Gummy Candies With Maqui Berry (MaquiGUM)

Inklusions- og eksklusionskriterier for interventionen Ti stillesiddende frivillige vil blive rekrutteret. Inklusionskriterier: overvægtig eller fedme (kropsmasseindeks (KMI) mindst 25,0 kg/m²); fravær af ikke-smittende kronisk sygdom; og stillesiddende (mindre end 30 minutters fysisk aktivitet 3 gange om ugen). Alle deltagere vil blive bedt om at opretholde deres fysiske aktivitet, kostindtag og medicinering gennem hele studiet. Eksklusionskriterier: brug af blodsukkersænkende lægemidler, kosttilskud indeholdende antioxidanter, og højt indtag af polyfenoler (mere end 2 g pr. dag); fødevareallergi mod Maqui-bær eller enhver komponent fra GC'erne; graviditet eller amning. Studiet blev godkendt af Etisk Komité ved Farmaceutisk Fakultet, Universidad de Valparaíso (CBI 014/2022).

Deltagerkarakteristika Vægt og højde vil blive bestemt for at beregne KMI, samt taljeomkreds og tricepsfold. Kostfrekvensspørgeskemaer (FFQ) vil blive indsamlet før studiet for at estimere fiber- og totalt diætisk antioxidativt indtag, primært polyfenoler, carotener samt vitamin E- og C-forbrug. Al intervention blev udført på Farmaceutisk Fakultet, Universidad de Valparaíso, af kvalificeret personale.

Intervention Deltagerne vil gennemføre en tre-betinget, akut indenfor-person intervention med én ugers udvaskning mellem besøg: (i) baseline/kontrol: 150 g hvidt brød (75 g tilgængelige kulhydrater); (ii) hvidt brød + GM: 150 g hvidt brød plus 24 g GM (3 gummier); og (iii) hvidt brød + GMM: 150 g hvidt brød plus 24 g GMM (3 gummier). Hver deltager vil fungere som sin egen kontrol. På hver studiedag (kontrol, GM, GMM) vil en fastende baselineprøve (tid 0) blive taget inden indtagelse af testmåltidet. Besøg vil finde sted på separate dage, en uge fra hinanden, under standardiserede fortestbetingelser (nattefastende, fast morgenskema og forudbestemte kost/aktivitetsrestriktioner).

Kontrolbetingelse og begrænsning af forventningsbias Vores kontrolbetingelse vil bruge kun-hvidt-brød-dagen som ingen-Maqui-kontrol for glykæmiske og antioxidative responser. Interventioner vil tilføje 24 g gummier (3 enheder) til den samme brødbelastning. Forskerne vil ikke inkludere en separat "placebo-gummi", fordi studiet er et pilotstudie designet omkring en objektiv hvidt-brød-kontrol, og produktion af en sensorisk uadskillelig polyfenolfri gummi er udfordrende (Maqui-pigmenter/smag); selv GM vs. GMM adskilte sig i lugt og smag i vores sensoriske test, hvilket antyder at blinding med en placebomatrix sandsynligvis ville være ufuldkommen. For at begrænse forventningseffekter og mindske mulig bias, vil forskerne: (i) bruge objektive slutpunkter (glykæmi/insulin/GLP-1; TRAP, SOD, CAT); (ii) håndhæve standardiserede fortestbetingelser (12 timers fasten; morgenprøver på faste tidspunkter; kost/aktivitetsrestriktioner med dokumenteret overholdelse); og (iii) implementere én ugers udvaskning mellem interventioner. Alle sammenligninger vil være indenfor-person i forhold til hvidt-brød-kontrollen.

Blodprøveprocedurer Blodprøver vil blive indsamlet fra deltagerne efter 12 timers nattefasten ved starten af hver intervention og i en 2-timers periode. Prøver vil blive indsamlet i natriumheparinrør (endelig koncentration 0,1%). For insulin- og GLP-1-bestemmelser vil blod blive centrifugeret ved 2000× g i 10 minutter ved 4 °C og overstanden vil blive frosset ned ved -80 °C. For antioxidativ status-målinger vil plasma blive adskilt fra de røde blodceller via centrifugation ved 1500× g i 1 minut ved 4 °C. Plasma vil straks blive frosset ned ved -80 °C til efterfølgende total reaktiv antioxidativ kraft (TRAP)-analyse, mens røde celler vil blive vasket med bovint serumalbumin (BSA), centrifugeret 3 gange ved 1500× g i 15 minutter, hvor overstanden kasseres hver gang. Før opbevaring ved -80°C vil de røde celler blive fortyndet med en hypoton opløsning til katalase (CAT, forhold 1:10) og superoxiddismutase (SOD, forhold 1:28) til yderligere analyse.

