Rebuçados de Goma Com Bagas de Maqui (MaquiGUM)

Critérios de inclusão e exclusão para a intervenção Serão recrutados dez voluntários sedentários. Critérios de inclusão: índice de massa corporal (IMC) de sobrepeso ou obesidade (IMC de pelo menos 25,0 kg/m²); ausência de doença crónica não transmissível; e sedentarismo (menos de 30 minutos de atividade física, 3 vezes por semana). A todos os participantes será pedido que mantenham a sua atividade física, ingestão alimentar e medicação durante todo o estudo. Critérios de exclusão: uso de fármacos hipoglicemiantes, suplementos contendo antioxidantes e alto consumo de polifenóis (mais de 2 g por dia); alergia alimentar à baga de Maqui ou a qualquer componente dos GCs; gravidez ou lactação. O estudo foi aprovado pelo Comité de Ética da Faculdade de Farmácia, Universidad de Valparaíso (CBI 014/2022).

Características dos participantes O peso e a altura serão determinados para calcular o IMC, bem como a circunferência da cintura e a prega tricipital. Questionários de Frequência Alimentar (QFA) serão recuperados antes do estudo para estimar a ingestão de fibra e de antioxidantes alimentares totais, principalmente polifenóis, carotenos e consumo de vitaminas E e C. Toda a intervenção foi realizada na Faculdade de Farmácia, Universidad de Valparaíso, por pessoal capacitado.

Intervenção Os participantes completarão uma intervenção aguda de três condições, intra-sujeito, com períodos de washout de uma semana entre as visitas: (i) linha de base/controlo: 150 g de pão branco (75 g de hidratos de carbono disponíveis); (ii) pão branco + GM: 150 g de pão branco mais 24 g de GM (3 gomas); e (iii) pão branco + GMM: 150 g de pão branco mais 24 g de GMM (3 gomas). Cada participante servirá como seu próprio controlo. Em cada dia de estudo (controlo, GM, GMM), será colhida uma amostra em jejum (tempo 0) antes da ingestão da refeição-teste. As visitas ocorrerão em dias separados, com uma semana de intervalo, sob condições pré-teste padronizadas (jejum noturno, horário matinal fixo e restrições dietéticas/de atividade pré-especificadas).

Condição de controlo e mitigação do viés de expectativa A nossa condição de controlo utilizará o dia apenas com pão branco como controlo sem Maqui para as respostas glicémicas e antioxidantes. As intervenções adicionarão 24 g de gomas (3 unidades) à mesma carga de pão. Os investigadores não incluirão uma "goma placebo" separada porque o estudo é um piloto concebido em torno de um controlo objetivo de pão branco, e produzir uma goma sem polifenóis sensorialmente indistinguível é desafiante (pigmentos/sabor da Maqui); mesmo GM vs. GMM diferiram no cheiro e sabor nos nossos testes sensoriais, sugerindo que o cegamento com uma matriz placebo provavelmente seria imperfeito. Para limitar os efeitos de expectativa e mitigar possíveis vieses, os investigadores: (i) utilizarão endpoints objetivos (glicemia/insulina/GLP-1; TRAP, SOD, CAT); (ii) imporão condições pré-teste padronizadas (12 h de jejum; testes matinais em horas fixas; restrições dietéticas/de atividade com adesão documentada); e (iii) implementarão períodos de washout de uma semana entre as intervenções. Todas as comparações serão intra-pessoais relativamente ao controlo de pão branco.

Procedimentos de colheita de sangue As amostras de sangue serão colhidas dos participantes após um jejum noturno de 12 h no início de cada intervenção e durante um período de 2 h. As amostras serão colhidas em tubos de heparina sódica (concentração final de 0,1%). Para as determinações de insulina e GLP-1, o sangue será centrifugado a 2000× g durante 10 minutos a 4 °C e o sobrenadante será congelado a -80 °C. Para as medições do estado antioxidante, o plasma será separado das células vermelhas por centrifugação a 1500× g durante 1 min a 4 °C. O plasma será imediatamente congelado a -80 °C para análise subsequente do poder antioxidante total reativo (TRAP), enquanto as células vermelhas serão lavadas com albumina sérica bovina (BSA), centrifugadas 3 vezes a 1500× g durante 15 minutos, descartando o sobrenadante de cada vez. Antes do armazenamento a -80°C, as células vermelhas serão diluídas com uma solução hipotónica para catalase (CAT, razão 1:10) e superóxido dismutase (SOD, razão 1:28) para análise posterior.

