Indagine sullo stress ossidativo nell'appendicectomia - aperta contro laparoscopica nell'infanzia e nell'adolescenza (OSAE)

Scopo dello studio: nello studio prospettico randomizzato pianificato, lo stress ossidativo sarà indagato analizzando i VOC (composti organici volatili) nel respiro espirato nei bambini sottoposti a chirurgia aperta o laparoscopica per appendicite presso il Dipartimento di Chirurgia Pediatrica e dell'Adolescenza dell'Università di Medicina di Graz. Una conseguente migliore comprensione degli effetti della tecnica chirurgica può a) essere una precondizione per un setting chirurgico ottimizzato e b) possibilmente portare a raccomandazioni di sostanze antiossidante attive pre o perioperatorie e c) essere una base per future procedure chirurgiche.

Disegno dello studio: si tratta di uno studio pilota prospettico randomizzato su bambini e adolescenti sottoposti a intervento chirurgico a causa di appendicite acuta. Saranno esclusi i pazienti con appendicite complicata e quelli con un disturbo causato intraoperatoriamente. L'operazione nell'ambito di questo studio è condotta esclusivamente da specialisti del Dipartimento di Chirurgia Pediatrica e dell'Adolescenza dell'Università di Medicina di Graz, che eseguono sia tecniche chirurgiche aperte che laparoscopiche. Devono essere inclusi 40 pazienti di età compresa tra 6 e 18 anni affetti da appendicite acuta. Questi sono divisi in 2 gruppi. Gruppo 1 (n = 20) con laparoscopica e gruppo 2 (n = 20) con appendicectomia aperta.

Reclutamento e remunerazione dei partecipanti allo studio: I genitori/pazienti vengono messi a conoscenza dello studio mediante foglio informativo e se interessati ricevono una dichiarazione di consenso. I partecipanti non ricevono alcun compenso per la partecipazione allo studio.

Campionamento di COV esalati (composti organici volatili) mediante NTME (microestrazione con ago a trappola) per la misurazione dell'OS (stress ossidativo): Numero di campioni: 2 campioni ciascuno dal respiro esalato ai tempi definiti di seguito (in totale n = 12). Il tempo di campionamento: t1 prima dell'introduzione dell'anestetico (n = 2); t2 dopo l'introduzione dell'anestetico (n = 2); t3 15 minuti dopo il taglio (n = 2); t4 30 minuti dopo il taglio (n = 2); t5 45 minuti dopo il taglio (n = 2); t6 dopo la cucitura (n = 2).

Analisi dei COV esalati per la misurazione dell'OS: i campioni di respiro esalato prelevati vengono inseriti in un iniettore di un gascromatografo nel flusso di gas di trasporto inerte (He). Le sostanze sono assegnate in base al loro tempo di ritenzione nel cromatogramma e al suo spettro di massa. Le connessioni sconosciute nello spettro di massa del respiro espirato vengono utilizzate come base per il confronto con un database di riferimento.

Campionamento dei marcatori ematici per la misurazione dell'OS: a) tempi di campionamento per globuli bianchi, CRP: t1 = 1 campione prima dell'intervento (prima dell'introduzione dell'anestetico) e t2 = 1 campione dopo 24 ore. b) tempi di campionamento per la malondialdeide: t1 = 1 campione prima dell'introduzione dell'anestetico e t2 = 1 campione dopo la sutura.

Gradazione istopatologica: l'appendice vermiforme espiantata diventa la revisione istopatologica presso l'Istituto di Patologia dell'Università di Medicina di Graz. Lì la classificazione è fatta secondo i reperti istopatologici in 4 gradi di gravità (appendicite acuta focale, appendicite acuta suppurativa, appendicite gangrenosa acuta, appendicite perforata).

Campionamento GB, PCR: vengono eseguiti nell'ambito della diagnostica di routine a causa della presentazione clinica dell'AA (appendicite acuta).

Campionamento COV: vengono prelevati 2 campioni di respiro da ciascun paziente durante l'espirazione, prelevati da esso. Per raccogliere i campioni, gli investigatori utilizzano un dispositivo di campionamento automatico collegato direttamente a un capnometro. Questo sistema funziona con microestrazione (NTME) e consente un campionamento automatico dell'aria alveolare, cioè nel plateau della curva di CO2. I campioni vengono inviati all'Institute of Rostock Medical Breath Analysis and Technologies (RoMBAT) come partner di cooperazione. Questo partner è stato selezionato perché ha già una vasta esperienza con la metodologia e gli studi sullo stress ossidativo durante le operazioni.

Campionamento della malondialdeide (MDA): La malondialdeide viene analizzata presso l'Istituto Clinico per la Diagnostica di Laboratorio Medico e Chimico dell'Università di Medicina di Graz mediante il modernissimo metodo GC-MS. A tale scopo, il paziente viene assegnato ai due Tempi di misurazione 2 x 400 μl di plasma EDTA presi. Il secondo campione serve solo come misura di sicurezza se sono necessarie misurazioni ripetute. I campioni ottenuti devono essere surgelati a -80 °C entro 2 ore. . Successivamente (al più tardi il giorno successivo) i campioni devono essere analizzati all'Istituto.

Valutazione pianificata: le indagini statistiche vengono eseguite con SPSS 23.0®. La rappresentazione grafica dei dati viene eseguita con GraphPad Prism 7®. Per verificare se le principali variabili target (VOC) differiscono nel decorso tra i due gruppi, vengono utilizzati modelli lineari per misurazioni ripetute con il gruppo (aperta o appendicectomia laparoscopica) come fattore soggetto intermedio e il tempo di misurazione (da t1 a t6) come soggetto interno fattore. In caso di deviazioni dalla distribuzione normale, vengono prese in considerazione le trasformazioni. I bersagli secondari, ovvero le variazioni dei marcatori sierici sui tempi t1 e t6, vengono confrontati tra i 2 gruppi (appendicectomia aperta vs laparoscopica) mediante U-test di Mann-Whitney (dati non distribuiti normalmente) o T-test indipendente (con normale distribuzione). Al fine di stabilire relazioni tra i COV ei marcatori sierici per lo stress ossidativo ai tempi t1 e t6 viene eseguita un'analisi di correlazione (a seconda dei dati, Pearson o Spearman Rho). Tutti i test statistici vengono eseguiti su due lati e tutti i valori p vengono interpretati in modo puramente esplorativo.