Autologní mononukleární buňky periferní krve u pacientů s diabetickou nohou s kritickou ischemií končetin bez možnosti volby

Jedná se o intervenční studii s historickou kontrolní skupinou, která byla provedena s cílem posoudit jako primární výsledek velké amputace, celkovou mortalitu, počet vyléčených pacientů ve skupině pacientů, kteří dostali opakovaný intramuskulární implantát PBMNC (3krát; 4týdenní interval) ve srovnání na historickou interní kontrolní skupinu s poměrem případ-kontrola 1:1. Sekundárními výsledky jsou TCPO2, doba hojení a klidová bolest.

Kritická ischemie končetiny bez možnosti volby je definována důkazem, že nedochází k odtoku pedálních cév, selháním po několika perkutánních intervencích a již není možný opakovaný zásah, selháním po infragenikulárním bypassu, schopností nechodit se závažnými komorbiditami nevhodnými k chirurgickému nebo endovaskulární procedury.

Kritéria pro zařazení jsou: a) vředy s nedostatečnou perfuzí, jak ukazuje hodnota transkutánního tlaku kyslíku (TcpO2) <30 mmHg; b) vředy se stupněm I nebo II nebo III a stupněm C, jak je definováno Texaským univerzitním klasifikačním systémem nebo W1,2,3 - I 3 - FI 0,1, jak je definováno klasifikačním systémem WiFI c) nevhodné pro angioplastiku nebo vaskulární operaci nebo po neúspěšné revaskularizaci; d) možnost šetřit oporu nohou.

Kritéria vyloučení jsou: a) místo léze nad tibiálně-tarzálním kloubem; b) středně závažná nebo závažná infekce podle klasifikačního systému WiFi; c) třída NYHA IV; d) Anémie (Hb<8g/dl); e) porucha koagulace/trombocytopenie (PLT < 50 000 na mikrolitr); f) aktivní rakovina/leukémie nebo lymfomové hematologické onemocnění.

Standardní péče v obou skupinách zahrnuje: maximalizaci kontroly diabetu diabetologem, komplexní posouzení nohy sestrou spolu s diabetologem včetně stanovení prahu vnímání vibrací, 10g monofilamentový test a měření TcpO2, převazy, offloading a systémovou terapii podle směrnic IWGDF .

Informovaný souhlas s účastí ve studii v průběhu klinického hodnocení je získán od všech subjektů.

Koncentrace autologní buněčné terapie PB-MNC je vyráběna filtračním bodovým zařízením s určením pro intraoperační použití ze 120 ml antikoagulované krve. Všechny výkony jsou prováděny na operačním sále s anesteziologickou podporou (propofol a/nebo periferní blok). Odběr krve (120 ml) se odebere periferním žilním přístupem, poté se zavede a po asi 10 minutách se umožní gravitační filtrace. Během filtrace jsou MNC zachyceny ve filtru, zatímco plazma, krevní destičky (PLT) a červené krvinky (RBC) nejsou zadržovány. Po vhodném chirurgickém debridementu spodiny rány se vstřikují četné perilezionální a intramuskulární injekce suspenze buněk PBMNC (0,2–0,3 cm3 v bolusech) podél příslušné osy pod kolenem, v intervalech 1–2 cm a do průměrné hloubky 1,5– 2 cm pomocí jehly 21G. Tento postup se opakuje u každého pacienta třikrát, ve vzájemných intervalech 30-45 dnů.

Operace šetřící nohu, odstranění veškeré neživotaschopné tkáně a rekonstrukce nohy umožňující funkční deambulaci se provádí současně s posledním implantátem u pacientů se zvýšenou hodnotou TcpO2 nad 30 mmHg. Mezi implantáty diabetologové spolu se sestrami hodnotili změnu bolesti, příznaky infekce, velikost rány, ohraničení nekrózy, tvorbu granulační tkáně, trofismus perilezionální tkáně a hodnotu TcpO2 pro optimalizaci standardu péče. Po prvním ošetření je registrováno dvouleté sledování s hodnocením 1-3-6-12-18-24 měsíců.

Provádí se základní hodnocení, aby se odhadly případné rozdíly mezi případy a kontrolami před léčbou. Statistické vyhodnocení zahrnuje neparametrické testy (Mann-Whitney U test pro nezávislé výběry pro spojité proměnné a Cochranův chí-kvadrát test pro diskrétní proměnné), vyhodnocení relativního rizika (RR), absolutního snížení rizika (ARR), snížení relativního rizika (RRR ) a Number Needed to Treat (NNT), multivariační analýza přežití (Kaplan-Meierův model analýzy přežití).