Želatinové bonbóny s maqui berry (MaquiGUM)

Kritéria pro zařazení a vyloučení pro intervenci Bude rekrutováno deset sedavých dobrovolníků. Kritéria pro zařazení: index tělesné hmotnosti (BMI) nadváhy nebo obezity (BMI alespoň 25,0 kg/m²); absence neinfekčních chronických onemocnění; a sedavý životní styl (méně než 30 minut fyzické aktivity 3krát týdně). Všichni účastníci budou požádáni, aby během celé studie udržovali svou fyzickou aktivitu, příjem potravy a léky. Kritéria pro vyloučení: užívání hypoglykemických léků, doplňků stravy obsahujících antioxidanty a vysoká konzumace polyfenolů (více než 2 g denně); potravinová alergie na Maqui berry nebo jakoukoli složku z GCs; těhotenství nebo kojení. Studie byla schválena Etickou komisí Farmaceutické fakulty Universidad de Valparaíso (CBI 014/2022).

Charakteristiky účastníků Bude stanoveno hmotnost a výška pro výpočet BMI, stejně jako obvod pasu a tloušťka kožní řasy na tricepsu. Dotazníky frekvence příjmu potravy (FFQ) budou získány před studií pro odhad příjmu vlákniny a celkových dietních antioxidantů, zejména polyfenolů, karotenů a spotřeby vitaminů E a C. Veškerá intervence byla provedena na Farmaceutické fakultě Universidad de Valparaíso kvalifikovaným personálem.

Intervence Účastníci dokončí akutní intervenci se třemi podmínkami v rámci subjektu s týdenními vyplachovacími obdobími mezi návštěvami: (i) výchozí/kontrolní stav: 150 g bílého chleba (75 g dostupných sacharidů); (ii) bílý chléb + GM: 150 g bílého chleba plus 24 g GM (3 želatinové bonbóny); a (iii) bílý chléb + GMM: 150 g bílého chleba plus 24 g GMM (3 želatinové bonbóny). Každý účastník bude sloužit jako svá vlastní kontrola. Každý den studie (kontrola, GM, GMM) bude odebrán nalačno výchozí vzorek (čas 0) před požitím testovacího jídla. Návštěvy proběhnou v různých dnech s týdenním odstupem za standardizovaných předtestových podmínek (noční hladovění, pevný ranní rozvrh a předem stanovená dietní/aktivitní omezení).

Kontrolní podmínka a omezení očekávacího zkreslení Naše kontrolní podmínka použije den pouze s bílým chlebem jako kontrolu bez Maqui pro glykemické a antioxidační odpovědi. Intervence přidají 24 g želatinových bonbónů (3 kusy) ke stejné dávce chleba. Výzkumníci nezahrnou samostatný "placebo želatinový bonbon", protože studie je pilotní, navržená kolem objektivní kontroly s bílým chlebem, a výroba senzoricky nerozlišitelného želatinového bonbonu bez polyfenolů je náročná (pigmenty/chuť Maqui); dokonce GM vs. GMM se lišily v zápachu a chuti v našem senzorickém testování, což naznačuje, že zaslepení s placebovou matricí by pravděpodobně bylo nedokonalé. Pro omezení efektů očekávání a zmírnění možného zkreslení výzkumníci: (i) použijí objektivní koncové body (glykémie/inzulin/GLP-1; TRAP, SOD, CAT); (ii) vynutí standardizované předtestové podmínky (12 h hladovění; ranní testování v pevných hodinách; dietní/aktivitní omezení s doloženým dodržováním); a (iii) implementují týdenní vyplachovací období mezi intervencemi. Všechna srovnání budou uvnitř osoby vzhledem ke kontrole s bílým chlebem.

Postupy odběru krve Krevní vzorky budou odebrány od účastníků po 12hodinovém nočním hladovění na začátku každé intervence a během 2hodinového období. Vzorky budou odebrány do zkumavek s heparinem sodným (konečná koncentrace 0,1 %). Pro stanovení inzulinu a GLP-1 bude krev centrifugována při 2000× g po dobu 10 minut při 4 °C a supernatant bude zmražen při -80 °C. Pro měření antioxidačního stavu bude plazma oddělena od červených krvinek centrifugací při 1500× g po dobu 1 minuty při 4 °C. Plazma bude okamžitě zmražena při -80 °C pro následnou analýzu celkové reaktivní antioxidační kapacity (TRAP), zatímco červené krvinky budou promyty bovinním sérovým albuminem (BSA), centrifugovány 3krát při 1500× g po dobu 15 minut, přičemž supernatant bude pokaždé odstraněn. Před uložením při -80 °C budou červené krvinky naředěny hypotonickým roztokem pro katalázu (CAT, poměr 1:10) a superoxid dismutázu (SOD, poměr 1:28) pro další analýzu.

