Gummy Snoepjes Met Maqui-bes (MaquiGUM)

Inclusie- en exclusiecriteria voor interventie Er zullen tien sedentaire vrijwilligers worden geworven. Inclusiecriteria: body mass index (BMI) van overgewicht of obesitas (BMI minimaal 25,0 kg/m²); afwezigheid van niet-overdraagbare chronische ziekte; en sedentair (minder dan 30 minuten lichamelijke activiteit voor 3 keer per week). Alle deelnemers wordt gevraagd hun lichamelijke activiteit, voedselinname en medicatie gedurende de gehele studie te handhaven. Exclusiecriteria: gebruik van hypoglykemische geneesmiddelen, supplementen die antioxidanten bevatten, en hoge consumptie van polyfenolen (meer dan 2 g per dag); voedselallergie voor Maqui-bes of enig bestanddeel uit de GC's; zwangerschap of lactatie. De studie werd goedgekeurd door de Ethische Commissie van de Faculteit Farmacie, Universidad de Valparaíso (CBI 014/2022).

Kenmerken van deelnemers Gewicht en lengte worden bepaald om de BMI te berekenen, evenals de middelomtrek en tricepsplooi. Voedselfrequentievragenlijsten (FFQ) worden vóór de studie opgehaald om de inname van vezels en totale voedingsantioxidanten, voornamelijk polyfenolen, carotenen, en vitamine E en C, te schatten. Alle interventie werd uitgevoerd op de Faculteit Farmacie, Universidad de Valparaíso, door gekwalificeerd personeel.

Interventie Deelnemers voltooien een acute interventie met drie condities, binnen proefpersonen, met een uitwasperiode van één week tussen de bezoeken: (i) baseline/controle: 150 g witbrood (75 g beschikbare koolhydraten); (ii) witbrood + GM: 150 g witbrood plus 24 g GM (3 gummies); en (iii) witbrood + GMM: 150 g witbrood plus 24 g GMM (3 gummies). Elke deelnemer dient als zijn/haar eigen controle. Op elke studiedag (controle, GM, GMM) wordt een nuchter basismonster (tijd 0) afgenomen vóór inname van de testmaaltijd. Bezoeken vinden plaats op aparte dagen, een week uit elkaar, onder gestandaardiseerde pre-testcondities (nuchter na nacht, vast ochtendschema, en vooraf gespecificeerde dieet-/activiteitsbeperkingen).

Controleconditie en beperking van verwachtingsbias Onze controleconditie gebruikt de dag met alleen witbrood als de geen-Maqui-controle voor glykemische en antioxidantresponsen. Interventies voegen 24 g gummies (3 eenheden) toe aan dezelfde broodbelasting. De onderzoekers nemen geen aparte "placebo-gummy" op omdat de studie een pilot is, ontworpen rond een objectieve witbroodcontrole, en het produceren van een sensorisch ononderscheidbare polyfenolvrije gummy uitdagend is (Maqui-pigmenten/smaak); zelfs GM versus GMM verschilde in geur en smaak in onze sensorische tests, wat suggereert dat blindering met een placebomatrix waarschijnlijk onvolmaakt zou zijn. Om verwachtingseffecten te beperken en mogelijke bias te verminderen, nemen de onderzoekers: (i) objectieve eindpunten (glykemie/insuline/GLP-1; TRAP, SOD, CAT); (ii) gestandaardiseerde pre-testcondities (12 uur vasten; ochtendtesten op vaste uren; dieet-/activiteitsbeperkingen met gedocumenteerde naleving); en (iii) uitwasperiodes van één week tussen interventies. Alle vergelijkingen zijn binnen-personen ten opzichte van de witbroodcontrole.

Bloedmonsterprocedures Bloedmonsters worden verzameld van de deelnemers na een 12 uur durende nachtelijke vasten aan het begin van elke interventie en gedurende een periode van 2 uur. Monsters worden verzameld in natriumheparinebuizen (eindconcentratie van 0,1%). Voor insuline- en GLP-1-bepalingen wordt bloed gecentrifugeerd bij 2000× g gedurende 10 minuten bij 4 °C en het supernatant wordt ingevroren bij -80 °C. Voor de antioxidantstatusmetingen wordt plasma gescheiden van de rode cellen via centrifugatie bij 1500× g gedurende 1 minuut bij 4 °C. Plasma wordt onmiddellijk ingevroren bij -80 °C voor latere totale reactieve antioxidantkracht (TRAP)-analyse, terwijl rode cellen worden gewassen met runderserumalbumine (BSA), driemaal gecentrifugeerd bij 1500× g gedurende 15 minuten, waarbij het supernatant elke keer wordt weggegooid. Voor opslag bij -80°C worden de rode cellen verdund met een hypotone oplossing voor katalase (CAT, verhouding 1:10) en superoxide dismutase (SOD, verhouding 1:28) voor verdere analyse.

