Caramelle Gommose con Maqui Berry (MaquiGUM)

Criteri di inclusione ed esclusione per l'intervento Saranno reclutati dieci volontari sedentari. Criteri di inclusione: indice di massa corporea (BMI) di sovrappeso o obesità (BMI almeno 25,0 kg/m²); assenza di malattie croniche non trasmissibili; e sedentarietà (meno di 30 minuti di attività fisica per 3 volte a settimana). A tutti i partecipanti verrà chiesto di mantenere la loro attività fisica, l'assunzione di cibo e i farmaci durante l'intero studio. Criteri di esclusione: uso di farmaci ipoglicemizzanti, integratori contenenti antiossidanti e alto consumo di polifenoli (più di 2 g al giorno); allergia alimentare alla bacca di Maqui o a qualsiasi componente dei GC; gravidanza o allattamento. Lo studio è stato approvato dal Comitato Etico della Facoltà di Farmacia, Universidad de Valparaíso (CBI 014/2022).

Caratteristiche dei partecipanti Peso e altezza saranno determinati per calcolare il BMI, così come la circonferenza della vita e la plica tricipitale. I Questionari sulla Frequenza Alimentare (FFQ) saranno recuperati prima dello studio per stimare l'assunzione di fibre e antiossidanti dietetici totali, principalmente polifenoli, carotenoidi e consumo di vitamina E e C. Tutta l'intervento è stata eseguita presso la Facoltà di Farmacia, Universidad de Valparaíso, da personale competente.

Intervento I partecipanti completeranno un intervento acuto a tre condizioni, entro soggetto, con washout di una settimana tra le visite: (i) baseline/controllo: 150 g di pane bianco (75 g di carboidrati disponibili); (ii) pane bianco + GM: 150 g di pane bianco più 24 g di GM (3 gomme); e (iii) pane bianco + GMM: 150 g di pane bianco più 24 g di GMM (3 gomme). Ogni partecipante fungerà da proprio controllo. In ogni giorno di studio (controllo, GM, GMM), verrà prelevato un campione basale a digiuno (tempo 0) prima dell'ingestione del pasto di prova. Le visite avverranno in giorni separati, a una settimana di distanza, in condizioni pre-test standardizzate (digiuno notturno, programma mattutino fisso e restrizioni dietetiche/attività predefinite).

Condizione di controllo e mitigazione del bias di aspettativa La nostra condizione di controllo utilizzerà il giorno solo pane bianco come controllo senza Maqui per le risposte glicemiche e antiossidanti. Le interventi aggiungeranno 24 g di gomme (3 unità) allo stesso carico di pane. I ricercatori non includeranno una "gomma placebo" separata perché lo studio è un pilota progettato attorno a un controllo oggettivo di pane bianco, e produrre una gomma senza polifenoli sensorialmente indistinguibile è impegnativo (pigmenti/sapore del Maqui); anche GM vs. GMM differivano in odore e gusto nei nostri test sensoriali, suggerendo che l'occultamento con una matrice placebo sarebbe probabilmente imperfetto. Per limitare gli effetti di aspettativa e mitigare possibili bias, i ricercatori: (i) utilizzeranno endpoint oggettivi (glicemia/insulina/GLP-1; TRAP, SOD, CAT); (ii) applicheranno condizioni pre-test standardizzate (digiuno di 12 h; test mattutini a orari fissi; restrizioni dietetiche/attività con aderenza documentata); e (iii) implementeranno washout di una settimana tra le interventi. Tutti i confronti saranno intra-persona relativi al controllo pane bianco.

Procedure di campionamento del sangue I campioni di sangue saranno raccolti dai partecipanti dopo un digiuno notturno di 12 h all'inizio di ogni intervento e durante un periodo di 2 h. I campioni saranno raccolti in provette con eparina sodica (concentrazione finale dello 0,1%). Per le determinazioni di insulina e GLP-1, il sangue sarà centrifugato a 2000× g per 10 minuti a 4 °C e il surnatante sarà congelato a -80 °C. Per le misurazioni dello stato antiossidante, il plasma sarà separato dai globuli rossi mediante centrifugazione a 1500× g per 1 minuto a 4 °C. Il plasma sarà immediatamente congelato a -80 °C per la successiva analisi del potere antiossidante reattivo totale (TRAP), mentre i globuli rossi saranno lavati con albumina di siero bovino (BSA), centrifugati 3 volte a 1500× g per 15 minuti, scartando il surnatante ogni volta. Prima dello stoccaggio a -80°C, i globuli rossi saranno diluiti con una soluzione ipotonica per catalasi (CAT, rapporto 1:10) e superossido dismutasi (SOD, rapporto 1:28) per ulteriori analisi.

