Rola specyficznych mikroRNA w klasterowym bólu głowy (5*1000)

Tło Klasterowy ból głowy (CH) jest pierwotnym bólem głowy zaliczanym do trójdzielno-autonomicznych bólów głowy (TAC) według Międzynarodowej Klasyfikacji Bólu Głowy, wydanie trzecie. CH charakteryzuje się wieloaspektową i nie do końca poznaną patofizjologią. Uważa się, że podwzgórze, zespół trójdzielno-naczyniowy i odruch trójdzielno-autonomiczny odgrywają znaczącą rolę.

Coraz więcej dowodów eksperymentalnych podkreśla udział specyficznych mikroRNA (miRNA) w przewlekłym bólu i pierwotnych bólach głowy, w tym w migrenie. miRNA to małe endogenne, niekodujące RNA o długości około 22 nukleotydów. miRNA działają jako potranskrypcyjny regulator ekspresji genów, promując degradację informacyjnego RNA (mRNA) lub tłumiąc translację mRNA. Proces regulacji przeprowadzany przez miRNA jest złożony i wyraźny, ponieważ pojedynczy miRNA może atakować setki różnych mRNA i odwrotnie, każdy mRNA może być regulowany przez wiele miRNA. Oszacowano, że ponad 60% wszystkich genów kodujących białka jest regulowanych przez miRNA, które w konsekwencji określają plejotropową modulację szerokiej gamy procesów komórkowych obejmujących różnicowanie, rozwój i sygnalizację. miRNA biorą udział w wytwarzaniu i utrzymywaniu bólu, a kilka dowodów sugeruje, że specyficzne miRNA mogą odgrywać rolę w migrenie.

W niedawnym badaniu zaobserwowaliśmy zwiększenie ekspresji genów w dwóch miRNA, miR-382-5p i miR-34a-5p, w jednojądrzastych komórkach krwi obwodowej (PBMC) u osób z przewlekłą migreną (CM). Te miRNA biorą udział w modulacji stanu zapalnego i uwalnianiu kwasu γ-aminomasłowego (GABA) w porównaniu z osobami cierpiącymi na migrenę epizodyczną i osobami zdrowymi (HC). Odkrycia te podkreślają korelację między ekspresją genów tych miRNA a fenotypem migreny, a także jej nasileniem.

Ostatnie badania sugerują aktywną rolę niektórych neuropeptydów w CH. Duńska grupa rzeczywiście wykazała, że ​​dożylne podanie CGRP, PACAP lub VIP może wywołać ostre ataki CH u co najmniej 50% uczestników, gdy badano je w aktywnej fazie choroby.

Jak dotąd nie ma danych dotyczących potencjalnego udziału miRNA w CH. Celem tego badania jest szczegółowe zbadanie roli miRNA w klasterowym bólu głowy, przyczyniając się do zrozumienia patofizjologii tego pierwotnego zaburzenia bólu głowy. Ponadto uzyskane wyniki mogą utorować drogę do opracowania nowej generacji cząsteczek, które można zastosować w dziedzinie CH, takich jak agoniści miRNA (Agomir) i antagoniści (Antagomir).

Cele Głównym celem naszego obecnego projektu jest zbadanie obwodowej ekspresji miRNA zaangażowanych w modulację bólu (miR-382-5p, miR-34a-5p i miR-155) u osób z epizodyczną CH w fazie aktywnej (eCH- act), epizodyczną CH w fazie remisji (eCH-rem), przewlekłą CH (cCH) i zdrową grupę kontrolną (HC).

Metody

Wszyscy badani przeprowadzą pojedynczą ocenę rozłożoną w czasie, podczas której zostaną poddani:

• wyjaśnienie procedur badania i podpisanie świadomej zgody
• wizyta przesiewowa
• zbieranie danych klinicznych i demograficznych (na podstawie rewizji dzienniczka bólu głowy)
• pobieranie krwi żylnej na czczo
• administrowanie ankietami

Wszyscy pacjenci będą oceniani rano, po nocnym poszczeniu. W przypadku pacjentów dotkniętych cCH lub eCH-act oczekuje się, że pobieranie próbek będzie przeprowadzane w fazie międzykrytycznej, zgodnie z definicją braku napadów CH przez co najmniej 3 godziny u pacjentów z eCH i przez co najmniej 8 godzin u pacjentów z cCH. Po pobraniu krwi pacjenci będą przebywać w Centrum w celu wypełnienia zestawu kwestionariuszy. Umożliwi to badaczowi monitorowanie pacjentów przez co najmniej 2 godziny, aby wykluczyć konieczność pobierania krwi bezpośrednio przed atakiem CH.

W przypadku pacjentów z eCH fazy „aktywną” i „remisyjną” zostaną zdefiniowane w następujący sposób:

• Faza aktywna: faza, podczas której ataki CH występują przez co najmniej 7 dni.
• Faza remisji: charakteryzuje się brakiem klasterowych napadów bólu głowy przez co najmniej 15 kolejnych dni bez leczenia farmakologicznego.

Ekspresja genów miR-382-5p, miR-34a-5p i miRNA-155 będzie oceniana w PBMC metodą odwrotnej transkrypcji w czasie rzeczywistym (RT-PCR). Ocena ta zostanie znormalizowana za pomocą U6 (rodzaj małego jądrowego RNA używanego jako gen metabolizmu podstawowego) i wyrażona jako względna kwantyfikacja (RQ). Poziomy CGRP alfa, PACAP i VIP w osoczu będą mierzone przy użyciu zwalidowanych komercyjnych zestawów ELISA. Szczegółowy opis metod zaplanowanych do analiz biochemicznych można znaleźć tutaj: https://doi.org/10.1186/s10194-020-01189-0.

Zestaw kwestionariuszy klinicznych będzie obejmował: Ocenę Niepełnosprawności Migrenowej (MIDAS), Test Uderzenia Bólu Głowy (HIT-6), Kwestionariusz Wpływu Klasterowego Bólu Głowy (CHIQ).

Obliczenie wielkości próby i wcześniej zaplanowana analiza statystyczna. Do obliczeń wzięto pod uwagę następujące parametry: Wielkość efektu: 0,5; błąd alfa: 0,05; błąd beta: 0,05 (moc: 95%); ilość grup: 4.

Obliczenia wielkości próby przeprowadzono przy użyciu darmowej platformy G*Power (wer. 3.1.9.7) dla testu ANOVA z poprawką Bonferroniego zastosowaną do 4 grup. Minimalna sugerowana wielkość próby wynosi 76 osób (19 osób w grupie). Aby uwzględnić potencjalną zmienność, planujemy zapisać łącznie 100 uczestników, po 25 osób w grupie.

Korelacje parametryczne i nieparametryczne zostaną wykorzystane do pomiaru związku między zmiennymi biochemicznymi a zmiennymi klinicznymi. Analizy wielowymiarowe zostaną przeprowadzone na podstawie wyników analizy jednoczynnikowej. Istotność statystyczna zostanie ustalona na poziomie 5% (p<0,05).