Vyšetřování oxidačního stresu u apendektomie - otevřená versus laparoskopická v dětství a dospívání (OSAE)

Cíl studie: V plánované prospektivní randomizované studii bude zkoumán oxidační stres analýzou VOC (těkavých organických sloučenin) ve vydechovaném dechu u dětí podstupujících otevřenou nebo laparoskopickou operaci apendicitidy na Klinice dětské a dorostové chirurgie LF MU. z Grazu. Výsledné lepší pochopení efektů operační techniky může a) být předpokladem pro optimalizované operační nastavení a b) případně vést k doporučení před- nebo perioperačně antioxidačně aktivních látek a c) být podkladem pro budoucí operační výkony.

Uspořádání studie: Toto je prospektivní randomizovaná pilotní studie u dětí a dospívajících podstupujících chirurgický zákrok kvůli akutní apendicitidě. Pacienti s komplikovanou apendicitidou a pacienti s peroperačně způsobenou poruchou budou vyloučeni. Operaci v rámci této studie provádějí výhradně specialisté Kliniky dětské a dorostové chirurgie Lékařské univerzity v Grazu, kteří provádějí jak otevřené, tak laparoskopické operační techniky. Má být zahrnuto 40 pacientů ve věku 6-18 let trpících akutní apendicitidou. Ty jsou rozděleny do 2 skupin. Skupina 1 (n = 20) s laparoskopickou a skupina 2 (n = 20) s otevřenou apendektomií.

Nábor a odměňování účastníků studie: Rodiče/pacienti jsou informováni o studii prostřednictvím informačního listu a v případě zájmu je jim poskytnuto prohlášení o souhlasu. Účastníci nedostávají žádnou odměnu za účast ve studii.

Odběr vzorků vydechovaných VOC (těkavé organické sloučeniny) pomocí NTME (mikroextrakce jehlovou pastí) pro měření OS (oxidační stres): Počet vzorků: 2 vzorky každý z vydechovaného dechu v časech definovaných níže (celkem n = 12). Doba odběru vzorků: t1 před zavedením anestetika (n = 2); t2 po zavedení anestetika (n = 2); t3 15 minut po řezu (n = 2); t4 30 minut po řezu (n = 2); t5 45 minut po řezu (n = 2); t6 po švu (n = 2).

Analýza vydechovaných VOC pro měření OS: Odebrané vzorky vydechovaného vzduchu se umístí do injektoru plynového chromatografu do proudu inertního nosného plynu (He). Látky jsou přiřazeny podle jejich retenčního času v chromatogramu a jeho hmotnostního spektra. Neznámé souvislosti v hmotnostním spektru vydechovaného dechu jsou použity jako základ pro srovnání s referenční databází.

Odběr krevních markerů pro měření OS: a) doby odběru bílých krvinek, CRP: t1 = 1 vzorek před operací (před zavedením anestetika) a t2 = 1 vzorek po 24 hodinách. b) doby odběru pro malondialdehyd: t1 = 1 vzorek před zavedením anestetika a t2 = 1 vzorek po sešití.

Histopatologické hodnocení: Explantovaný červovitý apendix se stává histopatologickou rekonstrukcí na Ústavu patologie Lékařské univerzity v Grazu. Tam je klasifikace provedena podle histopatologického nálezu ve 4 stupních závažnosti (akutní fokální apendicitida, akutní hnisavá apendicitida, akutní gangrenózní apendicitida, perforovaná apendicitida).

Odběry WBC, CRP: Provádějí se v rámci rutinní diagnostiky vzhledem ke klinickému obrazu AA (akutní apendicitida).

Odběr vzorků VOC: Každému pacientovi jsou během výdechu odebrány 2 vzorky dechu, které jsou z něj odebrány. K odběru vzorků používají vyšetřovatelé automatické vzorkovací zařízení připojené přímo ke kapnometru. Tento systém pracuje s mikroextrakce (NTME) a ​​umožňuje automatické vzorkování alveolárního vzduchu, tedy v plató křivky CO2. Vzorky jsou zasílány do ústavu Rostock Medical Breath Analysis and Technologies (RoMBAT) jako spolupracujícího partnera. Tento partner byl vybrán, protože již má rozsáhlé zkušenosti s metodikou a studiemi oxidačního stresu během operací.

Odběr vzorků malondialdehydu (MDA): Malondialdehyd je analyzován v Klinickém ústavu pro lékařskou a chemickou laboratorní diagnostiku Lékařské univerzity v Grazu pomocí ultramoderní metody GC-MS. Za tímto účelem je pacientovi přiřazeny dvě doby měření 2 x 400 μl odebrané plazmy EDTA. Druhý vzorek slouží pouze jako bezpečnostní opatření, pokud je nutné opakovat měření. Získané vzorky musí být hluboce zmraženy na -80 °C do 2 hodin. . Následně (nejpozději následující den) musí být vzorky analyzovány do Ústavu.

Plánované vyhodnocení: Statistická šetření se provádějí pomocí SPSS 23.0®. Grafické znázornění dat se provádí pomocí GraphPad Prism 7®. Aby se zjistilo, zda se hlavní cílové proměnné (VOC) liší v průběhu mezi těmito dvěma skupinami, používají se lineární modely pro opakovaná měření se skupinou (otevřená versus laparoskopická apendektomie) jako středním subjektivním faktorem a časem měření (t1 až t6) jako interním subjektem. faktor. V případě odchylek od normálního rozdělení se berou v úvahu transformace. Sekundární cíle, tj. změny v sérových markerech v časech t1 a t6, se porovnávají mezi 2 skupinami (otevřená versus laparoskopická apendektomie) Mann-Whitney U-testem (data nejsou normálně distribuována) nebo nezávislým T-testem (s normálním rozdělení). Za účelem stanovení vztahů mezi VOC a sérovými markery pro oxidační stres v časech t1 a t6 se provádí korelační analýza (v závislosti na datech, Pearson nebo Spearman Rho). Všechny statistické testy jsou prováděny na dvou stranách a všechny p-hodnoty jsou interpretovány čistě explorativně.