Antioxidativ status-biomarkører Total Reaktiv Antioxidativ Kraft (TRAP) Kort fortalt, 10 µL overstand vil blive blandet med en 1:1 blanding af 150 µM 2,20-azino-bis(3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonsyre) og 10 mM 2,20-azobis(2-amidinopropan), forudinkuberet ved 45 °C i 30 minutter. Kinetik vil blive bestemt ved 734 nm i 10, 30 og 50 sekunder efter tilsætning af prøven. Den antioxidative kapacitet vil blive målt i forhold til Trolox®.

Total proteinmåling Total proteinkvantificering vil blive udført ved brug af erytrocytter til normalisering af SOD- og CAT-enzymaktivitet. Til dette vil Pierce BCA Protein Assay Kit (Thermofisher) blive brugt, baseret på en albumin-kurve lavet fra en Albumin Standard (Thermofisher). Alle protokoller vil blive brugt i henhold til producenten.

Superoxiddismutase (SOD) Denne assay er baseret på reduktionen af cytochrom c af superoxidradikalet i et xanthin/xanthinoxidase-system. Kort fortalt, 5 µL homogeniserede prøver vil blive blandet med 0,5 mM xanthin (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) og 20 µM cytochrom C (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) opløst i en fosfatbuffer. Denne opløsning vil blive blandet med xanthinoxidase (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) og 0,1 mM EDTA (1:40). Enzymatisk aktivitet vil blive detekteret ved 550 nm i en Rayleigh UV-2601 spektrofotometer. Hver prøve vil blive analyseret i triplikat.

Katalase (CAT) Katalaseaktivitet vil blive bestemt ved at måle tab af absorbans ved 240 nm af en reaktionsblanding bestående af 100 µL 0,3 M H2O2 (Merck, Darmstadt, Tyskland) i 2,9 mL fosfatbuffer (50 mM Na2HPO4 og 50 mM NaH2PO4, pH 7,8) og 50 µL prøver. Målinger vil blive udført i 90 sekunder i en Rayleigh UV-2601 spektrofotometer. Hver prøve vil blive analyseret i triplikat.

Glukose, Insulin og GLP-1 Kapillære blodprøver vil blive taget fra deltagerens finger ved brug af glukoseteststrips (One Touch II) inden indtagelse af hvidt brød (tid 0) og efter indtagelse med eller uden gummier (ved 15, 30, 60, 90 og 120 minutter). Blodprøver vil blive taget til insulin-koncentrationer ved tidspunkterne 0 og 120 minutter, som vil blive målt ved brug af en kemiluminescensimmunoassay i henhold til producentens anbefalinger. Humane plasma-niveauer af GLP-1 vil blive målt ved 0 og 120 minutter ved brug af GLP-1 ELISA Kit (BMS2194; ThermoFisher Scientific) efter producentens instruktioner. Det inkrementelle areal under kurven (AUC) hver 120 minutter for plasmaglukose, insulin og GLP-1 vil blive beregnet ved brug af trapezreglen med fastende værdier betragtet som baseline.

Statistisk analyse Prøvestørrelse og styrke: Dette studie er koncipieret som en tidligfase, akut, indenfor-person intervention, hvor hver deltager fungerede som sin egen kontrol over tre betingelser (baseline, GMM, GM) med én ugers udvaskning. Givet effektiviteten af indenfor-person-designs planlægger forskerne en beskeden prøvestørrelse (n = 10 fuldførere). En sensitivitetsanalyse indikerer, at for tosidede parrede sammenligninger med α = 0,05 og 80% styrke, kan n = 10 detektere en stor standardiseret indenfor-person effekt på cirka Cohen's dz ≈ 0,9-1,0. Shapiro-Wilk test vil blive brugt til at bekræfte normalitet af data. Spearmans rangkorrelationer vil blive brugt inden for hver interventionsbetingelse (analysere GM og GMM separat) til at undersøge sammenhænge mellem postprandiale glykæmiske, insulinæmiske og GLP-1-eksponeringer (glykæmisk AUC, insulin AUC og GLP-1 AUC), og antioxidant-relaterede variable: SOD-aktivitet, plasma TRAP (TEAC), katalaseaktivitet, og diætiske indtag fra FFQ (vitamin C, vitamin E, carotener, totale polyfenoler og fiber). Forskerne vil rapportere Spearman-koefficient og tosidede p-værdier (n = 10). Givet pilotstudiet, hypotesegenererende karakter af studiet, vil analyser være eksplorative og indebærer ikke kausalitet; multiplikationsjusteringer vil ikke blive anvendt. Flere sammenligninger vil blive foretaget ved brug af Kruskal-Wallis test, idet p-værdi mindre end 0,05 antages som signifikant. Alle analyser vil blive udført med GraphPad Prism software version 9.0.