Gominolas con Maqui Berry (MaquiGUM)

Criterios de inclusión y exclusión para la intervención Se reclutarán diez voluntarios sedentarios. Criterios de inclusión: índice de masa corporal (IMC) de sobrepeso u obesidad (IMC de al menos 25,0 kg/m²); ausencia de enfermedad crónica no transmisible; y sedentarismo (menos de 30 minutos de actividad física 3 veces por semana). Se pedirá a todos los participantes que mantengan su actividad física, ingesta alimentaria y medicación durante todo el estudio. Criterios de exclusión: uso de fármacos hipoglucemiantes, suplementos que contengan antioxidantes y alto consumo de polifenoles (más de 2 g al día); alergia alimentaria a la baya de maqui o cualquier componente de los GCs; embarazo o lactancia. El estudio fue aprobado por el Comité de Ética de la Facultad de Farmacia de la Universidad de Valparaíso (CBI 014/2022).

Características de los participantes Se determinarán el peso y la altura para calcular el IMC, así como la circunferencia de la cintura y el pliegue del tríceps. Se recuperarán Cuestionarios de Frecuencia Alimentaria (FFQ) antes del estudio para estimar la ingesta de fibra y antioxidantes dietéticos totales, principalmente polifenoles, carotenos y consumo de vitaminas E y C. Toda la intervención se realizó en la Facultad de Farmacia de la Universidad de Valparaíso, por personal capacitado.

Intervención Los participantes completarán una intervención aguda de tres condiciones, dentro del mismo sujeto, con períodos de lavado de una semana entre visitas: (i) línea base/control: 150 g de pan blanco (75 g de carbohidratos disponibles); (ii) pan blanco + GM: 150 g de pan blanco más 24 g de GM (3 gominolas); y (iii) pan blanco + GMM: 150 g de pan blanco más 24 g de GMM (3 gominolas). Cada participante servirá como su propio control. En cada día de estudio (control, GM, GMM), se tomará una muestra basal en ayunas (tiempo 0) antes de la ingestión de la comida de prueba. Las visitas ocurrirán en días separados, con una semana de diferencia, bajo condiciones preprueba estandarizadas (ayuno nocturno, horario matutino fijo y restricciones dietéticas/de actividad preespecificadas).

Condición de control y mitigación del sesgo de expectativa Nuestra condición de control utilizará el día solo de pan blanco como control sin maqui para las respuestas glucémicas y antioxidantes. Las intervenciones añadirán 24 g de gominolas (3 unidades) a la misma carga de pan. Los investigadores no incluirán una "gominola placebo" separada porque el estudio es un piloto diseñado en torno a un control objetivo de pan blanco, y producir una gominola sin polifenoles sensorialmente indistinguible es desafiante (pigmentos/sabor del maqui); incluso GM frente a GMM difirieron en olor y sabor en nuestras pruebas sensoriales, sugiriendo que el enmascaramiento con una matriz placebo probablemente sería imperfecto. Para limitar los efectos de expectativa y mitigar posibles sesgos, los investigadores: (i) utilizarán puntos finales objetivos (glucemia/insulina/GLP-1; TRAP, SOD, CAT); (ii) aplicarán condiciones preprueba estandarizadas (12 h de ayuno; pruebas matutinas a horas fijas; restricciones dietéticas/de actividad con adherencia documentada); y (iii) implementarán períodos de lavado de una semana entre intervenciones. Todas las comparaciones serán intrapersonales en relación con el control de pan blanco.

Procedimientos de muestras de sangre Se recolectarán muestras de sangre de los participantes después de un ayuno nocturno de 12 h al inicio de cada intervención y durante un período de 2 h. Las muestras se recolectarán en tubos de heparina sódica (concentración final del 0,1%). Para determinaciones de insulina y GLP-1, la sangre se centrifugará a 2000× g durante 10 minutos a 4 °C y el sobrenadante se congelará a -80 °C. Para las mediciones del estado antioxidante, el plasma se separará de los glóbulos rojos mediante centrifugación a 1500× g durante 1 min a 4 °C. El plasma se congelará inmediatamente a -80 °C para análisis posteriores del poder antioxidante reactivo total (TRAP), mientras que los glóbulos rojos se lavarán con albúmina sérica bovina (BSA), centrifugando 3 veces a 1500× g durante 15 minutos, descartando el sobrenadante cada vez. Antes del almacenamiento a -80 °C, los glóbulos rojos se diluirán con una solución hipotónica para catalasa (CAT, relación 1:10) y superóxido dismutasa (SOD, relación 1:28) para análisis posteriores.

