Gelégodisar med maquibär (MaquiGUM)

Inklusions- och exklusionskriterier för interventionen Tio stillasittande volontärer kommer att rekryteras. Inklusionskriterier: kroppsmassindex (BMI) för övervikt eller fetma (BMI minst 25,0 kg/m²); frånvaro av icke-smittsamma kroniska sjukdomar; och stillasittande (mindre än 30 minuters fysisk aktivitet 3 gånger per vecka). Alla deltagare kommer att uppmanas att behålla sin fysiska aktivitet, matintag och medicinering under hela studien. Exklusionskriterier: användning av läkemedel mot lågt blodsocker, kosttillskott som innehåller antioxidanter och hög konsumtion av polyfenoler (mer än 2 g per dag); matallergi mot Maqui-bär eller någon komponent från GC; graviditet eller amning. Studien godkändes av etikkommittén vid fakulteten för farmaci, Universidad de Valparaíso (CBI 014/2022).

Deltagarkarakteristika Vikt och längd kommer att bestämmas för att beräkna BMI, liksom midjeomkrets och tricepsveck. Matfrekvensformulär (FFQ) kommer att samlas in före studien för att uppskatta fibr- och totalt antioxidativt intag från kosten, främst polyfenoler, karotener samt konsumtion av vitamin E och C. All intervention utfördes vid fakulteten för farmaci, Universidad de Valparaíso, av kvalificerad personal.

Intervention Deltagarna kommer att genomföra en akut intervention med tre förhållanden inom samma individ med en veckas utspolning mellan besöken: (i) baslinje/kontroll: 150 g vitt bröd (75 g tillgängliga kolhydrater); (ii) vitt bröd + GM: 150 g vitt bröd plus 24 g GM (3 gelégodisar); och (iii) vitt bröd + GMM: 150 g vitt bröd plus 24 g GMM (3 gelégodisar). Varje deltagare kommer att fungera som sin egen kontroll. På varje studiedag (kontroll, GM, GMM) kommer ett fastande baslinjeprov (tid 0) att tas innan intag av testmåltiden. Besöken kommer att ske på separata dagar, en vecka mellan varje, under standardiserade förtestförhållanden (övernattningsfasta, fast morgonschema och förutbestämda kost-/aktivitetsrestriktioner).

Kontrollvillkor och minskning av förväntningsbias Vårt kontrollvillkor använder dagen med endast vitt bröd som ingen-Maqui-kontroll för glykemiska och antioxidativa svar. Interventionerna kommer att lägga till 24 g gelégodisar (3 enheter) till samma brödlast. Forskarna kommer inte att inkludera en separat "placebo-gelégodis" eftersom studien är en pilotstudie utformad kring en objektiv vitt-bröd-kontroll, och att producera en sensoriskt oskiljbar polyfenolfri gelégodis är utmanande (Maqui-pigment/smak); även GM kontra GMM skiljde sig i lukt och smak i våra sensoriska tester, vilket tyder på att förblinding med en placebomatris sannolikt skulle vara ofullständig. För att begränsa förväntningseffekter och mildra möjlig bias kommer forskarna: (i) att använda objektiva slutpunkter (glykemi/insulin/GLP-1; TRAP, SOD, CAT); (ii) genomdriva standardiserade förtestförhållanden (12 timmars fasta; morgontestning vid fasta tider; kost-/aktivitetsrestriktioner med dokumenterad följsamhet); och (iii) implementera en veckas utspolning mellan interventioner. Alla jämförelser kommer att vara inom-person i förhållande till vitt-bröd-kontrollen.

Blodprovsprocedurer Blodprover kommer att samlas från deltagarna efter 12 timmars övernattningsfasta vid början av varje intervention och under en 2-timmarsperiod. Prover kommer att samlas i natriumheparinrör (slutkoncentration 0,1 %). För insulin- och GLP-1-bestämningar kommer blod att centrifugeras vid 2000× g i 10 minuter vid 4 °C och supernatanten kommer att frysas vid -80 °C. För antioxidationsstatusmätningar kommer plasma att separeras från röda blodkroppar via centrifugation vid 1500× g i 1 minut vid 4 °C. Plasma kommer omedelbart att frysas vid -80 °C för efterföljande analys av total reaktiv antioxidativ kraft (TRAP), medan röda blodkroppar kommer att tvättas med bovint serumalbumin (BSA), centrifugeras 3 gånger vid 1500× g i 15 minuter, och supernatanten kasseras varje gång. Innan förvaring vid -80 °C kommer röda blodkroppar att spädas med en hypoton lösning för katalas (CAT, förhållande 1:10) och superoxiddismutas (SOD, förhållande 1:28) för vidare analys.

