Gummygodteri med maquibær (MaquiGUM)

Inklusjons- og eksklusjonskriterier for intervensjonen Ti inaktive frivillige vil bli rekruttert. Inklusjonskriterier: kroppsmasseindeks (KMI) for overvekt eller fedme (KMI minst 25,0 kg/m²); fravær av ikke-smittsom kronisk sykdom; og inaktiv (mindre enn 30 minutters fysisk aktivitet 3 ganger i uken). Alle deltakere vil bli bedt om å opprettholde sin fysiske aktivitet, matinntak og medisinering gjennom hele studien. Eksklusjonskriterier: bruk av blodsukkerreduserende medisiner, kosttilskudd som inneholder antioksidanter, og høyt inntak av polyfenoler (mer enn 2 g per dag); matallergi mot maquibær eller noen komponent fra GC-ene; graviditet eller amming. Studien ble godkjent av Etisk komité ved Fakultetet for farmasi, Universidad de Valparaíso (CBI 014/2022).

Deltakeregenskaper Vekt og høyde vil bli bestemt for å beregne KMI, samt midjemål og tricepsfold. Matfrekvensspørreskjemaer (FFQ) vil bli hentet inn før studien for å estimere fiber- og totalt diettetisk antioksidantinntak, hovedsakelig polyfenoler, karotener, og vitamin E- og C-inntak. All intervensjon ble utført på Fakultetet for farmasi, Universidad de Valparaíso, av kvalifisert personale.

Intervensjon Deltakere vil gjennomføre en tre-tilstand, innenfor-subjekt akutt intervensjon med én ukes utvasking mellom besøkene: (i) utgangspunkt/kontroll: 150 g hvitt brød (75 g tilgjengelig karbohydrat); (ii) hvitt brød + GM: 150 g hvitt brød pluss 24 g GM (3 gelébiter); og (iii) hvitt brød + GMM: 150 g hvitt brød pluss 24 g GMM (3 gelébiter). Hver deltaker vil tjene som sin egen kontroll. På hver studiedag (kontroll, GM, GMM) vil en faste utgangspunktprøve (tid 0) bli tatt før inntak av testmåltidet. Besøk vil finne sted på separate dager, én uke fra hverandre, under standardiserte fortestbetingelser (nattfasting, fast morgentimeplan, og forhåndsbestemte kost-/aktivitetsbegrensninger).

Kontrolltilstand og begrensning av forventningsskjevhet Vår kontrolltilstand vil bruke dagen med kun hvitt brød som ingen-maqui-kontroll for glykemiske og antioksidative responser. Intervensjonene vil legge til 24 g gelébiter (3 enheter) til samme brødlast. Forskerne vil ikke inkludere en separat "placebo-gelébit" fordi studien er en pilot designet rundt en objektiv hvitt-brød-kontroll, og å produsere en sensorisk uatskillelig polyfenolfri gelébit er utfordrende (maquipigmenter/smak); selv GM vs. GMM skilte seg i lukt og smak i vår sensoriske testing, noe som tyder på at blinding med en placebomatrise sannsynligvis ville være ufullstendig. For å begrense forventningseffekter og dempe mulig skjevhet, vil forskerne: (i) bruke objektive endepunkter (glykemi/insulin/GLP-1; TRAP, SOD, CAT); (ii) håndheve standardiserte fortestbetingelser (12 t fast; morgenesting på faste tidspunkt; kost-/aktivitetsbegrensninger med dokumentert overholdelse); og (iii) implementere én ukes utvasking mellom intervensjonene. Alle sammenligninger vil være innenfor-person i forhold til hvitt-brød-kontrollen.

Blodprøveprosedyrer Blodprøver vil bli samlet fra deltakerne etter 12 timers nattfasting ved starten av hver intervensjon og i løpet av en 2 timers periode. Prøver vil bli samlet i natriumheparinrør (endelig konsentrasjon på 0,1 %). For insulin- og GLP-1-bestemmelser vil blod bli sentrifugert ved 2000× g i 10 minutter ved 4 °C og overstand vil bli frosset ved -80 °C. For antioksidasjonsstatusmålingene vil plasma bli separert fra de røde blodcellene via sentrifugering ved 1500× g i 1 min ved 4 °C. Plasma vil umiddelbart bli frosset ved -80 °C for påfølgende total reaktiv antioksidantkraft (TRAP) analyse, mens røde blodceller vil bli vasket med bovint serumalbumin (BSA), sentrifugert 3 ganger ved 1500× g i 15 minutter, og kaste overstanden hver gang. Før lagring ved -80°C vil de røde blodcellene bli fortynnet med en hypoton løsning for katalase (CAT, forhold 1:10) og superoksiddismutase (SOD, forhold 1:28) for videre analyse.