Biomarcadores del estado antioxidante Poder Antioxidante Reactivo Total (TRAP) Brevemente, se mezclarán 10 µL de sobrenadante con una mezcla 1:1 de 150 µM de ácido 2,2'-azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico) y 10 mM de 2,2'-azobis(2-amidinopropano), previamente incubados a 45 °C durante 30 minutos. La cinética se determinará a 734 nm a los 10, 30 y 50 segundos después de añadir la muestra. La capacidad antioxidante se medirá comparándola con Trolox®.

Medición de proteína total La cuantificación de proteína total se realizará utilizando eritrocitos para normalizar la actividad enzimática de SOD y CAT. Para esto, se utilizará el Kit de Ensayo de Proteínas BCA Pierce (Thermofisher), basado en una curva de albúmina hecha a partir de un Estándar de Albúmina (Thermofisher). Todos los protocolos se utilizarán según las instrucciones del fabricante.

Superóxido dismutasa (SOD) Este ensayo se basa en la reducción del citocromo c por el radical superóxido en un sistema xantina/xantina oxidasa. Brevemente, 5 µL de muestras homogeneizadas se mezclarán con 0,5 mM de xantina (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) y 20 µM de citocromo C (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) disueltos en un tampón fosfato. Esta solución se mezclará con xantina oxidasa (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) y 0,1 mM de EDTA (1:40). La actividad enzimática se detectará a 550 nm en un espectrofotómetro Rayleigh UV-2601. Cada muestra se analizará por triplicado.

Catalasa (CAT) La actividad de la catalasa se determinará midiendo la pérdida de absorbancia a 240 nm de una mezcla de reacción que consiste en 100 µL de H2O2 0,3 M (Merck, Darmstadt, Alemania) en 2,9 mL de tampón fosfato (50 mM Na2HPO4 y 50 mM NaH2PO4, pH 7,8) y 50 µL de muestras. Las mediciones se realizarán durante 90 segundos en un espectrofotómetro Rayleigh UV-2601. Cada muestra se analizará por triplicado.

Glucosa, Insulina y GLP-1 Se obtendrán muestras capilares de sangre del dedo del participante utilizando tiras reactivas de glucosa (One Touch II) antes de consumir el pan blanco (tiempo 0) y después del consumo con o sin las gominolas (a los 15, 30, 60, 90 y 120 minutos). Se obtendrán muestras de sangre para concentraciones de insulina en los puntos de tiempo 0 y 120 minutos, que se medirán utilizando un inmunoensayo de quimioluminiscencia según las recomendaciones del fabricante. Los niveles plasmáticos humanos de GLP-1 se medirán a 0 y 120 minutos utilizando el Kit ELISA de GLP-1 (BMS2194; ThermoFisher Scientific) siguiendo las instrucciones del fabricante. El área incremental bajo la curva (AUC) cada 120 minutos de glucosa plasmática, insulina y GLP-1 se calculará utilizando la regla trapezoidal considerando los valores en ayunas como línea base.

Análisis estadístico Tamaño de muestra y potencia: Este estudio se concibió como una intervención aguda en fase temprana, dentro del mismo sujeto, en la que cada participante sirvió como su propio control a través de tres condiciones (línea base, GMM, GM) con un período de lavado de una semana. Dada la eficiencia de los diseños dentro del mismo sujeto, los investigadores planean un tamaño de muestra modesto (n = 10 completadores). Un análisis de sensibilidad indica que, para comparaciones pareadas de dos colas con α = 0,05 y 80% de potencia, n = 10 puede detectar un efecto estandarizado grande dentro del sujeto de aproximadamente dz de Cohen ≈ 0,9-1,0. Se utilizará la prueba de Shapiro-Wilk para confirmar la normalidad de los datos. Se utilizarán correlaciones de rangos de Spearman dentro de cada condición de intervención (analizando GM y GMM por separado) para examinar asociaciones entre exposiciones glucémicas, insulinémicas y de GLP-1 posprandiales (AUC glucémica, AUC de insulina y AUC de GLP-1), y variables relacionadas con antioxidantes: actividad SOD, TRAP plasmático (TEAC), actividad de catalasa e ingestas dietéticas del FFQ (vitamina C, vitamina E, carotenos, polifenoles totales y fibra). Los investigadores reportarán el coeficiente de Spearman y valores p de dos colas (n = 10). Dada la naturaleza piloto y generadora de hipótesis del estudio, los análisis serán exploratorios y no implican causalidad; no se aplicarán ajustes por multiplicidad. Las comparaciones múltiples se realizarán utilizando la prueba de Kruskal-Wallis asumiendo un valor p menor de 0,05 como significativo. Todos los análisis se realizarán con el software GraphPad Prism versión 9.0.