Biomarcatori dello stato antiossidante Potere Antiossidante Reattivo Totale (TRAP) Brevemente, 10 µL di surnatante saranno miscelati con una miscela 1:1 di 150 µM 2,20-azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-solfonico) e 10 mM 2,20-azobis(2-amidinopropano), precedentemente incubati a 45 °C per 30 minuti. Le cinetiche saranno determinate a 734 nm per 10, 30 e 50 secondi dopo l'aggiunta del campione. La capacità antiossidante sarà misurata confrontando con Trolox®.

Misurazione delle proteine totali La quantificazione delle proteine totali sarà eseguita utilizzando eritrociti per normalizzare l'attività enzimatica di SOD e CAT. Per questo, sarà utilizzato il Pierce BCA Protein Assay Kit (Thermofisher), basato su una curva di albumina realizzata da uno standard di albumina (Thermofisher). Tutti i protocolli saranno utilizzati secondo il produttore.

Superossido dismutasi (SOD) Questo saggio si basa sulla riduzione del citocromo c da parte del radicale superossido in un sistema xantina/xantina ossidasi. Brevemente, 5 µL di campioni omogeneizzati saranno miscelati con 0,5 mM xantina (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) e 20 µM citocromo C (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) disciolti in un tampone fosfato. Questa soluzione sarà miscelata con xantina ossidasi (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) e 0,1 mM EDTA (1:40). L'attività enzimatica sarà rilevata a 550 nm in uno spettrofotometro Rayleigh UV-2601. Ogni campione sarà analizzato in triplicato.

Catalasi (CAT) L'attività della catalasi sarà determinata misurando la perdita di assorbanza a 240 nm di una miscela di reazione composta da 100 µL di 0,3 M H2O2 (Merck, Darmstadt, Germania) in 2,9 mL di tampone fosfato (50 mM Na2HPO4 e 50 mM NaH2PO4, pH 7,8) e 50 µL di campioni. Le misurazioni saranno eseguite per 90 secondi in uno spettrofotometro Rayleigh UV-2601. Ogni campione sarà analizzato in triplicato.

Glucosio, Insulina e GLP-1 I campioni capillari di sangue saranno ottenuti dal dito del partecipante utilizzando strisce reattive per glucosio (One Touch II) prima del consumo del pane bianco (tempo 0) e dopo il consumo con o senza le gomme (a 15, 30, 60, 90 e 120 minuti). I campioni di sangue saranno ottenuti per le concentrazioni di insulina ai tempi 0 e 120 minuti, che saranno misurate utilizzando un immunoassay chemiluminescente secondo le raccomandazioni del produttore. I livelli plasmatici umani di GLP-1 saranno misurati a 0 e 120 minuti utilizzando il GLP-1 ELISA Kit (BMS2194; ThermoFisher Scientific) seguendo le istruzioni del produttore. L'area incrementale sotto la curva (AUC) ogni 120 minuti di glucosio plasmatico, insulina e GLP-1 sarà calcolata utilizzando la regola trapezoidale con i valori a digiuno considerati come baseline.

Analisi statistica Dimensione del campione e potenza: Questo studio sarà concepito come un intervento acuto di fase iniziale, entro soggetto, in cui ogni partecipante funge da proprio controllo attraverso tre condizioni (baseline, GMM, GM) con un washout di una settimana. Data l'efficienza dei disegni entro soggetto, i ricercatori stanno pianificando una dimensione del campione modesta (n = 10 completatori). Un'analisi di sensibilità indica che, per confronti appaiati bilaterali con α = 0,05 e potenza dell'80%, n = 10 può rilevare un grande effetto standardizzato entro soggetto di circa Cohen's dz ≈ 0,9-1,0. Il test di Shapiro-Wilk sarà utilizzato per confermare la normalità dei dati. Le correlazioni di rango di Spearman saranno utilizzate all'interno di ogni condizione di intervento (analizzando GM e GMM separatamente) per esaminare le associazioni tra esposizioni glicemiche, insulinemiche e GLP-1 postprandiali (AUC glicemico, AUC insulinico e AUC GLP-1) e variabili correlate agli antiossidanti: attività SOD, TRAP plasmatico (TEAC), attività catalasi e assunzioni dietetiche dall'FFQ (vitamina C, vitamina E, carotenoidi, polifenoli totali e fibre). I ricercatori riporteranno il coefficiente di Spearman e i valori p bilaterali (n = 10). Data la natura pilota e generativa di ipotesi dello studio, le analisi saranno esplorative e non implicano causalità; non verranno applicate correzioni per molteplicità. I confronti multipli saranno effettuati utilizzando il test di Kruskal-Wallis assumendo un valore p inferiore a 0,05 come significativo. Tutte le analisi saranno eseguite con il software GraphPad Prism versione 9.0.