Rôle des microARN spécifiques dans les céphalées en grappe (5*1000)

Contexte La céphalée en grappe (CH) est une céphalée primaire incluse dans les céphalées trigéminales autonomes (TAC) selon l'International Calssification of Headache Disorder, troisième édition. Le CH se caractérise par une physiopathologie multiforme et incomplètement comprise. On pense que l’hypothalamus, le complexe trijumeau-vasculaire et le réflexe trijumeau-autonome jouent un rôle important.

De plus en plus de preuves expérimentales ont mis en évidence l’implication de microARN spécifiques (miARN) dans la douleur chronique et les maux de tête primaires, notamment la migraine. Les miARN sont de petits ARN endogènes non codants d’une longueur d’environ 22 nucléotides. Les miARN fonctionnent comme un régulateur post-transcriptionnel de l'expression des gènes en favorisant la dégradation de l'ARN messager (ARNm) ou en réprimant la traduction de l'ARNm. Le processus de régulation effectué par les miARN est complexe et articulé puisqu’un miARN individuel peut cibler des centaines d’ARNm différents et, inversement, chaque ARNm peut être régulé par plusieurs miARN. Il a été estimé que plus de 60 % de tous les gènes codant pour les protéines sont régulés par des miARN, qui déterminent par conséquent la modulation pléiotropique d'une grande variété de processus cellulaires impliquant la différenciation, le développement et la signalisation. Les miARN sont impliqués dans la génération et le maintien de la douleur et plusieurs preuves suggèrent que des miARN spécifiques pourraient jouer un rôle dans la migraine.

Dans une étude récente, nous avons observé une régulation positive de l'expression des gènes dans deux miARN, miR-382-5p et miR-34a-5p, dans les cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) chez des sujets souffrant de migraine chronique (CM). Ces miARN sont impliqués dans la modulation de l’inflammation et la libération d’acide γ-aminobutyrique (GABA) par rapport aux individus souffrant de migraine épisodique et aux sujets sains (HC). Ces résultats soulignent une corrélation entre l’expression génique de ces miARN et le phénotype de la migraine, ainsi que sa gravité.

Des études récentes suggèrent un rôle actif de certains neuropeptides dans le CH. Le groupe danois a en effet démontré que l'administration intraveineuse de CGRP, PACAP ou VIP peut induire des crises aiguës d'HC chez au moins 50 % des participants lorsqu'elle est étudiée en phase active de la maladie.

Pour l’instant, il n’existe aucune donnée concernant l’implication potentielle des miARN dans le CH. Cette étude vise à fournir une exploration détaillée du rôle des miARN dans les céphalées en grappe, contribuant ainsi à notre compréhension de la physiopathologie de ce trouble primaire des céphalées. De plus, les résultats obtenus pourraient ouvrir la voie au développement d’une nouvelle génération de molécules qui pourraient être utilisées dans le domaine du CH, comme les agonistes des miARN (Agomir) et les antagonistes (Antagomir).

Objectifs L'objectif principal de notre projet actuel est d'étudier l'expression périphérique des miARN impliqués dans la modulation de la douleur (miR-382-5p, miR-34a-5p et miR-155) chez des sujets atteints d'HC épisodique en phase active (eCH- act), CH épisodique en phase de rémission (eCH-rem), CH chronique (cCH) et sujets témoins sains (HC).

Méthodes

Tous les sujets effectueront une seule évaluation au fil du temps au cours de laquelle ils subiront :

• explication des procédures d'étude et signature du consentement éclairé
• visite de dépistage
• collecte de données cliniques et démographiques (basée sur la révision d'un journal des céphalées)
• prélèvement de sang veineux à jeun
• administration des questionnaires

Tous les sujets seront évalués le matin, après le jeûne nocturne. Pour les sujets atteints de cCH ou d'eCH-act, le prélèvement doit être réalisé dans la phase inter-critique, telle que définie par l'absence de crises de CH pendant au moins 3 heures chez les patients atteints d'eCH et pendant au moins 8 heures chez les patients atteints de cCH. Après un prélèvement sanguin, les patients resteront au Centre pour remplir une série de questionnaires. Cela permettra à l'investigateur de surveiller les patients pendant au moins 2 heures, pour exclure qu'un prélèvement sanguin soit effectué immédiatement avant une crise de CH.

Pour les patients atteints d'eCH, les phases « active » et « rémission » seront définies comme suit :

• Phase active : la phase pendant laquelle les attaques de CH sont présentes depuis au moins 7 jours.
• Phase de rémission : caractérisée par une absence de crises de céphalées en grappe pendant au moins 15 jours consécutifs sans traitement pharmacologique.

L'expression des gènes miR-382-5p, miR-34a-5p et miARN-155 sera évaluée dans les PBMC par transcription inverse en temps réel (RT-PCR). Cette évaluation sera normalisée avec U6 (un type de petit ARN nucléaire utilisé comme gène domestique) et exprimée en quantification relative (RQ). Les niveaux plasmatiques de CGRP alpha, PACAP et VIP seront mesurés à l'aide de kits ELISA commerciaux validés. Une description détaillée des méthodes prévues pour les analyses biochimiques peut être trouvée ici : https://doi.org/10.1186/s10194-020-01189-0.

L'ensemble de questionnaires cliniques comprendra : évaluation du handicap migraineux (MIDAS), test d'impact des maux de tête (HIT-6), questionnaire d'impact des céphalées en grappe (CHIQ).

Calcul de la taille de l'échantillon et analyse statistique pré-planifiée Les paramètres suivants ont été pris en compte pour le calcul : taille de l'effet : 0,5 ; erreur alpha : 0,05 ; erreur bêta : 0,05 (puissance : 95 %) ; nombre de groupes : 4.

Le calcul de la taille de l'échantillon a été effectué à l'aide de la plateforme gratuite G*Power (ver. 3.1.9.7) pour un test ANOVA avec correction de Bonferroni appliqué aux 4 groupes. La taille minimale de l'échantillon suggérée est de 76 sujets (19 sujets par groupe). Pour tenir compte de la variabilité potentielle, nous prévoyons d'inscrire un total de 100 sujets, avec 25 sujets par groupe.

Des corrélations paramétriques ou non paramétriques seront utilisées pour mesurer la relation entre les variables biochimiques et les variables cliniques. Des analyses multivariées seront effectuées en fonction des résultats de l'analyse univariée. La signification statistique sera fixée au niveau de 5 % (p <0,05).