Biomarcadores do estado antioxidante Poder Antioxidante Total Reativo (TRAP) Brevemente, 10 µL de sobrenadante serão misturados com uma mistura 1:1 de 150 µM de ácido 2,20-azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico) e 10 mM de 2,20-azobis(2-amidinopropano), previamente incubada a 45 °C durante 30 minutos. A cinética será determinada a 734 nm aos 10, 30 e 50 segundos após a adição da amostra. A capacidade antioxidante será medida comparando com Trolox®.

Medição de proteína total A quantificação de proteína total será realizada usando eritrócitos para normalizar a atividade enzimática da SOD e CAT. Para isso, será utilizado o Kit de Ensaio de Proteína Pierce BCA (Thermofisher), baseado numa curva de albumina feita a partir de um Padrão de Albumina (Thermofisher). Todos os protocolos serão utilizados de acordo com o fabricante.

Superóxido dismutase (SOD) Este ensaio baseia-se na redução do citocromo c pelo radical superóxido num sistema xantina/xantina oxidase. Brevemente, 5 µL de amostras homogeneizadas serão misturadas com 0,5 mM de xantina (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) e 20 µM de citocromo C (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) dissolvidos num tampão fosfato. Esta solução será misturada com xantina oxidase (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) e 0,1 mM de EDTA (1:40). A atividade enzimática será detetada a 550 nm num espectrofotómetro Rayleigh UV-2601. Cada amostra será analisada em triplicado.

Catalase (CAT) A atividade da catalase será determinada medindo a perda de absorbância a 240 nm de uma mistura de reação consistindo em 100 µL de H2O2 0,3 M (Merck, Darmstadt, Alemanha) em 2,9 mL de tampão fosfato (50 mM de Na2HPO4 e 50 mM de NaH2PO4, pH 7,8) e 50 µL de amostras. As medições serão realizadas durante 90 segundos num espectrofotómetro Rayleigh UV-2601. Cada amostra será analisada em triplicado.

Glucose, Insulina e GLP-1 Amostras capilares de sangue serão obtidas do dedo do participante usando tiras de teste de glucose (One Touch II) antes de consumir o pão branco (tempo 0) e após o consumo com ou sem as gomas (aos 15, 30, 60, 90 e 120 minutos). Amostras de sangue serão obtidas para concentrações de insulina nos pontos de tempo 0 e 120 minutos, que serão medidas usando um imunoensaio de quimioluminescência de acordo com as recomendações do fabricante. Os níveis plasmáticos humanos de GLP-1 serão medidos aos 0 e 120 minutos usando o Kit ELISA de GLP-1 (BMS2194; ThermoFisher Scientific) seguindo as instruções do fabricante. A área incremental sob a curva (AUC) a cada 120 minutos de glucose plasmática, insulina e GLP-1 será calculada usando a regra do trapézio, considerando os valores em jejum como linha de base.

Análise estatística Tamanho da amostra e poder: Este estudo será concebido como uma intervenção aguda de fase inicial, intra-sujeito, na qual cada participante serviu como seu próprio controlo em três condições (linha de base, GMM, GM) com um washout de uma semana. Dada a eficiência dos desenhos intra-sujeito, os investigadores planeiam um tamanho de amostra modesto (n = 10 completadores). Uma análise de sensibilidade indica que, para comparações emparelhadas bilaterais com α = 0,05 e 80% de poder, n = 10 pode detetar um grande efeito intra-sujeito padronizado de aproximadamente dz de Cohen ≈ 0,9-1,0. O teste de Shapiro-Wilk será usado para confirmar a normalidade dos dados. Correlações de ordem de Spearman serão usadas dentro de cada condição de intervenção (analisando GM e GMM separadamente) para examinar associações entre exposições glicémicas, insulinémicas e de GLP-1 pós-prandiais (AUC glicémica, AUC de insulina e AUC de GLP-1) e variáveis relacionadas com antioxidantes: atividade da SOD, TRAP plasmático (TEAC), atividade da catalase e ingestões dietéticas do QFA (vitamina C, vitamina E, carotenos, polifenóis totais e fibra). Os investigadores reportarão o coeficiente de Spearman e valores de p bilaterais (n = 10). Dada a natureza piloto e geradora de hipóteses do estudo, as análises serão exploratórias e não implicam causalidade; ajustes de multiplicidade não serão aplicados. Comparações múltiplas serão feitas usando o teste de Kruskal-Wallis assumindo um valor de p inferior a 0,05 como significativo. Todas as análises serão realizadas com o software GraphPad Prism versão 9.0.