Spesifisten mikroRNA:iden rooli klusteripäänsärkyssä (5*1000)

Tausta Klusteripäänsärky (CH) on primaarinen päänsärky, joka sisältyy trigeminaaliseen autonomiseen kefalalgiaan (TAC:t) kansainvälisen päänsärkyhäiriön kalsion kolmannen painoksen mukaan. CH:lle on ominaista monitahoinen ja epätäydellisesti ymmärretty patofysiologia. Hypotalamuksen, kolmois- ja verisuonikompleksin ja kolmoishermon ja autonomisen refleksin uskotaan olevan merkittävä rooli.

Kasvavat kokeelliset todisteet ovat korostaneet spesifisten mikroRNA:iden (miRNA:iden) osallistumista krooniseen kipuun ja primaarisiin päänsäryihin, mukaan lukien migreeni. miRNA:t ovat pieniä endogeenisiä ei-koodaavia RNA:ita, jotka ovat pituudeltaan noin 22 nukleotidia. miRNA:t toimivat transkription jälkeisenä geeniekspression säätelijänä edistämällä lähetti-RNA:n (mRNA) hajoamista tai tukahduttamalla mRNA:n translaatiota. MiRNA:iden suorittama säätelyprosessi on monimutkainen ja artikuloitu, koska yksittäinen miRNA voi kohdistaa satoihin erilaisia ​​mRNA:ita, ja päinvastoin kutakin mRNA:ta voidaan säädellä useilla miRNA: illa. On arvioitu, että yli 60 % kaikista proteiineja koodaavista geeneistä on miRNA:iden säätelemiä, jotka näin ollen määräävät useiden soluprosessien pleiotrooppisen modulaation, joihin liittyy erilaistumista, kehitystä ja signalointia. miRNA:t osallistuvat kivun synnyttämiseen ja ylläpitoon, ja useat todisteet viittaavat siihen, että spesifisillä miRNA:illa voi olla rooli migreenissä.

Äskettäisessä tutkimuksessa havaitsimme geeniekspression lisääntymistä kahdessa miRNA:ssa, miR-382-5p:ssä ja miR-34a-5p:ssä, perifeerisen veren mononukleaarisoluissa (PBMC:t) potilailla, joilla on krooninen migreeni (CM). Nämä miRNA:t osallistuvat tulehduksen modulaatioon ja y-aminovoihapon (GABA) vapautumiseen verrattuna yksilöihin, joilla on episodinen migreeni ja terveet koehenkilöt (HC). Nämä havainnot korostavat korrelaatiota näiden miRNA:iden geeniekspression ja migreenifenotyypin välillä sekä sen vakavuuden välillä.

Viimeaikaiset tutkimukset viittaavat tiettyjen neuropeptidien aktiiviseen rooliin CH:ssa. Tanskalainen ryhmä on todellakin osoittanut, että CGRP:n, PACAP:n tai VIP:n suonensisäinen anto voi aiheuttaa akuutteja CH-kohtauksia vähintään 50 %:lla osallistujista, kun niitä on tutkittu taudin aktiivisessa vaiheessa.

Toistaiseksi ei ole tietoa miRNA:iden mahdollisesta osallistumisesta CH: hen. Tämän tutkimuksen tarkoituksena on tarjota yksityiskohtainen tutkimus miRNA:iden roolista klusteripäänsärkyssä, mikä auttaa ymmärtämään tämän ensisijaisen päänsärkyhäiriön patofysiologiaa. Lisäksi saadut tulokset voivat pohjustaa uuden sukupolven molekyylien kehittämistä, joita voitaisiin käyttää CH:n alalla, kuten miRNA-agonisteja (Agomir) ja antagonisteja (Antagomir).