Biomarkery antioxidačního stavu Celková reaktivní antioxidační kapacita (TRAP) Stručně, 10 µL supernatantu bude smícháno se směsí 1:1 150 µM 2,20-azino-bis(3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonové kyseliny) a 10 mM 2,20-azobis(2-amidinopropanu), předtím inkubované při 45 °C po dobu 30 minut. Kinetika bude stanovena při 734 nm po 10, 30 a 50 sekundách po přidání vzorku. Antioxidační kapacita bude měřena ve srovnání s Troloxem®.

Stanovení celkového proteinu Kvantifikace celkového proteinu bude provedena pomocí erytrocytů pro normalizaci enzymatické aktivity SOD a CAT. K tomu bude použit Pierce BCA Protein Assay Kit (Thermofisher), založený na křivce albuminu vytvořené z Albumin Standart (Thermofisher). Všechny protokoly budou použity podle výrobce.

Superoxid dismutáza (SOD) Tento test je založen na redukci cytochromu c superoxidovým radikálem v systému xanthin/xanthin oxidáza. Stručně, 5 µL homogenizovaných vzorků bude smícháno s 0,5 mM xanthinem (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) a 20 µM cytochromem C (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) rozpuštěným ve fosfátovém pufru. Tento roztok bude smíchán s xanthin oxidázou (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) a 0,1 mM EDTA (1:40). Enzymatická aktivita bude detekována při 550 nm v Rayleigh UV-2601 spektrofotometru. Každý vzorek bude analyzován třikrát.

Kataláza (CAT) Aktivita katalázy bude stanovena měřením poklesu absorbance při 240 nm reakční směsi sestávající ze 100 µL 0,3 M H2O2 (Merck, Darmstadt, Německo) v 2,9 mL fosfátového pufru (50 mM Na2HPO4 a 50 mM NaH2PO4, pH 7,8) a 50 µL vzorků. Měření bude provedeno po dobu 90 sekund v Rayleigh UV-2601 spektrofotometru. Každý vzorek bude analyzován třikrát.

Glukóza, inzulin a GLP-1 Kapilární vzorky krve budou získány z prstu účastníka pomocí glukózových testovacích proužků (One Touch II) před konzumací bílého chleba (čas 0) a po konzumaci s nebo bez želatinových bonbónů (v 15, 30, 60, 90 a 120 minutách). Krevní vzorky budou získány pro koncentrace inzulinu v časových bodech 0 a 120 minut, které budou měřeny pomocí chemiluminiscenčního imunoeseje podle doporučení výrobce. Hladiny GLP-1 v lidské plazmě budou měřeny v 0 a 120 minutách pomocí GLP-1 ELISA Kit (BMS2194; ThermoFisher Cientific) podle instrukcí výrobce. Přírůstková plocha pod křivkou (AUC) každých 120 minut plazmatické glukózy, inzulinu a GLP-1 bude vypočtena pomocí lichoběžníkového pravidla s hodnotami nalačno považovanými za výchozí.

Statistická analýza Velikost vzorku a síla: Tato studie je koncipována jako časná, akutní intervence v rámci subjektu, ve které každý účastník sloužil jako svá vlastní kontrola napříč třemi podmínkami (výchozí, GMM, GM) s týdenním vyplachovacím obdobím. Vzhledem k efektivitě návrhů v rámci subjektu plánují výzkumníci skromnou velikost vzorku (n = 10 dokončitelů). Citlivostní analýza naznačuje, že pro oboustranná párová srovnání s α = 0,05 a 80% silou může n = 10 detekovat velký standardizovaný efekt v rámci subjektu přibližně Cohen's dz ≈ 0,9-1,0. Test Shapiro-Wilk bude použit k potvrzení normality dat. Spearmanovy pořadové korelace budou použity v rámci každé intervenční podmínky (analýza GM a GMM zvlášť) pro zkoumání asociací mezi postprandiálními glykemickými, inzulinemickými a GLP-1 expozicemi (glykemická AUC, inzulinová AUC a GLP-1 AUC) a antioxidačními proměnnými: aktivita SOD, plazmatická TRAP (TEAC), aktivita katalázy a dietní příjmy z FFQ (vitamin C, vitamin E, karoteny, celkové polyfenoly a vláknina). Výzkumníci uvedou Spearmanův koeficient a oboustranné p-hodnoty (n = 10). Vzhledem k pilotní, hypotézu generující povaze studie budou analýzy průzkumné a neimplikují kauzalitu; úpravy pro multiplicitu nebudou aplikovány. Vícenásobná srovnání budou provedena pomocí Kruskal-Wallis testu s předpokladem p-hodnoty menší než 0,05 jako významné. Veškerá analýza bude provedena s softwarem GraphPad Prism verze 9.0.