Antioxidationsstatus-biomarkörer Total reaktiv antioxidativ kraft (TRAP) Kortfattat kommer 10 µL supernatant att blandas med en 1:1-blandning av 150 µM 2,20-azino-bis(3-etylbensotiazolin-6-sulfonsyra) och 10 mM 2,20-azobis(2-amidinopropan), tidigare inkuberad vid 45 °C under 30 minuter. Kinetik kommer att bestämmas vid 734 nm i 10, 30 och 50 sekunder efter tillsats av provet. Den antioxidativa kapaciteten kommer att mätas jämfört med Trolox®.

Total proteinmätning Total proteinkvantifiering kommer att utföras med erytrocyter för att normalisera SOD- och CAT-enzymaktivitet. För detta kommer Pierce BCA Protein Assay Kit (Thermofisher) att användas, baserat på en albuminstandardkurva gjord från en Albumin Standard (Thermofisher). Alla protokoll kommer att användas enligt tillverkarens instruktioner.

Superoxiddismutas (SOD) Denna analys baseras på reduktion av cytochrom c av superoxidradikalen i ett xantin/xantinoxidassystem. Kortfattat kommer 5 µL homogeniserade prover att blandas med 0,5 mM xantin (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) och 20 µM cytochrom C (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) upplöst i en fosfatbuffert. Denna lösning kommer att blandas med xantinoxidas (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) och 0,1 mM EDTA (1:40). Enzymaktivitet kommer att detekteras vid 550 nm i en Rayleigh UV-2601-spektrofotometer. Varje prov kommer att analyseras i triplikat.

Katalas (CAT) Katalasaktivitet kommer att bestämmas genom att mäta förlusten av absorbans vid 240 nm av en reaktionsblandning bestående av 100 µL 0,3 M H₂O₂ (Merck, Darmstadt, Tyskland) i 2,9 mL fosfatbuffert (50 mM Na₂HPO₄ och 50 mM NaH₂PO₄, pH 7,8) och 50 µL prover. Mätningar kommer att utföras under 90 sekunder i en Rayleigh UV-2601-spektrofotometer. Varje prov kommer att analyseras i triplikat.

Glukos, Insulin och GLP-1 Kapillärblodprover kommer att erhållas från deltagarens finger med hjälp av glukostestremsor (One Touch II) före konsumtion av vitt bröd (tid 0) och efter konsumtion med eller utan gelégodisar (vid 15, 30, 60, 90 och 120 minuter). Blodprover kommer att tas för insulinkoncentrationer vid tidpunkterna 0 och 120 minuter, som kommer att mätas med en kemiluminescensimmunoassay enligt tillverkarens rekommendationer. Humana plasmanivåer av GLP-1 kommer att mätas vid 0 och 120 minuter med hjälp av GLP-1 ELISA Kit (BMS2194; ThermoFisher Scientific) enligt tillverkarens instruktioner. Den inkrementella arean under kurvan (AUC) för varje 120 minuter av plasmaglukos, insulin och GLP-1 kommer att beräknas med hjälp av trapetsregeln med fastande värden som baslinje.

Statistisk analys Stickprovsstorlek och styrka: Denna studie kommer att uppfattas som en tidigfas, akut, inom-individ-intervention där varje deltagare fungerade som sin egen kontroll över tre förhållanden (baslinje, GMM, GM) med en veckas utspolning. Med tanke på effektiviteten hos inom-individ-design planerar forskarna en blygsam stickprovsstorlek (n = 10 fullföljare). En sensitivitetsanalys indikerar att, för tvåsidiga parade jämförelser med α = 0,05 och 80 % styrka, kan n = 10 upptäcka en stor standardiserad inom-individ-effekt på ungefär Cohen's dz ≈ 0,9-1,0. Shapiro-Wilk-test kommer att användas för att bekräfta normalitet hos data. Spearmans rangkorrelationer kommer att användas inom varje interventionsvillkor (analysera GM och GMM separat) för att undersöka associationer mellan postprandiell glykemisk, insulinemisk och GLP-1-exponering (glykemisk AUC, insulin AUC och GLP-1 AUC) och antioxidationsrelaterade variabler: SOD-aktivitet, plasma TRAP (TEAC), katalasaktivitet och kostintag från FFQ (vitamin C, vitamin E, karotener, totala polyfenoler och fiber). Forskarna kommer att rapportera Spearman-koefficient och tvåsidiga p-värden (n = 10). Med tanke på pilotstudiens hypotesgenererande karaktär kommer analyser att vara explorativa och inte antyda kausalitet; multiplikitetsjusteringar kommer inte att tillämpas. Multipla jämförelser kommer att göras med Kruskal-Wallis-test med antagandet att p-värdet mindre än 0,05 är signifikant. All analys kommer att utföras med GraphPad Prism-programvara version 9.0.