Bonbons Gélifiés à la Baie de Maqui (MaquiGUM)

Critères d'inclusion et d'exclusion pour l'intervention Dix volontaires sédentaires seront recrutés. Critères d'inclusion : indice de masse corporelle (IMC) de surpoids ou d'obésité (IMC d'au moins 25,0 kg/m²) ; absence de maladie chronique non transmissible ; et sédentaire (moins de 30 minutes d'activité physique 3 fois par semaine). Tous les participants seront invités à maintenir leur activité physique, leur apport alimentaire et leurs médicaments pendant toute la durée de l'étude. Critères d'exclusion : utilisation de médicaments hypoglycémiants, de suppléments contenant des antioxydants et consommation élevée de polyphénols (plus de 2 g par jour) ; allergie alimentaire à la baie de Maqui ou à tout composant des GC ; grossesse ou allaitement. L'étude a été approuvée par le Comité d'éthique de la Faculté de pharmacie de l'Université de Valparaíso (CBI 014/2022).

Caractéristiques des participants Le poids et la taille seront déterminés pour calculer l'IMC, ainsi que le tour de taille et le pli du triceps. Les questionnaires de fréquence alimentaire (FFQ) seront récupérés avant l'étude pour estimer l'apport en fibres et en antioxydants alimentaires totaux, principalement la consommation de polyphénols, de carotènes et de vitamines E et C. Toute l'intervention a été réalisée à la Faculté de pharmacie de l'Université de Valparaíso, par du personnel qualifié.

Intervention Les participants effectueront une intervention aiguë à trois conditions, intra-sujet, avec des périodes de sevrage d'une semaine entre les visites : (i) ligne de base/témoin : 150 g de pain blanc (75 g de glucides disponibles) ; (ii) pain blanc + GM : 150 g de pain blanc plus 24 g de GM (3 gummies) ; et (iii) pain blanc + GMM : 150 g de pain blanc plus 24 g de GMM (3 gummies). Chaque participant servira de son propre témoin. À chaque jour d'étude (témoin, GM, GMM), un échantillon de base à jeun (temps 0) sera prélevé avant l'ingestion du repas test. Les visites auront lieu à des jours distincts, à une semaine d'intervalle, dans des conditions pré-test standardisées (jeûne nocturne, horaire matinal fixe et restrictions alimentaires/activités prédéfinies).

Condition témoin et atténuation du biais d'attente Notre condition témoin utilisera la journée avec uniquement du pain blanc comme témoin sans Maqui pour les réponses glycémiques et antioxydantes. Les interventions ajouteront 24 g de gummies (3 unités) à la même charge de pain. Les investigateurs n'incluront pas de « gummy placebo » séparé car l'étude est un pilote conçu autour d'un témoin objectif de pain blanc, et produire un gummy sans polyphénols sensoriellement indiscernable est difficile (pigments/arôme de Maqui) ; même GM vs. GMM différaient en odeur et en goût dans nos tests sensoriels, suggérant qu'un aveugle avec une matrice placebo serait probablement imparfait. Pour limiter les effets d'attente et atténuer les biais possibles, les investigateurs : (i) utiliseront des critères de jugement objectifs (glycémie/insuline/GLP-1 ; TRAP, SOD, CAT) ; (ii) appliqueront des conditions pré-test standardisées (jeûne de 12 h ; tests matinaux à heures fixes ; restrictions alimentaires/activités avec adhésion documentée) ; et (iii) mettront en œuvre des périodes de sevrage d'une semaine entre les interventions. Toutes les comparaisons seront intra-personnes par rapport au témoin pain blanc.

Procédures d'échantillonnage sanguin Des échantillons sanguins seront prélevés sur les participants après un jeûne nocturne de 12 h au début de chaque intervention et pendant une période de 2 h. Les échantillons seront collectés dans des tubes à héparine de sodium (concentration finale de 0,1 %). Pour les dosages de l'insuline et du GLP-1, le sang sera centrifugé à 2000 × g pendant 10 minutes à 4 °C et le surnageant sera congelé à -80 °C. Pour les mesures du statut antioxydant, le plasma sera séparé des globules rouges par centrifugation à 1500 × g pendant 1 min à 4 °C. Le plasma sera immédiatement congelé à -80 °C pour l'analyse ultérieure de la puissance antioxydante réactive totale (TRAP), tandis que les globules rouges seront lavés avec de l'albumine sérique bovine (BSA), centrifugés 3 fois à 1500 × g pendant 15 minutes, en éliminant le surnageant à chaque fois. Avant le stockage à -80 °C, les globules rouges seront dilués avec une solution hypotonique pour la catalase (CAT, ratio 1:10) et la superoxyde dismutase (SOD, ratio 1:28) pour analyse ultérieure.

