含马基莓的软糖 (MaquiGUM)

干预的纳入与排除标准 将招募十名久坐志愿者。 纳入标准：超重或肥胖的体重指数（BMI至少25.0 kg/m²）；无非传染性慢性疾病；以及久坐（每周少于3次、每次少于30分钟的体力活动）。 所有参与者将被要求在整个研究期间保持其体力活动、食物摄入和药物使用不变。 排除标准：使用降糖药物、含抗氧化剂的补充剂，以及高摄入多酚（每天超过2克）；对马基莓或GCs中的任何成分食物过敏；怀孕或哺乳。 本研究已获得瓦尔帕莱索大学药学院伦理委员会的批准（CBI 014/2022）。

参与者特征 将测定体重和身高以计算BMI，以及腰围和三头肌皮褶厚度。 研究前将收集食物频率问卷（FFQ），以估计纤维和总膳食抗氧化剂摄入量，主要包括多酚、胡萝卜素以及维生素E和C的消耗。 所有干预均由瓦尔帕莱索大学药学院的有资质人员执行。

干预 参与者将完成一个三条件、受试者内急性干预，每次访问之间有一周的洗脱期：（i）基线/对照：150克白面包（75克可利用碳水化合物）；（ii）白面包+GM：150克白面包加24克GM（3粒软糖）；以及（iii）白面包+GMM：150克白面包加24克GMM（3粒软糖）。 每位参与者将作为自己的对照。 在每个研究日（对照、GM、GMM），将在摄入测试餐前抽取空腹基线样本（时间0）。 访问将在不同日期进行，间隔一周，在标准化测试前条件下（过夜空腹、固定上午时间表，以及预先规定的饮食/活动限制）。

对照条件与期望偏倚的缓解 我们的对照条件将使用仅含白面包的日作为血糖和抗氧化反应的“无马基”对照。 干预将在相同面包负荷中添加24克软糖（3粒）。 研究者不会包含单独的“安慰剂软糖”，因为本研究是一个围绕客观白面包对照设计的试点研究，并且生产感官上无法区分的无多酚软糖具有挑战性（马基色素/风味）；即使在我们感官测试中，GM与GMM在气味和味道上也有差异，这表明使用安慰剂基质进行盲法可能不完美。 为限制期望效应并缓解可能的偏倚，研究者将：（i）使用客观终点（血糖/胰岛素/GLP-1；TRAP、SOD、CAT）；（ii）执行标准化测试前条件（12小时空腹；固定时间上午测试；饮食/活动限制并有记录依从性）；以及（iii）在干预之间实施一周洗脱期。 所有比较将相对于白面包对照在个体内进行。

血液样本程序 血液样本将在每次干预开始时的12小时过夜空腹后以及2小时内从参与者收集。 样本将收集在肝素钠管中（最终浓度0.1%）。 对于胰岛素和GLP-1测定，血液将在4°C下以2000×g离心10分钟，上清液将在-80°C冷冻。 对于抗氧化状态测量，血浆将通过4°C下以1500×g离心1分钟从红细胞中分离。 血浆将立即在-80°C冷冻用于后续总反应性抗氧化能力（TRAP）分析，而红细胞将用牛血清白蛋白（BSA）洗涤，在1500×g下离心3次，每次15分钟，每次丢弃上清液。 在-80°C储存前，红细胞将用低渗溶液稀释用于过氧化氢酶（CAT，比例1:10）和超氧化物歧化酶（SOD，比例1:28）以进行进一步分析。

抗氧化状态生物标志物 总反应性抗氧化能力（TRAP） 简言之，10 µL上清液将与150 µM 2,20-偶氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)和10 mM 2,20-偶氮二(2-脒基丙烷)的1:1混合物混合，先前在45°C下孵育30分钟。 动力学将在加入样品后的10、30和50秒在734 nm处测定。 抗氧化能力将通过比较Trolox®来测量。

总蛋白测量 总蛋白定量将使用红细胞进行以标准化SOD和CAT酶活性。 为此，将使用基于白蛋白标准品（Thermofisher）制作的白蛋白曲线的Pierce BCA蛋白测定试剂盒（Thermofisher）。 所有方案将根据制造商说明使用。

超氧化物歧化酶（SOD） 该测定基于在黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶系统中超氧化物自由基对细胞色素c的还原。 简言之，5 µL均质化样品将与溶解在磷酸盐缓冲液中的0.5 mM黄嘌呤（Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA）和20 µM细胞色素C（Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA）混合。 此溶液将与黄嘌呤氧化酶（Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA）和0.1 mM EDTA（1:40）混合。 酶活性将在Rayleigh UV-2601分光光度计中于550 nm处检测。 每个样品将进行三次重复分析。

过氧化氢酶（CAT） 过氧化氢酶活性将通过测量反应混合物的吸光度损失在240 nm处测定，反应混合物由100 µL 0.3 M H2O2（Merck, Darmstadt, Germany）在2.9 mL磷酸盐缓冲液（50 mM Na2HPO4和50 mM NaH2PO4，pH 7.8）和50 µL样品组成。 测量将在Rayleigh UV-2601分光光度计中进行90秒。 每个样品将进行三次重复分析。

葡萄糖、胰岛素和GLP-1 将在食用白面包前（时间0）和食用后（加或不加软糖）（在15、30、60、90和120分钟）使用血糖试纸条（One Touch II）从参与者手指获取毛细血管血液样本。 将在时间点0和120分钟获取血液样本用于胰岛素浓度测定，将根据制造商的建议使用化学发光免疫测定法测量。 人血浆GLP-1水平将在0和120分钟使用GLP-1 ELISA试剂盒（BMS2194; ThermoFisher Cientific）按照制造商说明测量。 血浆葡萄糖、胰岛素和GLP-1的增量曲线下面积（AUC）每120分钟将通过梯形法则计算，空腹值被视为基线。

统计分析 样本量和功效：本研究被构想为一个早期阶段、急性、受试者内干预，其中每位参与者在三种条件（基线、GMM、GM）下作为自己的对照，并有一周洗脱期。 鉴于受试者内设计的效率，研究者计划了一个适度的样本量（n = 10完成者）。 敏感性分析表明，对于双侧配对比较，α = 0.05和80%功效，n = 10可以检测到大约Cohen's dz ≈ 0.9-1.0的大标准化受试者内效应。 将使用Shapiro-Wilk检验确认数据的正态性。 将在每个干预条件内（分别分析GM和GMM）使用Spearman等级相关性，以检查餐后血糖、胰岛素和GLP-1暴露（血糖AUC、胰岛素AUC和GLP-1 AUC）与抗氧化相关变量之间的关联：SOD活性、血浆TRAP（TEAC）、过氧化氢酶活性，以及来自FFQ的膳食摄入量（维生素C、维生素E、胡萝卜素、总多酚和纤维）。 研究者将报告Spearman系数和双侧p值（n = 10）。 鉴于本研究的试点、假设生成性质，分析将是探索性的，不暗示因果关系；将不应用多重性调整。 多重比较将使用Kruskal-Wallis检验进行，假设p值小于0.05为显著。 所有分析将使用GraphPad Prism软件版本9.0进行。