Tavoitteet Nykyisen projektimme ensisijaisena tavoitteena on tutkia kivun modulaatioon liittyvien miRNA:iden (miR-382-5p, miR-34a-5p ja miR-155) perifeeristä ilmentymistä potilailla, joilla on episodinen CH aktiivisessa vaiheessa (eCH-). Act), episodinen CH remissiovaiheessa (eCH-rem), krooninen CH (cCH) ja terveet kontrollihenkilöt (HC).

menetelmät

Kaikki koehenkilöt suorittavat yhden arvioinnin ajan kuluessa, jonka aikana he käyvät läpi:

• selvitys tutkimusmenetelmistä ja tietoisen suostumuksen allekirjoittaminen
• seulontakäynti
• kliinisen ja demografisen tiedon kerääminen (perustuu päänsärkypäiväkirjan tarkistamiseen)
• paastolaskimoveren näytteenotto
• kyselylomakkeiden hallinnointi

Kaikki kohteet arvioidaan aamulla yöpaaston jälkeen. Potilailta, joilla on cCH- tai eCH-akt, näytteenotto odotetaan tapahtuvan kriittisten välisten vaiheiden aikana, mikä määritellään CH-kohtausten puuttuessa vähintään 3 tunnin ajan eCH-potilailla ja vähintään 8 tunnin ajan potilailla, joilla on cCH. Verinäytteenoton jälkeen potilaat jäävät keskukseen täyttämään kyselylomakkeita. Tämän ansiosta tutkija voi seurata potilaita vähintään 2 tunnin ajan, jotta voidaan sulkea pois mahdollisuus, että verinäyte otetaan välittömästi ennen CH-kohtausta.

Potilaille, joilla on eCH, "aktiivinen" ja "remissio"-vaihe määritellään seuraavasti:

• Aktiivinen vaihe: vaihe, jonka aikana CH-kohtauksia on esiintynyt vähintään 7 päivää.
• Remissiovaihe: jolle on ominaista klusteripäänsärkykohtausten puuttuminen vähintään 15 peräkkäisenä päivänä ilman lääkehoitoa.

miR-382-5p-, miR-34a-5p- ja miRNA-155-geenin ilmentyminen arvioidaan PBMC:issä reaaliaikaisella käänteistranskriptiolla (RT-PCR). Tämä arvio normalisoidaan U6:lla (pienen tuma-RNA:n tyyppi, jota käytetään taloudenhoitogeeninä) ja ilmaistaan ​​suhteellisena kvantifiointina (RQ). Plasman CGRP alfa-, PACAP- ja VIP-tasot mitataan käyttämällä validoituja kaupallisia ELISA-pakkauksia. Yksityiskohtainen kuvaus biokemiallisiin analyyseihin suunnitelluista menetelmistä löytyy täältä: https://doi.org/10.1186/s10194-020-01189-0.

Kliiniset kyselylomakkeet sisältävät: Migreen Disability Assessment (MIDAS), Headache Impact Test (HIT-6), Cluster Päänsärky Impact Questionnarie (CHIQ).

Otoskoon laskenta ja ennalta suunniteltu tilastollinen analyysi Laskennassa otettiin huomioon seuraavat parametrit: Vaikutuskoko: 0,5; alfa-virhe: 0,05; beetavirhe: 0,05 (teho: 95 %); Ryhmien lukumäärä: 4.

Otoskoon laskeminen suoritettiin käyttämällä ilmaista G*Power-alustaa (ver. 3.1.9.7) ANOVA-testille, jossa Bonferroni-korjaus sovellettiin neljään ryhmään. Pienin ehdotettu otoskoko on 76 henkilöä (19 henkilöä ryhmää kohden). Mahdollisen vaihtelun huomioon ottamiseksi aiomme ilmoittaa yhteensä 100 ainetta, joista 25 henkilöä kohden.

Parametrisia tai ei-parametrisia korrelaatioita käytetään mittaamaan biokemiallisten muuttujien ja kliinisten muuttujien välistä suhdetta. Monimuuttuja-analyysit suoritetaan yksimuuttuja-analyysin tulosten mukaisesti. Tilastollinen merkitsevyys asetetaan 5 %:n tasolle (p<0,05).