Antioksidasjonsstatus biomarkører Total Reaktiv Antioksidantkraft (TRAP) Kort fortalt, 10 µL overstand vil blandes med en 1:1 blanding av 150 µM 2,2'-azino-bis(3-etylbenzotiazolin-6-sulfonsyre) og 10 mM 2,2'-azobis(2-amidinopropan), tidligere inkubert ved 45 °C i 30 minutter. Kinetikk vil bli bestemt ved 734 nm i 10, 30 og 50 sekunder etter å ha tilsatt prøven. Antioksidantkapasiteten vil bli målt sammenlignet med Trolox®.

Total proteinmåling Total proteinkvantifisering vil bli utført ved bruk av erytrocytter for å normalisere SOD- og CAT-enzymaktivitet. For dette vil Pierce BCA Protein Assay Kit (Thermofisher) bli brukt, basert på en albumin-kurve laget fra en Albumin Standard (Thermofisher). Alle protokoller vil bli brukt i henhold til produsentens anvisninger.

Superoksiddismutase (SOD) Denne analysen er basert på reduksjon av sytochrom c av superoksidradikalet i et xanthin/xanthinoxidase system. Kort fortalt, 5 µL homogeniserte prøver vil blandes med 0,5 mM xanthin (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) og 20 µM sytochrom C (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) oppløst i en fosfatbuffer. Denne løsningen vil blandes med xanthinoxidase (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) og 0,1 mM EDTA (1:40). Enzymaktivitet vil bli detektert ved 550 nm i en Rayleigh UV-2601 spektrofotometer. Hver prøve vil bli analysert i triplikat.

Katalase (CAT) Katalaseaktiviteten vil bli bestemt ved å måle tapet av absorbans ved 240 nm av en reaksjonsblanding bestående av 100 µL 0,3 M H2O2 (Merck, Darmstadt, Tyskland) i 2,9 mL fosfatbuffer (50 mM Na2HPO4 og 50 mM NaH2PO4, pH 7,8) og 50 µL prøver. Målinger vil bli utført i løpet av 90 sekunder i en Rayleigh UV-2601 spektrofotometer. Hver prøve vil bli analysert i triplikat.

Glukose, Insulin og GLP-1 Blodkapillærprøver vil bli tatt fra deltakerens finger ved bruk av glukoseteststriper (One Touch II) før inntak av hvitt brød (tid 0) og etter inntak med eller uten gelébitene (ved 15, 30, 60, 90 og 120 minutter). Blodprøver vil bli tatt for insulin-konsentrasjoner ved tidspunktene 0 og 120 minutter, som vil bli målt ved bruk av en kemiluminescens immunoassay i henhold til produsentens anbefalinger. Humane plasmanivåer av GLP-1 vil bli målt ved 0 og 120 minutter ved bruk av GLP-1 ELISA Kit (BMS2194; ThermoFisher Scientific) etter produsentens instruksjoner. Det inkrementelle arealet under kurven (AUC) hvert 120 minutter for plasmaglukose, insulin og GLP-1 vil bli beregnet ved bruk av trapesmetoden med fasteverdier betraktet som utgangspunkt.

Statistisk analyse Utvalgsstørrelse og styrke: Denne studien vil bli oppfattet som en tidligfase, akutt, innenfor-subjekt intervensjon der hver deltaker tjente som sin egen kontroll på tvers av tre tilstander (utgangspunkt, GMM, GM) med én ukes utvasking. Gitt effektiviteten til innenfor-subjekt design, planlegger forskerne en beskjeden utvalgsstørrelse (n = 10 fullførere). En sensitivitetsanalyse indikerer at, for tosidige parrede sammenligninger med α = 0,05 og 80 % styrke, kan n = 10 påvise en stor standardisert innenfor-subjekt effekt på omtrent Cohens dz ≈ 0,9-1,0. Shapiro-Wilk test vil bli brukt for å bekrefte normalitet av dataene. Spearmans rangkorrelasjoner vil bli brukt innenfor hver intervensjonstilstand (analysert GM og GMM separat) for å undersøke assosiasjoner mellom postprandial glykemisk, insulinemisk og GLP-1 eksponering (glykemisk AUC, insulin AUC og GLP-1 AUC), og antioksidant-relaterte variabler: SOD-aktivitet, plasma TRAP (TEAC), katalaseaktivitet, og diettinntak fra FFQ (vitamin C, vitamin E, karotener, totale polyfenoler, og fiber). Forskerne vil rapportere Spearman-koeffisient og tosidige p-verdier (n = 10). Gitt pilotens, hypotesegenererende natur av studien, vil analysene være utforskende og innebærer ikke årsakssammenheng; multiplisitetsjusteringer vil ikke bli brukt. Flere sammenligninger vil bli gjort ved bruk av Kruskal-Wallis test med antatt p-verdi mindre enn 0,05 som signifikant. All analyse vil bli utført med GraphPad Prism software versjon 9.0.