Biomarqueurs du statut antioxydant Puissance antioxydante réactive totale (TRAP) Bref, 10 µL de surnageant seront mélangés avec un mélange 1:1 de 150 µM d'acide 2,2'-azino-bis(3-éthylbenzothiazoline-6-sulfonique) et 10 mM de 2,2'-azobis(2-amidinopropane), préalablement incubé à 45 °C pendant 30 minutes. La cinétique sera déterminée à 734 nm pendant 10, 30 et 50 secondes après l'ajout de l'échantillon. La capacité antioxydante sera mesurée en comparaison au Trolox®.

Mesure des protéines totales La quantification des protéines totales sera effectuée en utilisant les érythrocytes pour normaliser l'activité enzymatique de la SOD et de la CAT. Pour cela, le kit d'essai de protéines Pierce BCA (Thermofisher) sera utilisé, basé sur une courbe d'albumine réalisée à partir d'un standard d'albumine (Thermofisher). Tous les protocoles seront utilisés selon les recommandations du fabricant.

Superoxyde dismutase (SOD) Ce dosage est basé sur la réduction du cytochrome c par le radical superoxyde dans un système xanthine/xanthine oxydase. Bref, 5 µL d'échantillons homogénéisés seront mélangés avec 0,5 mM de xanthine (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) et 20 µM de cytochrome C (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) dissous dans un tampon phosphate. Cette solution sera mélangée avec de la xanthine oxydase (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) et 0,1 mM d'EDTA (1:40). L'activité enzymatique sera détectée à 550 nm dans un spectrophotomètre Rayleigh UV-2601. Chaque échantillon sera analysé en triple.

Catalase (CAT) L'activité de la catalase sera déterminée en mesurant la perte d'absorbance à 240 nm d'un mélange réactionnel composé de 100 µL de H2O2 0,3 M (Merck, Darmstadt, Allemagne) dans 2,9 mL de tampon phosphate (50 mM de Na2HPO4 et 50 mM de NaH2PO4, pH 7,8) et 50 µL d'échantillons. Les mesures seront effectuées pendant 90 secondes dans un spectrophotomètre Rayleigh UV-2601. Chaque échantillon sera analysé en triple.

Glucose, insuline et GLP-1 Des échantillons capillaires sanguins seront obtenus du doigt des participants à l'aide de bandelettes de test de glucose (One Touch II) avant la consommation du pain blanc (temps 0) et après consommation avec ou sans les gummies (à 15, 30, 60, 90 et 120 minutes). Des échantillons sanguins seront prélevés pour les concentrations d'insuline aux temps 0 et 120 minutes, qui seront mesurées à l'aide d'un immunoessai par chimiluminescence selon les recommandations du fabricant. Les taux plasmatiques humains de GLP-1 seront mesurés à 0 et 120 minutes à l'aide du kit ELISA GLP-1 (BMS2194 ; ThermoFisher Scientific) en suivant les instructions du fabricant. L'aire sous la courbe incrémentielle (AUC) toutes les 120 minutes de glucose plasmatique, d'insuline et de GLP-1 sera calculée en utilisant la règle des trapèzes avec les valeurs à jeun considérées comme ligne de base.

Analyse statistique Taille d'échantillon et puissance : Cette étude sera conçue comme une intervention aiguë intra-sujet de phase précoce, où chaque participant sert de son propre témoin à travers trois conditions (ligne de base, GMM, GM) avec un sevrage d'une semaine. Étant donné l'efficacité des plans intra-sujets, les investigateurs prévoient une taille d'échantillon modeste (n = 10 participants complets). Une analyse de sensibilité indique que, pour des comparaisons appariées bilatérales avec α = 0,05 et une puissance de 80 %, n = 10 peut détecter un effet standardisé intra-sujet important d'environ dz de Cohen ≈ 0,9-1,0. Le test de Shapiro-Wilk sera utilisé pour confirmer la normalité des données. Les corrélations de rang de Spearman seront utilisées dans chaque condition d'intervention (analysant GM et GMM séparément) pour examiner les associations entre les expositions glycémiques, insulinémiques et au GLP-1 postprandiales (AUC glycémique, AUC insulinique et AUC GLP-1), et les variables liées aux antioxydants : activité SOD, TRAP plasmatique (TEAC), activité catalase et apports alimentaires issus du FFQ (vitamine C, vitamine E, carotènes, polyphénols totaux et fibres). Les investigateurs rapporteront le coefficient de Spearman et les valeurs p bilatérales (n = 10). Étant donné la nature pilote et génératrice d'hypothèses de l'étude, les analyses seront exploratoires et n'impliquent pas de causalité ; les ajustements de multiplicité ne seront pas appliqués. Les comparaisons multiples seront effectuées en utilisant le test de Kruskal-Wallis en considérant une valeur p inférieure à 0,05 comme significative. Toutes les analyses seront effectuées avec le logiciel GraphPad Prism version 9.0.