EBV-specifické CTL po protilátce CD45 pacientům s virem Epstein-Barrové (EBV) + nasofaryngeálním karcinomem (NPC) (CLANC)

Budou hodnoceny tři různé dávky CTL: úroveň dávky I: 2 x 10e7/m2; dávkový stupeň II: 5 x 10e7/m2; dávkový stupeň III: 1 x 10e8/m2

1. den YTH 24/54 800 ug/kg během 8 hodin; 2. den YTH 24/54 800 ug/kg během 8 hodin; Den 3 Odpočinek; Den 4-6 CTL infuze (za předpokladu hladiny CD45 Mab <100 ug/ml).

Generování EBV-specifických CTL

Po odsouhlasení samostatného odběrového protokolu pro přípravu CTL pacient daruje až 60-70cc periferní krve. Z toho 10-20 ccm bude použito pro vytvoření EBV transformované lymfoblastoidní buněčné linie (EBV-LCL) infekcí virem produkovaným z kmenové buněčné linie B95-8. Vytvoření EBV-LCL bude trvat přibližně čtyři až šest týdnů. K vytvoření EBV specifických CTL se použije 30-40 cm3 periferní krve. CTL linie bude připravena kokultivací ozářeného EBV-LCL s PBMC pacienta. Po založení budou CTL linie zkontrolovány na identitu, fenotyp a mikrobiologickou kulturu a před podáním budou kryokonzervovány podle SOP. Antigenní specificita každé CTL linie bude stanovena v testu cytotoxicity a pokud možno s tetramerovými činidly.

CD45 monoklonální protilátky

Anti-CD45 je kombinace ve stejném množství (hmotnost na objem) dvou monoklonálních protilátek, které jsou zaměřeny na nepřekrývající se epitopy na lidském CD45. Je to purifikovaný, koncentrovaný a sterilní gamaglobulin, primárně monomerní IgG, produkovaný ze supernatantu dvou krysích IgG2b hybridomových klonů, YTH 24 a YTH 54. Hybridomy byly produkovány jako fúze mezi splenocyty z DA krys imunizovaných lidskými leukocyty a krysí myelomovou linií Y3. Kombinace dvou MAb vykazuje in vitro synergický účinek na komplementem zprostředkovanou cytotoxicitu bílých krvinek a bylo prokázáno, že před transplantací odstraňuje téměř všechny cestující leukocyty z ledvin dárce. Anti-CD45 Mabs byly vyrobeny za podmínek cGMP v Therapeutic Antibody Center v Oxfordu a na Baylor College of Medicine a projdou bezpečnostními testy požadovanými FDA.

Podávání buněk

Pacienti budou premedikováni difenhydraminem 1 mg/kg IV (max. 50 mg) a acetaminofenem 10 mg/kg po (max. 650 mg). EBV specifické T buňky budou podávány intravenózní injekcí po dobu 1-10 minut buď periferní nebo centrální linií. Ambulantní pacienti mohou být léčeni na klinice. Monitorování bude prováděno podle institucionálních standardů pro podávání krevních produktů s tou výjimkou, že injekci bude podávat lékař. Podle potřeby budou každému pacientovi předepsána antiemetika ve vhodné dávce. Pacientům bude poskytnuta podpůrná péče pro akutní nebo chronickou toxicitu, včetně krevních složek nebo antibiotik, a případně další intervence.

Podávání protilátek

Pacienti budou premedikováni difenhydraminem 1 mg/kg IV (max. 50 mg) a acetaminofenem 10 mg/kg po (max. 650 mg). 800 ug/kg CD45 Mabs bude podáváno jako 2 denní intravenózní infuze po dobu 8 hodin. Alikvotní část protilátky, která má být podána infuzí, dorazí do ošetřované oblasti v ruce ošetřujícího lékaře nebo jmenovaného určeného. Alikvot protilátky bude naředěn v minimálních množstvích normálního fyziologického roztoku. Výsledný roztok je stabilní po dobu 24 hodin. Roztok protilátky je podáván injekční pumpou v přírůstkových dávkách, 0,2-0,8 mg během první hodiny a poté až 10 mg/h, celková doba infuze je maximálně 6 hodin. K dispozici musí být registrovaná sestra a lékař.