH-rohamok legalább 7 napig jelen vannak.
• Remissziós fázis: gyógyszeres kezelés nélkül, legalább 15 egymást követő napon át a cluster fejfájás rohamok hiánya jellemzi.

A miR-382-5p, miR-34a-5p és miRNS-155 génexpresszióját valós idejű reverz transzkripcióval (RT-PCR) értékeljük PBMC-ben. Ezt az értékelést U6-tal (egy kis nukleáris RNS típusa, amelyet háztartási génként használnak) normalizálják, és relatív mennyiségi meghatározásként (RQ) fejezik ki. A CGRP alfa, a PACAP és a VIP plazmaszintjét validált kereskedelmi ELISA készletekkel mérik. A biokémiai vizsgálatokhoz tervezett módszerek részletes leírása itt található: https://doi.org/10.1186/s10194-020-01189-0.

A klinikai kérdőívek a következőket tartalmazzák majd: Migrén fogyatékosság felmérése (MIDAS), Fejfájás Impact Test (HIT-6), Cluster fejfájás Impact Questionnarie (CHIQ).

Mintaméret számítás és előre megtervezett statisztikai elemzés A számításhoz a következő paramétereket vettük figyelembe: Hatásméret: 0,5; alfa hiba: 0,05; béta hiba: 0,05 (teljesítmény: 95%); csoportok száma: 4.

A minta méretének kiszámítása a G*Power ingyenes platformon (ver. 3.1.9.7) ANOVA teszthez Bonferroni-korrekcióval a 4 csoportra. A javasolt minimális mintanagyság 76 alany (csoportonként 19 alany). A lehetséges változékonyság figyelembevétele érdekében összesen 100 tárgy felvételét tervezzük, csoportonként 25 tantárgyat.

Paraméteres vagy nem paraméteres korrelációkat fogunk használni a biokémiai változók és a klinikai változók közötti kapcsolat mérésére. A többváltozós elemzések az egyváltozós elemzés eredményeinek megfelelően kerülnek végrehajtásra. A statisztikai szignifikancia 5%-os szinten lesz beállítva (p<0,05).