CTL specyficzne dla EBV po przeciwciałach CD45 u pacjentów z wirusem Epsteina-Barr (EBV) + rakiem nosogardła (NPC) (CLANC)

Oceniane będą trzy różne dawki CTL: poziom dawki I: 2 x 10e7/m2; poziom dawki II: 5 x 10e7/m2; poziom dawki III: 1 x 10e8/m2

Dzień 1 YTH 24/54 800ug/kg przez 8 godzin; Dzień 2 YTH 24/54 800 ug/kg przez 8 godzin; Dzień 3 Odpoczynek; Wlew CTL dnia 4-6 (pod warunkiem, że poziom Mab CD45 <100 ug/ml).

Generowanie CTL specyficznych dla EBV

Po wyrażeniu zgody na odrębny protokół pobrania krwi do przygotowania CTL pacjent oddaje do 60-70 cm3 krwi obwodowej. 10-20 cm3 tego zostanie użyte do ustanowienia linii komórek limfoblastoidalnych transformowanych EBV (EBV-LCL) przez infekcję wirusem wytwarzanym z głównej linii komórkowej B95-8. Ustanowienie EBV-LCL zajmie około czterech do sześciu tygodni. 30-40 cm3 krwi obwodowej zostanie użyte do wygenerowania CTL swoistych dla EBV. Linia CTL zostanie przygotowana przez wspólną hodowlę napromienionego EBV-LCL z PBMC pacjenta. Po ustanowieniu linie CTL zostaną sprawdzone pod kątem tożsamości, fenotypu i kultury mikrobiologicznej oraz poddane kriokonserwacji przed podaniem zgodnie z SOP. Specyficzność antygenowa każdej linii CTL zostanie określona w teście cytotoksyczności i, jeśli to możliwe, za pomocą odczynników tetramerowych.

przeciwciała monoklonalne CD45

Anty-CD45 jest połączeniem w równych ilościach (wagowo do objętości) dwóch przeciwciał monoklonalnych, które są skierowane na nienakładające się epitopy na ludzkim CD45. Jest to oczyszczona, skoncentrowana i sterylna gamma globulina, głównie monomeryczna IgG, wytwarzana z supernatantu dwóch szczurzych klonów hybrydoma IgG2b, YTH 24 i YTH 54. Hybrydomy wytworzono jako fuzje splenocytów ze szczurów DA immunizowanych ludzkimi leukocytami i linią szczurzego szpiczaka Y3. Kombinacja dwóch MAb wywiera synergistyczny wpływ in vitro na cytotoksyczność krwinek białych zależną od dopełniacza i wykazano, że usuwa prawie wszystkie leukocyty pasażerskie z nerek dawcy przed przeszczepem. Mabs anty-CD45 zostały wytworzone w warunkach cGMP w Therapeutic Antibody Center w Oksfordzie oraz w Baylor College of Medicine i przejdą pomyślnie testy bezpieczeństwa wymagane przez FDA.

Administracja komórkowa

Pacjenci otrzymają premedykację difenhydraminą 1 mg/kg dożylnie (maks. 50 mg) i acetaminofenem 10 mg/kg doustnie (maks. 650 mg). Komórki T swoiste dla EBV będą podawane przez wstrzyknięcie dożylne przez 1-10 minut przez linię obwodową lub centralną. Pacjenci ambulatoryjni mogą być leczeni w poradni. Monitorowanie będzie prowadzone zgodnie ze standardami instytucjonalnymi dotyczącymi podawania produktów krwiopochodnych, z wyjątkiem tego, że zastrzyk będzie wykonywany przez lekarza. W razie potrzeby zostaną przepisane leki przeciwwymiotne w odpowiednich dawkach dla każdego pacjenta. Pacjenci otrzymają leczenie wspomagające w przypadku ostrej lub przewlekłej toksyczności, w tym składniki krwi lub antybiotyki, oraz inne odpowiednie interwencje.

Podawanie przeciwciał

Pacjenci otrzymają premedykację difenhydraminą 1 mg/kg dożylnie (maks. 50 mg) i acetaminofenem 10 mg/kg doustnie (maks. 650 mg). 800 ug/kg CD45 Mab będzie podawane jako 2 dzienne wlewy dożylne przez 8 godzin. Podwielokrotna porcja przeciwciała, która ma być podana we wlewie, zostanie dostarczona do leczonego obszaru, niesiona ręcznie przez lekarza prowadzącego lub wyznaczoną osobę. Podwielokrotność przeciwciała zostanie rozcieńczona w minimalnej ilości normalnej soli fizjologicznej. Otrzymany roztwór jest stabilny przez 24 godziny. Roztwór przeciwciała podaje się za pomocą pompy strzykawkowej w dawkach przyrostowych, 0,2-0,8 mg w ciągu pierwszej godziny, a następnie do 10 mg/h, przez całkowity czas infuzji maksymalnie 6 godzin. Dyplomowana pielęgniarka i lekarz muszą być łatwo dostępni.