Роль специфических микроРНК в кластерной головной боли (5*1000)

Кластерная головная боль (КГ) — первичная головная боль, включенная в группу вегетативных цефалгий тройничного нерва (ТАЦ) согласно Международной классификации расстройств головной боли, третье издание. СН характеризуется многогранной и до конца не изученной патофизиологией. Считается, что значительную роль играют гипоталамус, тройнично-сосудистый комплекс и тройнично-вегетативный рефлекс.

Все больше экспериментальных данных подчеркивает участие специфических микроРНК (миРНК) в хронической боли и первичных головных болях, включая мигрень. МикроРНК представляют собой небольшие эндогенные некодирующие РНК длиной около 22 нуклеотидов. микроРНК действуют как посттранскрипционный регулятор экспрессии генов, способствуя деградации информационной РНК (мРНК) или подавляя трансляцию мРНК. Процесс регуляции, осуществляемый микроРНК, сложен и четко сформулирован, поскольку отдельная микроРНК может быть нацелена на сотни различных мРНК, и наоборот, каждая мРНК может регулироваться несколькими микроРНК. Было подсчитано, что более 60% всех генов, кодирующих белки, регулируются микроРНК, которые, следовательно, определяют плейотропную модуляцию широкого спектра клеточных процессов, включающих дифференцировку, развитие и передачу сигналов. микроРНК участвуют в генерации и поддержании боли, и некоторые данные свидетельствуют о том, что специфические микроРНК могут играть роль в мигрени.

В недавнем исследовании мы наблюдали усиление экспрессии генов в двух микроРНК, миР-382-5p и миР-34a-5p, в мононуклеарных клетках периферической крови (РВМС) у субъектов с хронической мигренью (ХМ). Эти микроРНК участвуют в модуляции воспаления и высвобождении γ-аминомасляной кислоты (ГАМК) по сравнению с людьми с эпизодической мигренью и здоровыми людьми (HC). Эти результаты подчеркивают корреляцию между экспрессией генов этих микроРНК и фенотипом мигрени, а также ее тяжестью.

Недавние исследования предполагают активную роль некоторых нейропептидов при CH. Датская группа действительно продемонстрировала, что внутривенное введение CGRP, PACAP или VIP может вызвать острые приступы CH по крайней мере у 50% участников при исследовании в активной фазе заболевания.

На данный момент нет данных о потенциальном участии микроРНК в CH. Целью этого исследования является детальное изучение роли микроРНК в кластерной головной боли, что будет способствовать нашему пониманию патофизиологии этого первичного расстройства головной боли. Кроме того, полученные результаты могут проложить путь к разработке нового поколения молекул, которые можно было бы использовать в области ЦГ, таких как агонисты микроРНК (Агомир) и антагонисты (Антагомир).

Цели. Основной целью нашего текущего проекта является исследование периферической экспрессии микроРНК, участвующих в модуляции боли (миР-382-5p, миР-34a-5p и миР-155) у субъектов с эпизодической ХГ в активной фазе (eCH- акт), эпизодический ХГ в фазе ремиссии (эХ-рем), хронический ХГ (кХ) и здоровые субъекты контрольной группы (ГК).

Методы

Все субъекты проведут единую оценку в течение определенного периода времени, в течение которой они пройдут:

• объяснение процедур исследования и подписание информированного согласия
• скрининговый визит
• сбор клинико-демографических данных (на основе пересмотра дневника головных болей)
• забор венозной крови натощак
• администрирование анкет

Все субъекты будут оцениваться утром, после ночного голодания. Ожидается, что у субъектов, пораженных cCH или eCH-актом, отбор проб будет проводиться в межкритической фазе, что определяется отсутствием приступов CH в течение как минимум 3 часов у пациентов с eCH и в течение как минимум 8 часов у пациентов с сСН. После забора крови пациенты остаются в Центре для заполнения набора анкет. Это позволит исследователю наблюдать за больными не менее 2 часов, исключить проведение забора крови непосредственно перед приступом ХГ.

Для пациентов с ЭХГ фазы «активная» и «ремиссия» будут определяться следующим образом:

• Активная фаза: фаза, во время которой приступы CH наблюдаются в течение как минимум 7 дней.
• Фаза ремиссии: характеризуется отсутствием приступов кластерной головной боли в течение как минимум 15 дней подряд без фармакологической терапии.

Экспрессию генов миР-382-5p, миР-34a-5p и миРНК-155 будут оценивать в РВМС с помощью обратной транскрипции в реальном времени (ОТ-ПЦР). Эта оценка будет нормализована с помощью U6 (тип малой ядерной РНК, используемой в качестве гена домашнего хозяйства) и выражена как относительная количественная оценка (RQ). Уровни CGRP альфа, PACAP и VIP в плазме будут измеряться с использованием проверенных коммерческих наборов ELISA. Подробное описание методов запланированных биохимических анализов можно найти здесь: https://doi.org/10.1186/s10194-020-01189-0.

Набор клинических опросников будет включать в себя: оценку инвалидности при мигрени (MIDAS), тест на воздействие головной боли (HIT-6), опросник на воздействие кластерной головной боли (CHIQ).

Расчет размера выборки и заранее запланированный статистический анализ. Для расчета учитывались следующие параметры: Размер эффекта: 0,5; ошибка альфа: 0,05; бета-погрешность: 0,05 (степень: 95%); количество групп: 4.

Расчет размера выборки проводился с использованием бесплатной платформы G*Power (версия. 3.1.9.7) для теста ANOVA с поправкой Бонферрони, примененной к 4 группам. Минимальный рекомендуемый размер выборки — 76 субъектов (19 субъектов на группу). Чтобы учесть потенциальную вариативность, мы планируем набрать в общей сложности 100 субъектов, по 25 субъектов в каждой группе.

Параметрические или непараметрические корреляции будут использоваться для измерения взаимосвязи между биохимическими переменными и клиническими переменными. Многомерный анализ будет проводиться по результатам одномерного анализа. Статистическая значимость будет установлена ​​на уровне 5% (р<0,05).