Antioxidantstatusbiomarkers Totale Reactieve Antioxidantkracht (TRAP) Kort samengevat, 10 µL supernatant wordt gemengd met een 1:1 mengsel van 150 µM 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonzuur) en 10 mM 2,2'-azobis(2-amidinopropaan), eerder geïncubeerd bij 45 °C gedurende 30 minuten. Kinetiek wordt bepaald bij 734 nm voor 10, 30 en 50 seconden na toevoeging van het monster. De antioxidantcapaciteit wordt gemeten in vergelijking met Trolox®.

Totale eiwitmeting Totale eiwitkwantificering wordt uitgevoerd met erytrocyten om SOD- en CAT-enzymactiviteit te normaliseren. Hiervoor wordt de Pierce BCA Protein Assay Kit (Thermofisher) gebruikt, gebaseerd op een albuminecurve gemaakt van een Albumin Standaard (Thermofisher). Alle protocollen worden gebruikt volgens de fabrikant.

Superoxide dismutase (SOD) Deze assay is gebaseerd op de reductie van cytochroom c door het superoxide-radicaal in een xanthine/xanthine-oxidase-systeem. Kort samengevat, 5 µL gehomogeniseerde monsters wordt gemengd met 0,5 mM xanthine (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VS) en 20 µM cytochroom C (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VS) opgelost in een fosfaatbuffer. Deze oplossing wordt gemengd met xanthine-oxidase (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VS) en 0,1 mM EDTA (1:40). Enzymatische activiteit wordt gedetecteerd bij 550 nm in een Rayleigh UV-2601-spectrofotometer. Elk monster wordt in triplikaat geanalyseerd.

Katalase (CAT) De katalase-activiteit wordt bepaald door het verlies van absorptie bij 240 nm te meten van een reactiemengsel bestaande uit 100 µL van 0,3 M H2O2 (Merck, Darmstadt, Duitsland) in 2,9 mL fosfaatbuffer (50 mM Na2HPO4 en 50 mM NaH2PO4, pH 7,8) en 50 µL monsters. Metingen worden uitgevoerd gedurende 90 seconden in een Rayleigh UV-2601-spectrofotometer. Elk monster wordt in triplikaat geanalyseerd.

Glucose, Insuline en GLP-1 Bloedcapillaire monsters worden verkregen uit de vinger van de deelnemer met glucoseteststrips (One Touch II) vóór consumptie van het witbrood (tijd 0) en na consumptie met of zonder de gummies (op 15, 30, 60, 90 en 120 minuten). Bloedmonsters worden verkregen voor insulineconcentraties op tijdstippen 0 en 120 minuten, die worden gemeten met een chemiluminescentie-immunoassay volgens de aanbevelingen van de fabrikant. Humane plasmaspiegels van GLP-1 worden gemeten op 0 en 120 minuten met de GLP-1 ELISA Kit (BMS2194; ThermoFisher Scientific) volgens de instructies van de fabrikant. De incrementele oppervlakte onder de curve (AUC) elke 120 minuten van plasmaglucose, insuline en GLP-1 wordt berekend met behulp van de trapeziumregel met nuchtere waarden als baseline.

Statistische analyse Steekproefomvang en power: Deze studie wordt opgevat als een vroegefase, acute, binnen-proefpersonen interventie waarbij elke deelnemer als zijn/haar eigen controle diende over drie condities (baseline, GMM, GM) met een uitwasperiode van één week. Gezien de efficiëntie van binnen-proefpersonen ontwerpen, plannen onderzoekers een bescheiden steekproefomvang (n = 10 voltooiers). Een gevoeligheidsanalyse geeft aan dat, voor tweezijdige gepaarde vergelijkingen met α = 0,05 en 80% power, n = 10 een groot gestandaardiseerd binnen-proefpersonen effect van ongeveer Cohen's dz ≈ 0,9-1,0 kan detecteren. Shapiro-Wilk-test wordt gebruikt om normaliteit van de data te bevestigen. Spearman's rangcorrelaties worden gebruikt binnen elke interventieconditie (GM en GMM apart analyserend) om associaties te onderzoeken tussen postprandiale glykemische, insulinemische en GLP-1-blootstellingen (glykemische AUC, insuline AUC en GLP-1 AUC), en antioxidant-gerelateerde variabelen: SOD-activiteit, plasma TRAP (TEAC), katalase-activiteit, en voedingsinnames uit de FFQ (vitamine C, vitamine E, carotenen, totale polyfenolen, en vezels). Onderzoekers rapporteren Spearman-coëfficiënt en tweezijdige p-waarden (n = 10). Gezien de pilot, hypothesegenererende aard van de studie, zijn analyses exploratief en impliceren geen causaliteit; multipliciteitscorrecties worden niet toegepast. Meervoudige vergelijkingen worden gemaakt met de Kruskal-Wallis-test waarbij een p-waarde kleiner dan 0,05 als significant wordt aangenomen. Alle analyses worden uitgevoerd met GraphPad Prism software versie 9,0.