Papel de los microARN específicos en la cefalea en racimos (5*1000)

Antecedentes La cefalea en racimos (CH) es una cefalea primaria incluida en las cefaleas autonómicas del trigémino (TAC) según la Clasificación Internacional de las Cefaleas, Tercera Edición. La CH se caracteriza por una fisiopatología multifacética y poco comprendida. Se cree que el hipotálamo, el complejo vascular trigémino y el reflejo trigémino-autonómico desempeñan un papel importante.

Cada vez más pruebas experimentales han puesto de relieve la implicación de microARN específicos (miARN) en el dolor crónico y las cefaleas primarias, incluida la migraña. Los miARN son pequeños ARN endógenos no codificantes que tienen alrededor de 22 nucleótidos de longitud. Los miARN operan como regulador postranscripcional de la expresión génica al promover la degradación del ARN mensajero (ARNm) o reprimir la traducción del ARNm. El proceso de regulación realizado por los miARN es complejo y articulado, ya que un miARN individual puede apuntar a cientos de ARNm diferentes y, a la inversa, cada ARNm puede estar regulado por múltiples miARN. Se ha estimado que más del 60% de todos los genes codificadores de proteínas están regulados por miARN que, en consecuencia, determinan la modulación pleiotrópica de una amplia variedad de procesos celulares que implican diferenciación, desarrollo y señalización. Los miARN participan en la generación y el mantenimiento del dolor y varias pruebas sugieren que miARN específicos podrían desempeñar un papel en la migraña.

En un estudio reciente, observamos una regulación positiva de la expresión génica en dos miARN, miR-382-5p y miR-34a-5p, en células mononucleares de sangre periférica (PBMC) en sujetos con migraña crónica (CM). Estos miARN participan en la modulación de la inflamación y la liberación de ácido γ-aminobutírico (GABA) en comparación con individuos con migraña episódica y sujetos sanos (HC). Estos hallazgos subrayan una correlación entre la expresión genética de estos miARN y el fenotipo de la migraña, así como su gravedad.

Estudios recientes sugieren un papel activo de ciertos neuropéptidos en el CH. De hecho, el grupo danés ha demostrado que la administración intravenosa de CGRP, PACAP o VIP puede inducir ataques agudos de CH en al menos el 50% de los participantes cuando se estudian en la fase activa de la enfermedad.

Hasta el momento, no hay datos sobre la posible participación de los miARN en el CH. Este estudio tiene como objetivo proporcionar una exploración detallada del papel de los miARN en la cefalea en racimos, contribuyendo a nuestra comprensión de la fisiopatología de este trastorno de cefalea primaria. Además, los resultados obtenidos pueden allanar el camino para el desarrollo de una nueva generación de moléculas que podrían usarse en el campo del CH, como agonistas de miARN (Agomir) y antagonistas (Antagomir).

Objetivos El objetivo principal de nuestro proyecto actual es investigar la expresión periférica de miARN implicados en la modulación del dolor (miR-382-5p, miR-34a-5p y miR-155) en sujetos con CH episódico en la fase activa (eCH- act), HC episódica en fase de remisión (eCH-rem), HC crónica (cCH) y sujetos control sanos (HC).

Métodos

Todos los sujetos realizarán una única evaluación en el tiempo durante la cual se someterán a:

• explicación de los procedimientos del estudio y firma del consentimiento informado
• visita de selección
• recopilación de datos clínicos y demográficos (basada en la revisión de un diario de dolores de cabeza)
• muestreo de sangre venosa en ayunas
• administración de cuestionarios

Todos los sujetos serán evaluados por la mañana, después del ayuno nocturno. Para los sujetos afectados por cCH o eCH-act, se espera que el muestreo se lleve a cabo en la fase intercrítica, definida por la ausencia de ataques de CH durante al menos 3 horas en pacientes con eCH y durante al menos 8 horas en pacientes con cCH. Después de la toma de muestras de sangre, los pacientes permanecerán en el Centro para completar una serie de cuestionarios. Esto permitirá al investigador monitorear a los pacientes durante al menos 2 horas, para excluir que se realice una muestra de sangre inmediatamente antes de un ataque de CH.

Para pacientes con eCH, las fases "activa" y "remisión" se definirán de la siguiente manera:

• Fase activa: fase durante la cual los ataques de CH han estado presentes durante al menos 7 días.
• Fase de remisión: caracterizada por la ausencia de ataques de cefalea en racimos durante al menos 15 días consecutivos sin tratamiento farmacológico.

La expresión de los genes miR-382-5p, miR-34a-5p y miRNA-155 se evaluará en PBMC mediante transcripción inversa en tiempo real (RT-PCR). Esta evaluación se normalizará con U6 (un tipo de ARN nuclear pequeño utilizado como gen de mantenimiento) y se expresará como Cuantificación Relativa (RQ). Los niveles plasmáticos de CGRP alfa, PACAP y VIP se medirán utilizando kits ELISA comerciales validados. Puede encontrar una descripción detallada de los métodos previstos para los análisis bioquímicos aquí: https://doi.org/10.1186/s10194-020-01189-0.

El conjunto de cuestionarios clínicos incluirá: Evaluación de discapacidad por migraña (MIDAS), Prueba de impacto del dolor de cabeza (HIT-6), Cuestionario de impacto del dolor de cabeza en racimos (CHIQ).

Cálculo del tamaño de la muestra y análisis estadístico planificado previamente. Para el cálculo se consideraron los siguientes parámetros: Tamaño del efecto: 0,5; error alfa: 0,05; error beta: 0,05 (potencia: 95%); número de grupos: 4.

El cálculo del tamaño de la muestra se realizó utilizando la plataforma gratuita G*Power (ver. 3.1.9.7) para una prueba ANOVA con corrección de Bonferroni aplicada a los 4 grupos. El tamaño de muestra mínimo sugerido es de 76 sujetos (19 sujetos por grupo). Para tener en cuenta la variabilidad potencial, planeamos inscribir un total de 100 sujetos, con 25 sujetos por grupo.

Se utilizarán correlaciones paramétricas o no paramétricas para medir la relación entre variables bioquímicas y variables clínicas. Los análisis multivariados se realizarán según los resultados del análisis univariado. La significancia estadística se establecerá en el nivel del 5% (p<0,05).